Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Ограничения современных методик - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие
  1. Нерастворимость радиоактивного материала. Следует отметить, что возможности электронномикроскопической авторадиографии ограничиваются в настоящее время применением радиоактивных материалов, которые не растворяются во многих водных и органических растворителях. Проблема использования растворимых изотопов не решена окончательно вследствие возможности их утечки при резке аппаратов и авторадиографии. Методика Вилске и Росс [21] включает высушивание при низкой температуре, фиксацию в парах осмия и прямую пропитку ткани эпоном, а эмульсию наносят на срез в виде желатинообразной пленки. Для электронномикроскопического изучения подходящими кажутся и растворимые изотопы, но хотя при световой микроскопии получены обнадеживающие результаты, способ консервации ткани недостаточно хорош для электронномикроскопической работы.
  2. Слабое разрешение. Размер кристаллов серебра в настоящее время, вероятно, не является главным лимитирующим фактором для улучшения разрешения [12]. Совершенно очевидно, что резкое уменьшение величины кристаллов никогда не открыло бы путь к значительным улучшениям в методике. Силк и др. [22] предложили методику отложения металлического серебра на поверхности объектов с последующей прямой обработкой бромом в виде газа. Они пытались продемонстрировать электронномикроскопические авторадиограммы, приготовленные таким способом, но, к сожалению, пренебрегли решающей контрольной проверкой нерадиоактивных объектов. Их фотографии с довольно необычным распределением Н3-тимидина скорее свидетельствуют о наличии артефактов, чем авторадиографических изображений. Из всего, что известно о фотографическом процессе, кажется невероятным, чтобы слой бромистого серебра такого типа, без изолирующего и смягчающего влияния желатиновой оболочки вокруг каждого отдельного кристалла, мог служить в качестве пригодной и воспроизводимой регистрирующей среды.
  3. Низкая эффективность. Мы уже немного касались низкой эффективности монослоев эмульсии.

Для получения более высокой эффективности с одновременным усилением разрешающей способности электронномикроскопической авторадиографии было предложено экспонировать срезы в сильном магнитном поле [23,24]. Таким путем надеялись направить через слой эмульсии большее количество β-частиц, испускаемых изотопом.
Теоретические расчеты [25] показали, что эти надежды необоснованны. И все-таки при такой методике выход зерен значительно увеличился. Само по себе это трудно объяснить. Можно предположить, что 50% частиц, испускаемых источником, пройдут через эмульсионный слой, остальные 50%, рассеиваясь, по Крайней мере первоначально, не попадут в пего. Таким образом, магнитное поле может только, как максимум, удвоить число β-частиц, попадающих в эмульсию. Тем не менее после экспонирования в магнитном поле было получено увеличение выхода зерен более чем в 10 раз [24]. Если это наблюдение подтвердится, его механизм остается неясным и не может быть объяснен простым увеличением количества β-частиц, достигающих эмульсии.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОЙ АВТОРАДИОГРАФИИ

Условия количественной авторадиографии детально обсуждались в гл. 8 и 10. Нет особых причин для того, чтобы авторадиограммы, приготовленные для электронной микроскопии, не могли быть такими же ценными в количественном отношении, как авторадиограммы, приготовленные для световой микроскопии. Критерии, которым должен удовлетворять материал для количественных исследований, таковы: известная толщина срезов, относительная их однородность, эмульсия с плотным монослоем и известными свойствами.
Сравнение плотности зерен над различными субклеточными структурами усложняется, однако, из-за низкого разрешения авторадиографии по отношению к электронной микроскопии. Если радиоактивность локализована в любом цитоплазматическом компоненте, кроме митохондрий, многие из видимых зерен серебра будут тем не менее лежать над митохондриями, плотность зерен над которыми будет значительно выше фоновой. Этот эффект перекрытия особенно нежелателен, если ставится задача изучить определенную структуру или органеллу клетки. Необходимо статистически сравнить распределение зерен серебра вокруг структуры, в которой предполагается накопление метки, с тем распределением, которое может быть предсказано на основании известного разрешения системы. Совершенно бессмысленно демонстрировать более высокую по сравнению с фоном плотность зерен над сомнительной структурой.

В световой микроскопии наиболее точным методом определения фона является счет зерен над нерадиоактивными, но в остальном идентичными срезами. В электронной микроскопии более обычную оценку обеспечивает подсчет зерен над участками, непосредственно  прилежащими к ткани.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »