Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Методика съемной эмульсии - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

ГЛАВА 14
МЕТОДИКА СЪЕМНОЙ ЭМУЛЬСИИ
Применяемую в настоящее время методику съемной эмульсии разработали Берриман с соавторами [1] в сотрудничестве с Пелком [2, 3].
Съемная эмульсия — слой ядерной эмульсии, нанесенной на слой желатина. На поверхности стекла она размещена таким образом, что желатиновый слой соприкасается со стеклом. Предназначенный для использования участок эмульсии острым ножом или скальпелем вырезают и быстро переносят на водную поверхность эмульсией вниз. Здесь слой находится минуту или две, пока не пропитается водой и не расправится. После этого съемную эмульсию помещают на исследуемый образец (обычно гистологический срез на предметном стекле) следующим способом: погружают в воду под плавающий участок эмульсии предметное стекло, а затем извлекают. При высушивании эмульсии возникает прочный ее контакт с образцом. Желатиновый слой, покрывающий тонкий слой эмульсии, облегчает дальнейшие операции с ним и защищает эмульсию от повреждений во время подсушивания и экспонирования. Желатиновый и эмульсионный слой остаются в контакте с образцом во время проявления и просмотра под микроскопом.

ПРИМЕНЯЕМЫЕ ЭМУЛЬСИИ

Некоторые съемные эмульсии производят фирмы «Кодак» и «Илфорд». Съемная эмульсия Kodak AR-10, без сомнения, наиболее часто потребляемый материал. Она состоит из слоя эмульсии толщиной 5 мкм и слоя желатиновой основы толщиной 10 мкм. Зерна серебра имеют средний диаметр 0,2 мкм. Эмульсия недостаточно чувствительна к электронам с малой плотностью ионизации, она может регистрировать пробег β-частиц с энергией 200 кэв и выше в виде отдельных зерен, а не сплошного трека. На шкале чувствительности фирмы «Илфорд» (см. табл. 9) это примерно эквивалентно второму уровню.
Фирма «Кодак» производит и другие материалы. Съемная эмульсия AR-50 состоит из слоя эмульсии толщиной 12 мкм и слоя желатиновой основы толщиной 10 мкм. Средний диаметр зерен галоидного серебра значительно больше, чем у имеющихся в продаже рентгеновских пленок. Однако эта эмульсия более чувствительна, чем эмульсия AR-10. Сочетание более толстого слоя эмульсии с большим размером зерен серебра означает, что ее разрешающая способность гораздо ниже. чем эмульсии AR-10. Для большинства гистологических исследований эмульсия AR-50 не подходит. Она может найти применение для авторадиографии больших образцов и макроскопического исследования, но это обычно проводится с применением рентгеновских пленок.
Экспериментальные пластинки со съемной эмульсией Ф-1062 имеют такую же эмульсию, как AR-10, толщиной 4 мкм, но без желатинового подслоя. Первоначально ее вырабатывали для двухэмульсионной авторадиографии материала, содержащего Н3 и С14 (см. стр. 185). Если при этой методике используется 2 отдельных слоя съемной эмульсии AR-10, то общая толщина эмульсии и желатина становится слишком большой, чтобы окрашивать и фиксировать препарат; микроскопия при этом затруднена. Филд с соавторами [4] сделали попытку использовать для одного из двух слоев эмульсию Ф-1062. Некоторые исследователи нашли, что ее удобно применять вместо AR-10 в экспериментах с одним изотопом: преимущество заключается в лучшем окрашивании объекта. Однако эта эмульсия более хрупка и ее труднее хранить, чем эмульсию AR-10.
Специальные пластинки со съемной эмульсией предназначены для получения лучшего разрешения, чем у эмульсии AR-10. Они имеют тот же состав, что и AR-10, но толщина эмульсионного слоя составляет 1—2 мкм. Желатиновая основа имеет толщину 5 мкм. Такие пластинки, например, использовали для исследований хромосомных репликаций, что требует высокого разрешения. Все работы с этими материалами, и в частности, их проявление, проводятся так же, как и со съемной эмульсией AR-10.
Фирма «Илфорд» производит любой из перечисленных выше материалов при толщине эмульсии 5 мкм и желатиновом слое 10 мкм. Однако в связи с недостаточно широким использованием возможности этих материалов еще не оценены.

ПРЕИМУЩЕСТВА МЕТОДИКИ СЪЕМНОЙ ЭМУЛЬСИИ

Относительные достоинства методик съемной и жидкой эмульсий обсуждались в некоторых деталях в гл. 11. Кратко суммируя основные преимущества методики съемной эмульсии, следует отметить удачное сочетание свойств, удовлетворяющее всем основным требованиям авторадиографии с использованием световой микроскопии.
В зависимости от энергетического спектра используемого изотопа при таких толщинах эмульсионного слоя и размерах зерен серебра достигается хорошее разрешение — в пределах от 1 до 5 мкм. Поэтому можно получить удовлетворительные результаты при изучении распределения радиоактивности на клеточном уровне и провести разграничение между основными клеточными компонентами, такими, как ядро и цитоплазма. Однородность слоя эмульсии, отклонения от которого по проекту фирмы «Кодак» составляют ±10% от установленных 5 мкм, лучше, чем та, которая получается с жидкой эмульсией. Сравнение радиоактивности различных структур может основываться на подсчете зерен, наблюдаемых над структурными компонентами в контролируемых условиях, даже при использовании изотопов с высокой максимальной энергией.
Методика съемной эмульсии может дать хорошие результаты в большинстве авторадиографических исследований. Сама методика не трудоемка, а сохранность пленки в соответствующих условиях составляет 6 месяцев. Лаборатории, где авторадиографические исследования проводятся нерегулярно, легко воспроизвести стандартные условия этой методики, используя литературные данные.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »