Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Оптическая система для освещения в темном поле - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Эффект темного поля можно получить двумя основными способами. В системе, использующейся главным образом в бактериологии и цитологии, применяют специальный конденсор, который образует конус света, направленный вершиной к препарату и сходящийся на образце снизу. Во втором способе, предназначенном для исследования оптически не прозрачных материалов, используют осветители, с помощью которых свет направляется сверху через линзы объектива или минуя их. Этот метод освещения более удобен, он может не только быстро сменяться обычным способом, но и использоваться одновременно с ним. При быстром переходе от темного поля к светлому нелегко точно перенести мысленную картину распределения зерен на срез, поэтому совмещение обоих способов освещения является наиболее благоприятным вариантом.
При освещении образца сверху можно использовать две оптические системы. В одной конус света направляется на объект через кольцеобразное устройство, окружающее линзу объектива, в другой — непосредственно через объектив. Обе системы схематически представлены на рис. 28.
Различие в применении этих двух систем существенно. Для первого, конвергентного, единственное удовлетворительное оборудование производится фирмой «Лейтц» и известно как система Ультропак 1. Она предназначена для изучения оптически плотных образцов и не назначалась для исследования срезов, покрытых стеклом. Для специфических задач гистоавторадиографии пригодность отдельных объектов системы Ультропак значительно варьирует в зависимости от численной апертуры (ч.а).
Удовлетворительный эффект темного поля можно получить с объективом Х6,5 (ч. а. 0,18).

1 Конвергентное освещение используется для получения эффекта темного поля в отечественном микроскопе МЛ-2, с помощью которого можно получить достаточно хорошие результаты при изучении авторадиограмм в темном поле. — Прим. ред.

Однако этот объектив имеет значительное фокусное расстояние и свет может отражаться от царапин и других дефектов на верхней поверхности покровного стекла. Этот недостаток устраним, если использовать объектив с погружным конусом, который превращает его в сущности в иммерсионную систему. Объектив Х22 (ч.а. 0,45) дает вполне удовлетворительную возможность обзорного исследования авторадиограмм: фокусное расстояние его меньше, и нет необходимости использовать погружной конус.

Рис. 28. Схема, иллюстрирующая прохождение света при разных способах освещения в темном поле сверху:
а —система Лейтц Ультропак — световой поток конвергируется на срез сверху; б — вертикальная система — освещающий пучок направляется через объектив.
Увеличение численной апертуры до 0.65 при объективе Х50 ухудшает картину темного поля: световой сигнал от зерен серебра ослабляется, а окружающее их поле перестает быть черным. Зато объективы с масляной иммерсией Х75 и Х100 (ч.а. 1,0) дают отличную картину ярких зерен серебра на черном фоне.
С увеличением численной апертуры возрастает доля светового потока, которая отражается от верхней поверхности покровного стекла, не проникая в эмульсию. При использовании иммерсионных объективов освещающий пучок диафрагмируется кривой латеральной поверхностью иммерсионного масла так, что он входит через верхнюю поверхность покровного стекла в направлении, которое намного ближе к вертикали, чем можно

ожидать. Это в сочетании с наиболее эффективным концентрированием света дает значительное улучшение изображения при использовании иммерсионных объективов с большой численной апертурой.
Весьма большое количество света отражается срезом при использовании конденсора темного поля и системы Ультропак. Во многих случаях этого отраженного света достаточно, чтобы проследить контуры структур в срезе, и нет необходимости дополнять исследование в темном поле микроскопией в проходящем свете. Если в этом случае желательно получить истинный эффект темного поля, следует отвести верхнюю линзу конденсора в сторону от оптической оси или опустить весь конденсор —это приводит к исчезновению бликов от верхней поверхности конденсора.
Второй тип системы, дающей темное поле при освещении образца сверху, — вертикальный осветитель, в котором свет направляется через линзы объектива. Однако таким образом не удается получить удовлетворительный эффект темного поля, за исключением применения объективов с масляной иммерсией и высоким апертурным числом. Помимо этого при использовании полевой диафрагмы можно ограничить площадь освещения эмульсии только исследуемым участком. Как будет показано в гл. 9, это имеет практическое значение при конструировании фотометрических приборов для подсчета зерен серебра. Однако для обычного изучения и микрофотосъемки гистоавторадиограмм освещение с конвергированным конусом более предпочтительно.
Таким образом, использование объективов Ультропак для исследования зернистых авторадиограмм в темном поле позволяет увидеть зерна серебра как блестящие пятна на темном фоне при условии, что не применяются методики окрашивания, сопровождающиеся отложением металла в ткани, а также некоторые гистохимические реакции на энзимы, при которых образуются отражающие свет преципитаты. Это позволяет применять эмульсии с небольшим размером зерен и идентифицировать тонкие детали в клетках с интенсивным включением метки. В то же самое время этот метод позволяет отмечать небольшие сильно окрашенные гранулы хроматина в срезе от зерен серебра.
Кроме того, можно изучать общий характер распределения зерен серебра над срезом при малом увеличении в тех случаях, когда эти зерна даже при большом увеличении имеют небольшой размер (см. рис. 27, а и б).



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »