Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Микрофотография зернистых авторадиограмм - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Если освещение в темном поле при исследовании гистоавторадиограмм полезно, то при их микросъемке оно неоценимо. На примере рис. 27 видно, что можно фотографировать срез при относительно небольшом увеличении и получать такие же хорошие отпечатки, как и при съемке одного гистологического препарата. Очевидна возможность съемки зерен серебра без среза. Наконец, можно делать композиционные снимки, в которых зерна серебра в виде светлых пятнышек ясно различимы на фоне окрашенного среза. При малом увеличении глубина резкости достаточна для того, чтобы как срез, так и треки были резкими при одномоментной съемке. Этот тип изображения—наилучший при одновременном использовании проходящего света и освещения в темном поле. Может оказаться, что требуется использовать очень слабое освещение в светлом поле или же эффект темного поля очень ослаблен, и гранулы серебра очень плохо различимы. Лучший метод избежать этого — подобрать две освещающие системы под непосредственным визуальным контролем с последующей съемкой при достижении наиболее благоприятного соотношения.
Этот процесс сбалансирования освещения нельзя облегчить, применяя экспонометры и автоматические камеры. Если уменьшить интенсивность проходящего света, чтобы выделить зерна серебра, то автоматическая камера ответит увеличением времени экспозиции. Можно «обмануть» камеру, давая ложную информацию. Большинство микрофотографий в этой книге сделано на высококонтрастной негативной пленке Kodak, которая при светочувствительности 6 единиц ASA дает, как правило, хорошие результаты. Если установить автоматическую камеру соответственно чувствительности 12 единиц ASA, то это значительно снизит экспозицию и в результате получатся более темные отпечатки. Это идеально для микросъемки при малом увеличении со сбалансированными двумя системами освещения, так как светлые зерна серебра хорошо выделяются на темном фоне образца.
При съемке с большим увеличением для получения резкого снимка наиболее затруднительна точная фокусировка среза и зерен серебра на одном негативе. Эта проблема решается использованием двойного экспонирования — в проходящем свете и с темным полем, причем четко сфокусированные зерна серебра, видимые в темном поле, накладываются на изображение среза, полученное в проходящем свете. Однако для того чтобы увидеть достаточно деталей среза без затухания светового сигнала от зерен серебра, крайне важен правильный выбор продолжительности обеих экспозиций. Первоначально необходимо сделать несколько пробных снимков, при этом в полной мере должны использоваться экспонометры и автоматические камеры.
Если главной задачей является получение изображения зерен серебра, требуется обеспечить возможно более черный фон с ярко контрастными зернами. Время экспозиции, при которой этот эффект достигается, существенно не зависит от числа зерен в поле зрения; правильно выбранная экспозиция для одного зерна будет такой же и для сотни. Но все экспонометры и автоматические камеры связывают экспозиции с потоком света, так что если участок с сотней зерен снят с правильной выдержкой, то для участка с одним зерном будет получена значительно более продолжительная экспозиция; это отразится на плотности фона, который не будет достаточно черным.
Наилучший выход — стандартизовать насколько возможно условия освещения и обработки негатива и затем испытать различные выдержки при съемке участка с относительно небольшим количеством зерен. Экспозиция, при которой будет получен негатив с отчетливыми черными пятнами на практически белом фоне, должна использоваться во всех последующих съемках при аналогичных условиях микроскопирования и авторадиографии. В качестве грубого приближения при съемке в темном поле и использовании масляной иммерсии можно принять время экспонирования 2 мин. Существующие автоматические камеры могут указывать для аналогичного материала время экспозиции от 1 до 20 мин. и более, в зависимости от числа зерен серебра в поле зрения. Столь продолжительная экспозиция при съемке в темном поле требует полного устранения вибрации. Микроскоп лучше установить на мраморном столике. Пылевые частицы на покровном стекле, в иммерсионном масле пли на эмульсии могут выявиться на фотографии, снятой в темном поле, а пыль и царапины на негативе также трудно будет не принимать в расчет, если 90% поверхности отпечатка должно быть одинаково черным.
При микросъемке с двойным экспонированием после получения изображения в темном поле необходимо исключить смещение пленки. Освещение в темном поле заменяют освещением проходящим светом в светлом поле. Окрашенный срез тщательно фокусируют и проводят второе экспонирование. К нему приложимы те же значения, что и для микросъемки при малом увеличении. Интенсивность света не должна быть настолько высокой, чтобы сделать блестящие зерна серебра невидимыми на готовой фотографии. По данным автора хорошие результаты получаются при вдвое меньшем времени экспозиции, чем необходимое для съемки гистологического среза в проходящем свете. При использовании автоматической камеры это может быть достигнуто путем установки вдвое большего значения светочувствительности данной пленки, чем фактическое; так, для высококонтрастной негативной пленки ставится 12 единиц ASA вместо 6 единиц ASA.
На рис. 29 представлено изображение, которое может быть получено при двойном экспонировании среза ткани яичка новорожденной крысы через 24 ч после инъекции меченого тимидина. Гистоавторадиограмма приготовлена с помощью эмульсии Ilford К2 и окрашена затем гематоксилином Гарриса. Изображение получено обычным способом в проходящем свете с зернами серебра в фокусе. Снимок (а) намного лучше, что является результатом использования методики двойного экспонирования. Каждое зерно серебра ясно различимо даже при локализации над сильно окрашенными структурами, а детали среза намного отчетливее.

Рис. 29. Микрофотографии среза яичка новорожденного крысенка через 24 ч после введения тимидина-Н3 (Х600): а — зерна серебра в темном поле совмещены со структурами среза и проходящем свете методикой двойного экспонирования. Небольшие светлые зерна серебра ясно различимы на фоне темноокрашенных ядер. Оба изображения хорошо сфокусированы; б — тот же участок, сфотографированный только в проходящем свете с зернами серебра в фокусе. Очень мелкие зерна неразличимы над сильно окрашенным срезом, изображение которого размыто. Эмульсия Ilford К2. Объектив Лейтц Ультропак Х100, с зеркальным конденсором.
Окраска гематоксилином Гарриса.
Точно таким же способом можно получить цветные фотографии и диапозитивы. Прием с уменьшением времени экспозиции при съемке с двойным экспонированием до половины ее нормальной продолжительности ведет, естественно, к некоторому искажению цветопередачи на окончательном снимке. Но в авторадиографии точность воспроизведения цвета среза имеет обычно второстепенное значение по сравнению с четкой демонстрацией распределения зерен серебра.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »