Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Недостатки методики съемной эмульсии - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Авторадиография с помощью съемной эмульсии в ряде экспериментов дает удовлетворительные результаты, но для выполнения отдельных работ предпочтительно использование более специализированных методик. Например, для получения наивысшего разрешения при использовании световой микроскопии тонкий слой мелкозернистой эмульсии типа Ilford L4 подходит больше, чем более толстый и крупнозернистый слой эмульсии AR-10 или специальной съемной эмульсии. Если особенно важен высокий выход зерен при очень низких уровнях метки или очень коротком периоде полураспада изотопа, то лучшие результаты даст толстый слой эмульсии типа Ilford К5. Если важна количественная точность, нужно выбрать более специализированные методики авторадиографической регистрации β-частиц. Жидкие эмульсии отличаются большим разнообразием материалов и способов их использования, чем съемные.
Кроме того, имеется ряд недостатков, присущих самой методике применения съемных эмульсий. Процесс снятия пленки со стеклянной подложки неизбежно включает больше ручных манипуляций, и это увеличивает возможность повышения фона по сравнению с использованием жидких эмульсий. При неблагоприятных условиях температуры и влажности в темной комнате во время отслаивания пленки от стеклянной подложки могут возникать видимые искры от разрядов статического электричества, в результате чего появляется очень высокий фон.

Кроме того, почти невозможно добиться полной чистоты поверхности воды в водяной бане, а именно эти загрязнения попадают между эмульсией и объектом. Время, требуемое для набухания съемной эмульсии на поверхности воды, определяет продолжительность приготовления авторадиограмм. Если необходимо покрыть эмульсией 30—50 стекол, то погружение в жидкую эмульсию осуществляется гораздо быстрее, чем нанесение съемной эмульсии.
К недостаткам методики, учитывая необходимость проявления, фиксации и промывки, следует отнести менее плотное прилегание к стеклу съемной эмульсии, чем жидкой. При неосторожном обращении возможно отслаивание съемной эмульсии от объекта. Наиболее часто это происходит тогда, когда перед нанесением эмульсии срез покрывают защитным слоем поливинилхлорида.
В этих условиях удержать эмульсию на месте трудно, даже если поливинилхлоридная пленка покрыта разбавленным желатином, Не исключено, что съемная эмульсия может смещаться, особенно в заключительном периоде, во время промывки после фиксации.
При получении авторадиограмм со съемной эмульсией, предназначенных для микроскопии под пленкой, над срезом или вокруг пего часто образуются небольшие пузырьки, индекс преломления которых иной, чем у остального препарата. По- видимому, это следствие недостаточного проникновения заключающей среды под пленку. Для предотвращения такого дефекта предлагали различные способы, лучшим из них является применение поливинилового спирта, описанное в дальнейшем.
Наконец, присутствие слоя желатина над эмульсией может мешать микроскопированию. Многие красители, применяемые после проявления и фиксации, избирательно воспринимаются желатином, и это более заметно в случае съемной эмульсии с толстой желатиновой основой по сравнению с жидкой эмульсией. Данный недостаток не является чисто внешним. Он может быть достаточно серьезен, чтобы исключить возможность применения освещения в темном поле при микроскопии или фотографировании. Рассеивание света, вызванное окрашиванием желатинового слоя, делает невозможным автоматизированную оценку плотности зерен, поскольку и в этом случае используется освещение в темном поле.
Многие из отмеченных недостатков методики авторадиографии со съемной эмульсией можно свести к минимуму, используя некоторые приемы. Однако все они должны учитываться при выборе наиболее подходящей методики авторадиографического исследования. Несмотря на свои недостатки, методика съемной эмульсии является единственной, которую можно использовать во всех наблюдениях при световой микроскопии.

СОВЕТЫ ПО РАБОТЕ С ЭМУЛЬСИЕЙ AR-10

В опытах со съемной эмульсией было обнаружено, что на поверхности воды при 25° С размеры пленки увеличиваются в 1,3 раза. Это происходит за 2—3 мин, и в последующие 15— 20 мин дальнейшего увеличения не наблюдают. Напрашивается заключение, что толщина слоя эмульсии во время экспонирования уменьшается до 3,6 мкм.
Однородность пленки оказывается хорошей, когда эмульсию наносят на ровную поверхность, например предметное стекло. В одной серии опытов эмульсию наносили на диск полимера, однородно меченного С14. После подсушивания регистрировали поток β-частиц счетчиком Гейгера через отверстие в 1 мм2. Диск перемещали относительно отверстия и при этом определяли скорости счета в различных участках одного и того же фрагмента эмульсии. Таким путем проверяли кусочки эмульсии из разных образцов. Воспроизводимость счета была прекрасной, в противоположность той, которая была получена при покрытии диска жидкой эмульсией типа Ilford К5. Кроме того, эмульсию наносят на срез с неровной поверхностью, например на срез ткани, из которого удалена заключающая среда, в связи с чем толщина эмульсионного слоя становится еще более неравномерной. На таких препаратах, экспонированных с однородным радиационным полем, плотность зерен кажется сниженной там, где меняется толщина среза. Например, по краю, где эмульсия переходит со среза на поверхность стекла, ее толщина и наблюдаемая плотность зерен оказываются несколько меньшими, чем в других местах.
Рядом авторов проведена оценка эффективности, выраженная средним числом зерен в эмульсии на одну β-частпцу для различных изотопов. Полученные величины лежат в пределах от ~ 1 для Н3 до 0,7 для Р32. Естественно, что эффективность эмульсин, выраженная числом проявленных зерен на один распад в источнике, варьирует значительно более широко в зависимости от природы образца и фактора самопоглощения. Хаэс и др. [5] в мазках клеток белой крови, меченных Н3, получили одно проявленное зерно на 20 распадов. Кизильский и др. [6] считают, что одно зерно серебра соответствует 100— 200 распадам, происходящим в срезе толщиной 3 мкм, меченном Н3. Эта последняя работа демонстрирует слабую корреляцию между числом зерен в эмульсии и результатами радиометрии. Следует отметить, что регрессию скрытого изображения нельзя ни исключить, ни контролировать.
Следуя рекомендациям Герца [7], можно повысить чувствительность эмульсии AR-10 до экспонирования. Однако в дальнейшем не описано ни одного эксперимента, в котором такая попытка была бы сделана, так что трудно судить, насколько воспроизводимым будет такое усиление реакции эмульсии.

Съемная эмульсия, используемая обычным способом, явно не подходит, для авторадиографии растворимого материала. Были сделаны попытки применить съемную эмульсию, плавающую на поверхности ртути, чтобы избежать необходимости погружения стекла в воду при нанесении эмульсии. Однако эта методика плохо разработана. Можно применять съемную эмульсию для работы с растворимыми изотопами по методике Апплетона [8].
Штрублефилд [9| довольно простым способом использовал относительно слабое сцепление между съемной эмульсией и стеклом для улучшения статистики подсчета зерен над препаратами хромосом. После относительно короткой экспозиции авторадиограммы проявляют и фотографируют, после чего эмульсию снимают с препарата. Затем на стекло наносят второй слой съемной эмульсии, и препарат снова экспонируют. Благодаря последовательным коротким экспозициям можно получить высокую концентрацию зерен даже над такими мелкими структурами, как хромосомы млекопитающих.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »