Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Непроницаемые пленки - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Непроницаемые пленки применяют в авторадиографии для различных целей. Тонкий слой инертного материала, отделяющий срез от эмульсии, может предотвратить химическое воздействие среза на эмульсию в процессе экспонирования. Он может также защищать срез от растворов проявителя и фиксажа, способных изменить его окраску. Помимо этого, непроницаемые мембраны являются также основой для некоторых методик авторадиографии растворимых изотопов и приготовления авторадиограмм для исследования на электронномикроскопическом уровне.
Требования к пленкам включают минимальную толщину, устойчивость к растяжению, непроницаемость и химическую инертность.

Неблагоприятное влияние расстояния между срезом и эмульсией как на разрешение, так и на эффективность рассмотрено выше, и пленки должны быть настолько тонкими, насколько это возможно. Устойчивость к растяжению особенно необходима при использовании методик для электронной микроскопии, при которых пленка с прикрепленной эмульсией должна быть снята со стекла на поверхность воды. В этом случае важно также, чтобы пленка была тонкой. Толстая пленка будет уменьшать контраст электронной микроскопии образца. Чепман-Андерсен [17] исследовала ряд возможных материалов для приготовления пленок и описала свойства пленки из нейлона, которая имеет отличные характеристики. В этой же работе описаны пленки из нитроцеллюлозы и формвара.
Недавно Савиский и Дарзинкевич [18] описали технику приготовления пленок из поливинилхлорида (ПВХ). Он крайне прочен даже при очень небольшой толщине пленки и является наиболее удовлетворительным материалом для авторадиографии. ПВХ можно получить из центральной химической лаборатории в Варшаве в виде 6,9%-ного раствора. Его можно также приготовить по следующей прописи:
ПВХ ....................................................................................  9,7%
Бутилацетат............................................................................ 30,0%
Трихлорэтилен ...................................................................... 57,9%
Циклогексанон....................................................................... 0,8%
Дибутилфталат....................................................................... 1,6%

ПВХ сначала растворяют в бутилацетате, на что может потребоваться до 48 ч. Другие ингредиенты добавляют позднее. Дибутилфталат действует как пластификатор при окончательном формировании пленки, которая получается более плотной и ломкой при уменьшении его количества и более эластичной — при увеличении. Готовый раствор можно хранить неопределенно долго и плотно закрытом сосуде для предупреждения испарения органических растворителей.
Пленку из ПВХ можно получить двумя способами. Возможно, лучшим из них является следующий: взять кювету приблизительно 22x15 см с дистиллированной водой комнатной температуры и добавить в нее каплю раствора ПВХ. Капля растекается по поверхности воды, образуя крайне тонкую пленку с хорошо выраженными цветами интерференции. Через несколько секунд эта пленка начинает несколько сокращаться, уменьшаясь в размерах и становясь толще. Ее можно поместить на поверхность стекла таким же способом, что и съемную эмульсию. Если кювета слишком мала, то поверхность воды недостаточна для полного распространения тонкой пленки; если кювета слишком велика, то пленка распространяется настолько, что в ней появляются многочисленные небольшие отверстия. Выловленную на стекло пленку высушивают в атмосфере, лишенной пыли. После этого она становится крайне тонкой и прочной, гидрофобной и совершенно непроницаемой, если не имеет небольших отверстий или других дефектов.

Микрофотография коры головного мозга
Рис. 47. Микрофотография коры головного мозга 18-дневной крысы через 2 ч после введения Н3-тимидина (Х300).
Срез до авторадиографии окрашен гематоксилином Гарриса и покрыт ПВХ- пленкой. Авторадиография с помощью тонкого слоя эмульсии Ilford G5. Несмотря на то, что эффективность авторадиографии снижена наличием пленки, четкие треки получены после 13- дневного экспонирования. Объектив Лейтц Ультропак Х22. Комбинация проходящего света и освещения в темном поле
Савиский и Дарзинкевич [18] смогли закрыть устье стеклянной трубки такой пленкой и показали, что последняя полностью непроницаема для раствора, содержащего S35. Кроме описанного способа пленку можно приготовить, разбавляя готовый раствор, — например ксилолом, до концентрации ПВХ около 2,5%. В него погружают стекла, дают раствору стечь, после чего высушивают стекла в атмосфере, свободной от пыли.
Эти поливинилхлоридные пленки достаточно тонки для использования в авторадиографии трития (рис. 47). Можно проводить отбор пленок по цветам интерференции. Пленка уменьшает количество зерен серебра над меченными тритием клетками не более чем на 30%.
К сожалению, пленки из ПВХ гидрофобии, и это затрудняет нанесение эмульсии. На препараты, покрытые пленкой ПВХ, можно нанести только съемную эмульсию, которая прилипает к препаратам в любом случае менее прочно. Необходимость в нанесении на пленку желатина, располагающегося между срезом и эмульсией, приводит к дополнительному снижению эффективности и разрешения. Можно нанести слой жидкой эмульсии на пленки из ПВХ без желатина при условии, что стекла тщательно вымыты и сохраняются в горизонтальном положении после нанесения эмульсии. Эмульсию следует после нанесения сушить очень медленно и осторожно, ибо напряжения при высушивании или смещение между эмульсией и пленкой ПВХ могут привести к усилению фона.
После стабилизации пленка трудно растворяется в органических растворителях.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »