Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

ГЛАВА 15
МЕТОДИКИ ЖИДКОЙ ЭМУЛЬСИИ ДЛЯ АВТОРАДИОГРАФИИ С ОЦЕНКОЙ ПЛОТНОСТИ ЗЕРЕН
Беланже и Леблон [1] первыми применили жидкие эмульсии для получения наиболее тесного контакта между срезом и эмульсией. По их оригинальной методике эмульсию расплавляли и наносили на срез с помощью кисточки. В 1955 г. Жофтес и Уоррен [2] описали метод, по которому стекло со срезами погружали в жидкую эмульсию. В несколько модифицированном виде эту методику описал Жофтес [3]. Мессер и Леблон [4] приспособили основную методику погружения стекла в жидкую эмульсию к условиям своего опыта, а Коприва и Леблон [5] предложили ее дальнейшую модификацию. Прием погружения в жидкую эмульсию в настоящее время наиболее широко применяется в биологических лабораториях, если не считать использования методики съемной эмульсии.

ДОСТОИНСТВА И НЕДОСТАТКИ МЕТОДИКИ ПОГРУЖЕНИЯ

После погружения биологический объект покрывается и в некоторой степени пропитывается эмульсией. Никакой другой метод не дает такого тесного контакта между эмульсией и срезом. Регулируя разбавление эмульсии, можно получать на объекте очень тонкий слой. Диаметр кристаллов в эмульсиях, применяемых в авторадиографии, значительно меньше, чем у съемной эмульсии Kodak AR-10. Если выбирать из всех возможностей, ясно, что разрешение авторадиограммы с жидкой эмульсией будет значительно более высоким, чем со съемной эмульсией. Если для световой микроскопии необходимо высокое разрешение авторадиограммы, наилучшие результаты дает методика с погружением в жидкую эмульсию.
Методика погружения имеет и другие преимущества. С ее помощью быстро и легко приготовить авторадиограмму, а остающийся слой желатина настолько Топок, что окрашивание, заключение, наблюдение и фотографирование оказываются лучшими, чем при использовании съемной эмульсии. Эмульсия прилипает к стеклу и срезу гораздо прочнее, чем съемная; это упрощает технику применения непроницаемых пластикатовых пленок. Имеется большой выбор эмульсий, отличающихся по чувствительности и диаметру кристаллов.
Большим недостатком таких авторадиограмм является невозможность получить постоянную и воспроизводимую толщину слоя эмульсии. Детально изучили эту проблему Леблон и соавторы [6]. Даже при их опыте лучшее, чего они смогли добиться, это довольно одинаковая толщина над участком величиной в половину микроскопического среза. Они не приводят данных о том, как варьирует толщина эмульсии на разных препаратах.
Поскольку толщина эмульсии варьирует даже в одной серии авторадиограмм, сравнивать значения радиоактивности в различных структурах становится очень трудно. Требуются доказательства того, что наблюдаемые изменения в плотности зерен не являются следствием различий в толщине эмульсии. Когда необходимо сравнивать плотности зерен, большую точность дает съемная эмульсия.
Однако имеются специальные условия, при которых сравнение плотности зерен дает хорошие результаты в случае методики погружения, например, в опытах с Н3 или I125, энергия β-частиц которых настолько мала, что длина их пробега в эмульсин составляет не более 2 мкм. Вполне возможно использовать методику погружения для количественной авторадиографии с этими изотопами при достаточной толщине слоя (более 2 мкм).
Иногда можно сравнить радиоактивность по плотности зерен на авторадиограммах с жидкой эмульсией даже при использовании изотопов с высокой энергией излучения, как показали Дарлингтон и Роджерс [7]. Колебания в толщине эмульсии встречаются на относительно больших расстояниях, и совершенно невероятно, чтобы над двумя участками, разделенными только несколькими микронами, имелись значительные различия. В опытах с S35 и слоем эмульсии толщиной 3 мкм производились параллельные наблюдения над экспериментальными и контрольными участками, расстояние между которыми составляло 5 мкм (см. рис. 40). Хотя подсчет зерен показал, что толщина эмульсии сильно колеблется от одного среза к другому, независимо от этого статистическая обработка полученных результатов дала ценную и полезную информацию.
Итак, методика жидкой эмульсии дает авторадиограммы с высоким разрешением. Сравнение радиоактивности между отдельными участками возможно при условии, если доказано, что колебания в толщине эмульсии не влияют на число зерен. Тонкий слой эмульсии и мелкие зерна могут обеспечить прекрасные условия для изучения срезов под микроскопом.

ВЫБОР ЭМУЛЬСИИ

Основная характеристика некоторых эмульсий дана в табл. 9. В большинстве опубликованных работ применяли эмульсии Kodak NTB-2 и ΝΤΒ-З или Ilford, так что достаточно ограничиться их детальным описанием.
Эмульсии Eastman-Kodak и Ilford значительно различаются во многих отношениях.

Рис. 55. Микрофотография парафинового среза тонкого кишечника мыши через 1 ч после инъекции S35 (Х220).
Авторадиограмма приготовлена путем погружения в эмульсию Ilford G5. Наблюдается высокий уровень метки на свободных поверхностях эпителиальных клеток и над бокаловидными клетками. Трудно проверить, представляет ли низкая плотность зерен над лимфоцитами в базальной части эпителия низкий уровень метки или результат перекрестного эффекта от сильно меченных участков. См. авторадиограмму на рис. 58, где представлен тот же материал. Срезы окрашены гематоксилином Гарриса и сфотографированы одновременно при проходящем освещении и в темном поле при объективе Лейтц Ультропак Х22.
Например, стекло, погруженное в эмульсию Kodak NTB-3, может быть покрыто слоем толщиной 4 мкм, тогда как эмульсия Ilford G-5 дает в идентичных условиях слой толщиной 25—30 мкм.

Выпускаемые промышленностью ядерные эмульсии


Эмульсия

Величина кристаллов, мкм

Чувствительность

0

1

2

3

4

5

Ilford

0,27

GO

G1

G2

G3

G4

G5

Ilford

0,20

ко

К1

К2

КЗ

К4

К5

Ilford

0,15

LO

L1

L2

L3

L4

 

Eastman-Kodak

0,40

ΝΤΒ-4

Eastman-Kodak

0,30

NTA

NTB

ΝΤΒ-2

ΝΤΒ-3

Eastman-Kodak

0,04

ΝΤΕ

Gevaert

0,15

NUC715

Gevaert

0,07

NUC307

Kodak (английская)

0,20

AR-10

Примечание. Ядерные эмульсии с относительной чувствительностью по шкале Ilford. Уровень 0 регистрирует α-частицы, но не β-частицы. Уровень 2 подходит для Н3 и I125, но не для изотопов с высокой энергией. Уровень 3 будет регистрировать С14 наряду с изотопами с более низкой энергией излучения. Уровень 4 регистрирует β-частицы при минимальной ионизации.
Эмульсии Kodak и Ilford отличаются не только физическими параметрами; у них разная чувствительность к регрессии скрытого изображения, сроки годности и степень образования фона при быстром высушивании.
Методики, описанные в литературе для эмульсий Eastman Kodak, не дадут хороших результатов при использовании эмульсий Ilford, и наоборот. Из этого следует, что выбирать методику нужно с учетом типа эмульсии.
Эмульсия Eastman-Kodak. При получении авторадиографии для световой микроскопии используют обычно эмульсии NTB-2 и NTB-3. Первая менее чувствительна и подходит для Η3, I125, а также, по-видимому, для С14 и S35; NTB-2 можно использовать для изотопов с высокой энергией β-частиц. Как и следовало ожидать, менее чувствительная NTB-2 дает более низкий фон.
Обе эмульсии имеют одинаковые характеристики, отличаясь только степенью чувствительности, поэтому методика, предназначенная для одной эмульсии, полностью подходит и для другой. Обе дают воспроизводимые результаты и имеют низкий уровень фона. Эмульсии NTB можно хранить до 2 месяцев, желательно при 4° С. Ядерные эмульсии никогда нельзя замораживать.
Эмульсию обычно расплавляют в том стеклянном или пластмассовом контейнере, в котором ее хранят. Одну и ту же порцию эмульсии можно расплавлять и использовать несколько раз. Обычно ее не разбавляют, однако высушенную эмульсию можно разбавить дистиллированной водой без каких-либо изменений ее свойств. По данным Леблона и его сотрудников, эмульсии NTB подвержены значительной регрессии скрытого изображения. Рекомендуется тщательно высушивать препараты до экспонирования и экспонировать в присутствии влагопоглощающего вещества. Эти эмульсии требуют надежной защиты от света.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »