Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Выбор способа гистологической фиксации - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

В процессе фиксации происходит преципитация многих протеинов в тканях и клетках, что ограничивает их потерю при последующей обработке растворами и значительно улучшает вид и способность срезов к окраске. Иногда возникает предположение, что сама фиксация сопровождается потерей или перераспределением радиоактивного материала. В этом случае следует нарезать на криостате также свежезамороженный материал с помощью методики, описанной в следующей главе. Гистологическую фиксацию можно проводить в конце экспозиции, непосредственно перед проявлением.
Следует избегать некоторых фиксаторов, так как после их воздействия ткани имеют тенденцию взаимодействовать с эмульсией, вызывая хемографию. Такими являются фиксаторы, содержащие соли ртути и свинца, и жидкость Ценкера [5]. Для авторадиографии часто используют формалин, но он оказывает десенсибилизирующее действие на эмульсию (см. например, рис. 21, где показано выраженное снижение интенсивности скрытого изображения при авторадиографии ткани, фиксированной формалином). В некоторых случаях исходный эффект наблюдают после применения глютарового альдегида. Можно использовать фиксаторы, содержащие пикриновую кислоту, такие, как раствор Буэна. Получающееся вследствие применения пикриновой кислоты желтое окрашивание удаляют в процессе обезвоживания срезов, обрабатывая их аммиачным спиртом или раствором карбоната лития.
Наиболее надежные фиксаторы —жидкость Карнуа и абсолютный метиловый спирт. В ряде исследований было показано, что эти фиксаторы не оказывают влияния на эмульсию [5, 6]. Однако они могут не обеспечивать достаточно хорошего сохранения специфических структур. При использовании других фиксаторов возможность появления позитивной или негативной хемографии можно уменьшить длительным промыванием ткани в водопроводной воде для удаления избытка фиксатора. Чтобы выявить возможность появления хемографии и избежать затруднений при исследовании радиоактивного материала, необходимо предварительно исследовать срезы из материала, не содержащего радиоактивности и фиксированного в выбранном фиксаторе. Если для удовлетворительного сохранения специфических структур необходимы особые способы фиксации, которые вызывают хемографию, срезы после окрашивания и до покрытия эмульсией можно изолировать непроницаемой пленкой, например поливинилхлоридной.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »