Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Перекрестные эффекты - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

До сих пор рассматривались изолированные источники, которые могли быть получены в препаратах, приготовленных из клеточной суспензии. Изучение источников, находящихся в срезе ткани, или других образцов, в которых меченые структуры расположены в непосредственной близости, связано с дополнительными трудностями.
Рис. 34 иллюстрирует такое положение. Участки А считаются интенсивно сорбировавшими метку; участки В предполагаются неактивными. Эксперимент направлен на определение относительных радиоактивностей малых структур С и D. Для используемой авторадиографической системы определяют величину разрешения v. Очевидно, объемы эмульсии, лежащие над структурами С и D вблизи участков А, подвергнутся значительному облучению последними. Поэтому количество зерен в этих объемах будет скорее отражать расстояние до ближайших участков А, чем концентрацию изотопа в нижележащих структурах.
Простейший тип перекрестного эффекта наблюдается тогда, когда два вида источников С и D случайно распределены по всему тканевому срезу и обнаруживаются на любом расстоянии от высокорадиоактивных участков А. В этом случае выделение объемов эмульсии, предназначаемых для подсчета зерен, может основываться на расстоянии этих участков от А.

1 При этом понятие «источник» должно быть уточнено; например, при содержании метки в цитоплазме клетки ее ядро, равно как и окружающие клетки, должно рассматриваться как «не-источник».


Рис. 34. Перекрестный эффект в биологическом образце.
А— эпителиальная ткань, которая, кан предполагается. интенсивно включает радиоактивную метку; В — не содержащая метку соединительная ткань: С и D — случайно расположенные относительно А ядра Двух различаемых типов клеток, активности которых должны сравниваться; V — разрешение авторадиограммы.
Рис. 35. Перекрестный эффект в биологическом образце. D—эпителиальная поверхность, под которой в соединительной ткани расположены высокоактивные фолликулы А; В — соединительная ткань, которая, как предполагается, не содержит метки. Необходимо сравнивать активность клеток фолликула С с активностью эпителиальных клеток D. С—тангенциальный срез клеток фолликула, не включающий его содержимого, v — разрешение авторадиограммы.

Например, можно условиться проводить подсчет зерен над всеми участками С и D, лежащими между v и 1,5 v от ближайших участков А, а также считать зерна над аналогичным числом нерадиоактивных участков В. Тогда счет над участками В дает значение фона для данного среза, а величина С—B/D—В отражает относительные значения радиоактивности С и D.

Но во многих экспериментах предположение о случайном распределении участков С и D относительно высокорадиоактивных участков А неприемлемо. На рис. 35, например, А — содержимое фолликула; С —эпителий фолликула; D — эпителий на некотором расстоянии от фолликулов; предполагается, что остальные участки ткани не содержат радиоактивной метки. Количество зерен, соответствующее D, довольно легко находят, подсчитывая их над обозначенными участками D, за вычетом фона, определяемого над контрольными участками неактивной ткани, достаточно удаленными и от Л и до D, как, например, над В. Особую трудность представляет определение активности эпителия фолликула С. К счастью, в срезе ткани расстояние до ближайшего А, определяющее перекрестный эффект в авторадиограмме, не равно расстоянию in vivo. В то время как сечение, проходящее через эпителий С под прямым углом к нему, образует единичный слон клеток вокруг фолликула, тангенциальное сечение может дать более широкий ободок эпителия толщиной в несколько клеток. Это позволяет выделить участки С в тангенциальных сечениях, лежащие на расстоянии многих микрон от А, и найти участки неактивной ткани на аналогичном расстоянии от А в фолликулах, рассеченных перпендикулярно к эпителию (как В2). В этом случае C—B2/D-B даст относительные активности С и D. Существует также вероятность идентификации небольших участков фолликулярных клеток. нарезанных так удачно, что в этой части среза (С2) активное фолликулярное содержимое отсутствует.
Нет точных и быстрых способов обработки результатов экспериментов, в которых перекрестный эффект может играть значительную роль. Основным принципом при его учете является использование контрольных участков, предположительно содержащих незначительное количество радиоактивного вещества и выделяемых таким образом, чтобы перекрестный эффект в них был таким же, как и в исследуемых участках среза. Это позволяет, как и в случае источников, различающихся размером и формой, с помощью авторадиографической методики, дающей лучшее разрешение, уменьшить перекрестный эффект.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »