Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Исследование в темном поле - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Использование освещения в темном поле для исследования ядерных эмульсий не новость.

Уомсли и Маковер [3] в 1914 г. опубликовали снимки α-треков, полученные этим методом. Однако метод не получил большой популярности среди специалистов, несмотря на очевидное его преимущество для фотометрического подсчета зерен [4—6].
Причиной этому является, по- видимому, дискуссия, развернувшаяся после опубликования статьи Гульберга [4].
Если в темном поле исследовать авторадиограммы, приготовленные для изучения в проходящем свете, часто видны многочисленные мельчайшие зерна серебра, образующие невидимый в проходящем свете фон. Причина этого станет яснее, если вернуться к рассмотрению рис. 4. На нем представлены идентичные авторадиограммы, проявленные в стандартных условиях, но в течение возрастающих промежутков времени.
В серии снимков, выполненных при освещении в темном поле, лучшим является второй (Б2); видны четкие зерна и фон относительно низок. На третьем снимке (В2) появились маленькие зерна фона, характерные для перепроявления. Во втором из серии снимков, сделанных в проходящем свете (А1, Б1), зерна серебра еще слишком малы для эффективного исследования, но на третьем снимке (Β1) они проявлены вполне удовлетворительно, причем здесь нет и намека на появление множества зерен фона.

Рис. 30. Микрофотографии среза регенерирующего сухожилия крысы через 24 ч после введения тимидина-Н3 (X 185):
а — комбинация проходящего света с освещением в темном поле, в центре видна одна сильно меченная клетка: б — тот же участок показан в темном поле, чтобы продемонстрировать низкий уровень фона, который может быть достигнут при правильном проявлении. Эмульсия Ilford К2. Объектив Лейтц Ультропак Х22.
Объекты, недостаточно крупные, чтобы быть видимыми в проходящем свете, могут наблюдаться в темном поле. Отсюда следует, что оптимальное время для проявления авторадиограмм, исследуемых в темном поле, должно быть короче, чем в том случае, когда их просматривают в проходящем свете. Проявление должно быть остановлено незадолго до появления мельчайших зерен фона. На рис. 30 показано, что при правильном проявлении уровень фона при исследовании в темном поле может быть очень небольшим.
Поэтому, если авторадиограмма предназначается для изучения в темном поле, то должен быть соответствующим и режим проявления. В этом смысле важно, чтобы методика авторадиографии соответствовала применяющейся системе микроскопии.
Но использование микроскопии в темном поле может и должно оказывать еще большее влияние на выбор методики авторадиографии. Мы уже видели, что уменьшение размеров кристаллов галоидного серебра в эмульсионном слое зернистых авторадиограмм может значительно улучшить эффективность и разрешающую способность.

Рис. 31. Микрофотографии среза яичника лемура через 24 ч после введения тимидима-Н3:
а— в проходящем свете; б — в темном поле. Размер зерен серебра небольшой вследствие сокращения времени проявления. Несмотря на большую плотность зерен серебра над мечеными оогониями, видно, что последние находятся в профазе митоза. Эмульсия Ilford К2 (Х720).
Только микроскопия в темном поле
позволяет извлечь все преимущества из этого факта, поскольку она позволяет распознавать небольшие проявленные зерна. В то же время становится возможным изучение тонких цитологических деталей даже в интенсивно меченных клетках, поскольку зерна настолько малы, что они занимают относительно небольшую часть клетки. Рис. 31 иллюстрирует это положение. Это авторадиограф яичника Galago demidoffi после введения меченного тритием тимидина. Некоторые клетки являются оогониями в профазе митоза. Хотя над ядром располагаются многочисленные зерна, еще можно различить лестницеобразные хромосомы. Разумно сочетание микроскопии в темном поле с применением эмульсий, содержащих кристаллы небольшого диаметра (таких, как Ilford серий К или L). При использовании эмульсий с крупными кристаллами, например, Ilford D или Eastman Kodak NTB серий, многие из этих преимуществ сводятся на нет.

Использовать методику освещения в темном поле при работе со съемной эмульсией Kodak AR—10 не имеет смысла. Кристаллы у нее большие, как у эмульсии Ilford G или Easti man Kodak NTB, а слои желатина, располагающийся поверх эмульсии, имеет тенденцию отражать падающий свет, уменьшая контраст между гранулами серебра и фоном. Это особенно справедливо для случаев, когда авторадиограмму окрашивают после проявления и слой желатина адсорбирует некоторое количество краски.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »