Начало >> Статьи >> Архивы >> Авторадиография

Описание методик авторадиографии макроскопических объектов - Авторадиография

Оглавление
Авторадиография
Области применения авторадиографии
Радиоактивные изотопы
Авторадиография в сравнении с другими методами обнаружения ионизирующих излучений
Ядерные фотоэмульсии и фотографический процесс
Кристаллы бромистого серебра
Желатин
Скрытое изображение
Проявление скрытого изображения
Физическое проявление
Фиксирование эмульсии
Специальные методики
Цветные эмульсии
Воздействие ионизирующего излучения на ядерные эмульсии
Бета-частицы
Другие виды ионизирующего излучения
Разрешающая способность авторадиографии
Факторы, определяющие разрешающую способность зернистых авторадиограмм
Разрешение в электронномикроскопической авторадиографии
Разрешающая способность трековых авторадиограмм
Эффективность авторадиографии
Эффективность при электронномикроскопической авторадиографии
Эффективность трековой авторадиографии
Эффективность макроскопической авторадиографии
Соотношение между факторами, определяющими разрешение и эффективность
Фон авторадиограмм
Хемография
Облучение внешними источниками
Уничтожение фона
Измерение фона
Микроскопия и микрофотография авторадиограмм
Оптическая система для освещения в темном поле
Микрофотография зернистых авторадиограмм
Исследование в темном поле
Исследование и фотографирование трековых авторадиограмм
Относительные измерения радиоактивности
Перекрестные эффекты
Факторы связанные с эмульсией и влияющие на относительные измерения
Относительные измерения в трековой авторадиографии
Счет зерен и треков
Фотометрическая оценка плотности зерен
Выбор визуального или фотометрического метода счета зерен
Необходимость абсолютных измерений
Абсолютные измерения радиоактивности с помощью трековой авторадиографии
Планирование и осуществление авторадиографических исследований
Выбор эмульсии
Эксперименты с двумя изотопами
Освоение новой методики
Контрольные процедуры, необходимые для каждого эксперимента
Проектирование и оборудование темной комнаты
Гистологическая техника и авторадиография
Выбор способа гистологической фиксации
Методика приготовления гистологических срезов
Непроницаемые пленки
Приготовление авторадиограмм для микроскопии
Авторадиография растворимых радиоизотопов
Способы авторадиографии растворимого материала
Хемография и артефакты от давления
Количественные исследовани растворимых радиоактивных изотопов
Методика съемной эмульсии
Недостатки методики съемной эмульсии
Подробное описание методики  съемной эмульсии
Методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Факторы, влияющие на толщину эмульсионного слоя
Выбор подходящей толщины эмульсии
Оценка и описание методики жидкой эмульсии для авторадиографии с оценкой плотности зерен
Методика жидкой эмульсии для трековой авторадиографии
Авторадиография с электронной микроскопией
Ограничения современных методик
Детальное описание методик
Авторадиография макроскопических объектов
Авторадиография  в макроскопических образцах
Описание методик авторадиографии макроскопических объектов
Послесловие

1. Импрегнирование погружением в эмульсию Ilford ХК

Эмульсию Ilford ХК в виде желе необходимо хранить при температуре 4° С. Подобно другим желеобразным эмульсиям, она никогда не должна подвергаться замораживанию, срок ее хранения по крайней мере месяц, о хранении в течение более длительного времени данных нет.

Эмульсия ΧΙ более чувствительна к актиничному свету, чем ядерные эмульсии Ilford. Вполне подходит непрямой свет от лампочки 15 вт с фильтром Раттен № 2.
Необходимое оборудование. Термостатически контролируемая водяная баня на 43е С, два градуированных цилиндра каждый емкостью 50 мл, емкость для погружения образцов, размер и форма которой определяются исследуемым материалом: большая и плоская для бумажных хроматограмм, более глубокая и меньшего размера — для небольших образцов неправильной формы; одна пара зажимов из пластика, одна стеклянная палочка для размешивания.
Методика. Следуя общим положениям работы с жидкими эмульсиями, в сосуде приготовляют расплавленную и разведенную эмульсию. Объем зависит от размера образца, предназначенного для импрегнирования. Эмульсию следует развести дистиллированной водой в соотношении 1 :3, и к ней можно добавить глицерин в количестве 1% окончательного объема.
Образец осторожно погружают в эмульсию и сушат с минимумом манипуляций. Высушивать необходимо медленно и осторожно. Температура в комнате должна быть 18—19° С и относительная влажность около 50% при медленной циркуляции воздуха, прямое обдувание феном не рекомендуется.
Через 1,5—2 ч эмульсия должна высохнуть, и образец можно поместить в светонепроницаемый ящик для экспонирования. Экспонирование рекомендуется проводить в присутствии влагопоглощающего агента.
Проявление. Эмульсию проявляют в проявителе Фенизол, разведенном дистиллированной водой в отношении I :5 в течение 10 мин при 17° С, обрабатывают в течение 2 мин в останавливающем растворе 1%-ной уксусной кислоты. Фиксируют в кислом закрепителе в течение 30 мин. Промывают под слабой струен водопроводной воды в течение 20 мин и высушивают.

2. Импрегнирование напылением эмульсией

Необходимое оборудование. Требуется то же оборудование, что для импрегнирования путем погружения, за исключением сосуда для эмульсин, вместо которого используют стеклянный распылитель для хроматограмм с большим отверстием и конический баллон емкостью 500 мл со стеклянным отростком для крепления распылителя. Необходим также небольшой баллон с азотом, связанный с распылителем.
Методика. Расплавленную разведенную эмульсию готовят в коническом баллоне. Эмульсию следует развести дистиллированной водой в соотношении
1: 7, глицерин добавляют в количестве 1% конечного объема.
После приготовления эмульсию охлаждают до комнатной температуры при частом встряхивании баллона, чтобы эмульсия хорошо перемешалась. Когда эмульсия остынет, прикрепить головку распылителя, создать небольшое давление из баллона с азотом и напылять эмульсию на образец непрерывными ровными движениями с расстояния около 20 см.
Высушивание следует проводить в течение 1,5 ч при температуре 18— 20° С и относительной влажности 50%.
Экспозицию и проявление проводят так же, как и в случае импрегнирования путем погружения в эмульсию Ilford ХК.

3. Авторадиография всего тела лабораторных животных

Необходимое оборудование. Большой санный микротом монтируют в холодильной камере, где поддерживают температуру — 20° С Чтобы обеспечить хорошую нарезку срезов, контроль температуры должен проводиться специально выделенным сотрудником или быть автоматизированным.
Для резки необходимы липкая лента (скотч), достаточно широкая, чтобы покрыть блок, и жесткая щетка. Для обеспечения контакта эмульсии с образцом во время экспозиции потребуется также простой пресс, состоящий из двух алюминиевых пластин,|удерживаемых вместе зажимом.
Для всех изотопов используется неэкранированная рентгеновская пленка, за исключением трития, для которого используют пластинки Ilford.
Методика. Животным, обычно мышам, вводят радиоактивный изотоп. Для С14, чтобы получить удовлетворительное почернение от среза толщиной 20 мкм, достаточно 5 мккюри при экспонировании в течение 3—4 недель, если используется неэкранированная рентгеновская пленка. Животное анестезируют и быстро замораживают погружением в гексан при температуре сухого льда (—75° С) или изопентан при температуре жидкого азота (—150° С). Замороженную тушку укрепляют на блок микротома с использованием смеси карбоксилметилцеллюлозы с водой полужидкой консистенции. На этой стадии необходимо избегать оттаивания препарата.
После срезания блока до появления интересующих тканей приготавливают срезы всего тела обычно толщиной 20 мкм. Можно получить срезы в 5 мкм и в некоторых случаях в 2 мкм. Для получения целых пригодных срезов липкую лепту прикладывают на поверхность блока до нарезки. Осторожное давление жесткой кистью на ленту по краю ножа во время прохождения последнего через блок улучшает качество среза. Срез прилипает к ленте, и его можно снять с ножа. Его оставляют в морозильнике и высушивают при помощи сублимации.
После высушивания срез укладывают на пленку для экспонирования. На ленту кладут несколько слоев газеты и затем «сандвич» из газеты, лепты, среза, пленки и второго слоя газеты помещают в алюминиевый пресс и на все время экспонирования создают небольшое равномерное давление. Пресс хранят в светонепроницаемом боксе при —20° С. При этих условиях срез хорошо сохраняется, и хемография минимальная. После экспонирования пленку отделяют от среза и проявляют.
Если необходимо, срез можно окрасить и смонтировать под покровное стекло, не снимая его с ленты. После окрашивания и дегидратации в спирте срез с лентой монтируют на большое стекло и покрывают с помощью среды, смешивающейся со спиртом, например «эупарат», которую наносят на обе стороны ленты со срезом.
Количественные данные получают микроденситометрией авторадиограммы или подсчетом импульсов в участках, взятых из серийного среза толщиной 100 мкм.



 
« Автоматизированный мониторинг больных сахарным диабетом детей и подростков   Актуальные проблемы низкорослости у детей »