Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Подробное описание методики  съемной эмульсии - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

Срок годности эмульсии AR-10 составляет 6 месяцев. Ее лучше хранить в пластикатовой коробке при 4° С.
Для качества авторадиограмм очень важны условия в темной комнате. Температура должна быть 18—22° С; относительная влажность 60—65%. Если в ней слишком сухо, то может произойти спонтанное отслаивание эмульсионного слоя от стеклянной подложки, и электростатические разряды в просветах между эмульсией и стеклом создадут высокий фон. Если слишком влажно, то снять слой очень трудно. Во время снятия эмульсионного слоя нельзя включать вентилятор, чтобы не создавать сильного потока воздуха. С эмульсией нужно работать на расстоянии не менее 60 см от безопасного фонаря с 15-ваттной лампой и фильтром № 117.
Безопасный фонарь должен быть установлен на высоте 60—90 см над уровнем рабочего стола и таким образом, чтобы для человека, стоящего на наиболее удобном для работы месте, было видно отражение света от поверхности водяной бани. Темная комната всегда должна быть чистой; в грязной комнате невозможно предотвратить попадание на поверхность поды пылинок, которые затем проникают между эмульсией и срезом.
За час или два до употребления съемную эмульсию нужно достать из холодильника, чтобы она нагрелась до комнатной температуры.
Необходимое оборудование. Нужна плоская чашка с водой (25° С) любого размера, но лучше широкая, чтобы в ней поместилось возможно больше кусочков эмульсии, которая будет разбухать и расправляться. Толщина слоя воды должна быть не менее 4 см и доходить почти до краев чашки. Пленка лучше видна, если чашка поставлена на темную поверхность. Требуется также чистый острый нож или скальпель, два гладких пинцета, прямые ножницы. Чтобы эмульсия хорошо прилипала, на стекло нужно нанести слон желатина.
Упаковка эмульсии. Пластинки со съемной эмульсией упаковывают в коробки по 12 шт.; в каждой коробке имеется три отделения, в которых помещается по 4 пластинки. На рис. 52 показано, как они располагаются: две нижние пластинки лежат плотно друг к другу эмульсией наружу, две другие отделены небольшими картонными прослойками. Важно не повредить эмульсию, когда неиспользованные пластинки вновь помещают в коробку. Целесообразно оставлять в коробке на прежнем месте использованные пластинки, так как они защищают эмульсию оставшихся неиспользованными пластинок.

Снятие эмульсии со стеклянной подложки. Если возникло сомнение, на какой стороне стекла находится пленка съемной эмульсии, нужно осторожно провести ногтем в самом уголке пластинки, и все станет ясно. Эмульсия плотно прикреплена к стеклу на расстоянии 0,5 см от края. Надрез эмульсионного слоя делают в одном из углов пластинки, отступя примерно 1 см от края стекла; величина вырезаемого кусочка зависит от размера среза, который необходимо покрыть с учетом разбухания эмульсии на поверхности воды.

Рис. 52. Схема, иллюстрирующая упаковку пластинок со съемной эмульсией фирмы «Кодак», во избежание контакта между пластинками проложен картон.
Необходимо отрезать довольно большой кусочек, чтобы его хватило на 3 предметных стекла, на которых будут монтироваться авторадиограммы. Срез должен быть покрыт эмульсией так, чтобы со всех сторон эмульсия выступала за его пределы не менее чем на 1 см. Это минимальная величина; неплохо, если размер кусочков пленки будет и побольше.
Обычно отрезаемый участок эмульсин будет легко отделяться от стекла со всех сторон, так что его можно спокойно захватить пинцетом за один из углов. Б противном случае можно один из углов отделить от стекла концом ножа или скальпеля. Эмульсионный слой необходимо брать пинцетом за угол, ближайший к центру пластинки, и отслаивать от стекла равномерным неторопливым движением. При этом следует стремиться не повредить оставшуюся на стекле эмульсию (рис. 53). Если эмульсионный слой при отслаивании потрескивает или видны слабые искорки разряда статического электричества, можно осторожно на нее подышать.
При отслаивании пластинку надо держать вертикально к поверхности воды и снимать участок эмульсии по направлению к воде. По мере отслаивания эмульсионный слой должен ложиться на поверхность воды вниз эмульсией. Первое время лучше учиться производить эту манипуляцию на свету. Можно очень быстро научиться получать на воде гладкий слой. Если эмульсионный слой слишком сморщен или с трещинами, лучше им не пользоваться.
Трудности на этой стадии снятия эмульсионного слоя обычно связаны с условиями температуры и влажности в темной комнате. Обычно после того, как с пластинки снято несколько кусочков эмульсии, большие ее участки самопроизвольно отслаиваются от стекла. Такой отслоившийся слой почти невозможно разрезать ножом или скальпелем, поэтому лучше это делать ножницами, вырезая пригодные для использования кусочки. При снятии слоя не рекомендуется держать пластинку на уровне лица (т. е. вблизи безопасного фонаря)—это опасно. Кроме того, чем короче расстояние от пластинки до поверхности воды, тем меньше шансов получить скрученный слой.
Специалисты, пользующиеся съемной эмульсией, утверждают, что ее вид в воде изменяется, что она становится гранулированной по мере того, как расправляется; такая эмульсия готова к употреблению.
Прежде чем отрезать следующим кусочек эмульсионного слоя, ножницы следует тщательно просушить, иначе он к ним прилипнет.
Нанесение пленки съемной эмульсии. Взяв стекло за конец, свободный от срезов, его догружают в воду и подводят под плавающий кусочек эмульсии под углом примерно 30°. Затем извлекают стекло вместе с эмульсионным слоем из воды. Один край слоя должен сразу приклеиться к стеклу, а другой — по мере извлечения стекла из воды.

Рис. 53. Три схемы, иллюстрирующие приготовление авторадиограмм со съемной эмульсией.
а — отступя 0,5 см от краев пластинки, острым скальпелем вырезают кусочек эмульсии; б — придерживая пластинку вертикально над водой, взять пинцетом за уголок вырезанного квадрата и поместить пленку на воду эмульсией вниз. Следует соблюдать осторожность, чтобы не отслоить оставшуюся на пластинке пленку; в — после того как срезанный квадрат пленки поплавает в воде 2 мин., его вылавливают на предметное стекло со срезом. Таким образом, эмульсия плотно приклеивается к срезу.

Если имеются морщинки или эмульсия неудачно покрыла срез, не пытайтесь перемещать пленку вне воды. Необходимо опустить стекло назад в воду и снова поддеть эмульсионный слой.
По краям эмульсии фон может быть выше вследствие отрезания и захватывания ножницами. Важно получить нормальный участок эмульсии с низким фоном над срезом.
Высушивание и экспонирование. Предметное стекло, покрытое съемной эмульсией, необходимо сушить вертикально в слабом потоке прохладного воздуха в течение 20—30 мин. Затем его экспонируют обычным способом при 4° С. Сависки и Павинска [10] обратили внимание на то, что в случае очень медленного и, возможно, даже неполного высушивания эмульсии возникает более низкий фон. Определенное количество влаги, оставшееся в эмульсии, может способствовать более сильной регрессии скрытого изображения. Так как в начале экспонирования в пленке уже имеется определенный фон, такая регрессия вызовет первичное снижение фона. Быстрое высушивание эмульсии, как съемной, так и жидкой, может создать дополнительный фон вследствие физического смещения кристаллов галоидного серебра по мере сжатия эмульсии.
Чтобы предотвратить регрессию скрытого изображения во время экспонирования, важно высушить эмульсию полностью. Целесообразно экспонировать стекла в присутствии обезвоженного силикагеля. Он довольно медленно удаляет воду из эмульсии, но высушивает ее достаточно хорошо, чтобы предотвратить регрессию скрытого изображения после первых 24 ч экспонирования.
Очень низкого фона можно добиться для съемной эмульсии опытным путем (рис. 54).

Проявление и фиксирование. Все процедуры на этих этапах должны происходить при 18° С. При этой температуре эмульсия набухает не в такой степени, как при 25° С. Рекомендуемый проявитель «Кодак Д-19 б»:
Метол................................................................................... 2,2. г
Сульфит натрия (кристаллический) ..............................  144,0. г
Гидрохинон.......................................................................... 8,8. г
Углекислый натрий (кристаллический) ........................  130,0. г
Бромистый калий................................................................ 4,0. г
Дистиллированная вода ... до 1000 мл
Вместо кристаллических можно использовать безводные сульфит натрия (72 г) и углекислый натрий (48 г). Все вещества нужно растворять в том порядке, в котором они перечислены; проявитель используют без дальнейшего разбавления.
Рис. 54. Меченые нормобласты в отпечатке костного мозга после включения тимидина-Н3 (Х200). Для приготовления авторадиограммы  использовали эмульсию Kodak AR-10 [11].


Проявлять около 5 мин при 18° С, промывать в течение 30—60 сек в дистиллированной воде. Фиксировать в 30%-ном растворе тиосульфата натрия. При желании можно использовать кислый фиксаж «Кодак». Промывать под слабой струей проточной воды 5 мин.
После окраски срезов стекла нужно опустить в 20%-ный раствор поливинилового спирта и подсушить на воздухе. Затем обезводить, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло для микроскопирования.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »