Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Нельзя не подчеркнуть снова, что авторадиография — не просто методика обработки материала, сходная, например, с окраской среза, а методика проведения эксперимента с радиоактивными изотопами. Никакого сколько-нибудь ценного вывода нельзя сделать путем просмотра одной авторадиограммы. Эта ситуация аналогична создающейся с жидкостным сцинтилляционным счетчиком, где интерпретация измерения единичного образца совершенно невозможна. В обоих случаях необходимы разного рода специфические контрольные процедуры к каждому эксперименту, чтобы исключить наличие ложного счета или уменьшения счета вследствие какого-либо процесса, снижающего чувствительность регистрирующей среды.
Зерна серебра могут появляться в эмульсии вследствие хемографии (химического взаимодействия образца и эмульсии), под воздействием тепла, света или давления. Наиболее подходящим способом контроля для исключения ложной реакции вследствие воздействия этих факторов является экспонирование с каждой партией авторадиограмм идентичных образцов, не содержащих радиоактивного материала. Однократного контроля эксперимента недостаточно, так как условия работы могут медленно, в течение нескольких недель, изменяться незаметно для исследователя. Вместе с тем включение одного препарата без радиоактивного материала в каждую партию авторадиограмм не требует много времени.
Наличие зерен серебра, возникающих от других причин, не связанных с радиоактивностью образца, довольно легко определить. В противоположность этому очень легко просмотреть потерю зерен серебра из участков, где они должны быть. Сравнимым феноменом является затухание в жидкостном сцинтилляционном счетчике — процесс, при котором энергия, теряемая β-частицей, трансформируется не в импульс света, а в другие формы энергии или в свет несоответствующей длины волны. При работе с жидкостным сцинтилляционным счетчиком нельзя получить достоверных результатов без некоторых контрольных процедур, которые бы указывали на наличие или отсутствие затухания. Подобным образом не должно предприниматься никаких попыток интерпретации авторадиограмм до тех пор, пока не будет показано, что эмульсия действительно зарегистрировала присутствие радиоактивности в виде проявленных зерен серебра. Распространенными причинами негативной реакции подобного рода являются хемография и регрессия скрытого изображения в течение экспонирования; последнее явление подробно разбирается на стр. 155.
Наилучший способ контроля такого рода негативной реакции — взять один срез с эмульсией из каждой партии и подвергнуть его воздействию света или стандартной дозы внешнего облучения. Затем этот контрольный срез положить обратно в контейнер, где хранятся остальные стекла, чтобы экспозиция и проявление проходили в идентичных условиях. Результат этой простой контрольной процедуры часто поразительный. Рис. 21 иллюстрирует пример, когда наблюдалось снижение чувствительности эмульсии над отдельными блоками ткани, в то время как остальной биологический материал, будучи подвергнут авторадиографии в том же эксперименте, не оказал какого-либо ослабляющего действия на эмульсию. Если бы эти блоки представляли результат какого-либо экспериментального воздействия, выполненного in vivo, этот неожиданный артефакт можно было бы истолковать, при отсутствии соответствующего контроля, как уменьшение включения радиоактивной метки.
Эти два контрольных образца, — не содержащий радиоактивности и подвергнутый воздействию света, — должны рассматриваться как составные части любого эксперимента с применением авторадиографии, так же как измерение фона и оценка затухания в жидкостном сцинтилляционном счетчике. Если при выполнении указанных контрольных мероприятий испытываются затруднения, следует оговорить это в любом публикуемом отчете о работе.
Если обнаружится, что в серии образцов отмечается хемография, можно покрыть один срез из каждого блока непроницаемой пленкой (см. гл. 12). Если нет значительной разницы в распределении зерен серебра между этим контрольным срезом и срезами, не покрытыми пленкой, резонно предположить, что хемографии нет, и проводить основные исследования материала без пленки.
В большинстве экспериментов с применением авторадиографии не возникает никаких технических затруднений в проведении необходимого контроля. Единственное препятствие для его повсеместного использования — непонимание необходимости в нем.

СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АВТОРАДИОГРАФИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТА

Если требуется не только грубая корреляция между плотностью зерен и радиоактивностью образца, то каждый эксперимент превращается в упражнение по применению статистических методов. Даже для ответа на вопрос, содержит структура метку или нет, необходимо сравнивать плотности зерен над этой структурой с плотностью зерен над соседними структурами и в контрольных препаратах.
Неверно, что опытный исследователь может удовлетворительно интерпретировать авторадиограмму на глаз. Многие из заключений, сделанных автором при первом просмотре срезов, были значительно изменены после проведения соответствующего анализа подсчета зерен. Это могло бы говорить о том, что автор плохой исследователь, однако подобные ошибки делают и другие, более опытные экспериментаторы. Существует только один способ точной оценки авторадиограмм — тщательный сбор и анализ количественных данных. Характеристика радиоактивности терминами «много треков, мало треков, треки отсутствуют» недостаточна; интенсивность окраски подлежащего среза поразительным образом влияет на подобный грубый метод оценки плотности зерен.
Здесь не место обсуждать вопросы статистической оценки результатов, кроме некоторых положений, касающихся их сбора. Если пользоваться помощью статистика, то его консультации необходимы как до начала, так и в течение всего эксперимента, а не только после окончания подсчета зерен. В результате предварительного обсуждения может быть значительно улучшено планирование всего эксперимента.
Возможно, наиболее ответственной стадией в оценке любого эксперимента является подсчет зерен или треков. Выбор объемов эмульсии, в которых производится подсчет, обсуждается в гл. 8. Следует заметить, что, поскольку требуется принимать решения о подлежащих подсчету точных объемах эмульсии, их локализация, величина и форма должны быть учтены при составлении практических указаний микроскописту о том, как производить подсчет зерен в случайно выбранных сериях объемов. Таким способом сводится к минимуму вероятность влияния, хотя бы и подсознательного, данных о плотности зерен в эмульсии на выбор подлежащих подсчету объемов.

Намного лучше подсчитывать зерна в различных участках среза многих авторадиограмм, чем проводить исчерпывающий подсчет одного небольшого участка на единственном стекле. Это уменьшает возможность влияния локальных факторов, таких, как давление или неравномерное высушивание, на весь эксперимент.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »