Начало >> Статьи >> Архивы >> Бесплодие у мужчин

Установление акинозооспермии - Бесплодие у мужчин

Оглавление
Бесплодие у мужчин
Анатомия и физиология
Penis
Уретра
Нервная регуляция эрекционной и эякуляционной функции
Яички
Придаток яичка
Семенные пузырьки
Предстательная железа
Взаимоотношения между семенными и другими эндокринными железами
Физические и химические свойства семени
Зрелый сперматозоид
Секреторное бесплодие
Первичный гипогонадизм
Синдром Клайнефельтера
Герминальная аплазия
Экзогенные поражения яичка
Влияние недостаточного питания на функцию яичек
Влияние рентгеновых и радиевых лучей
Влияние сосудистых нарушений яичка на его функцию
Мужской климактерий
Гипогонадизм без гормональных нарушений
Вторичная недостаточность яичка
Гиперэстрогенизм
Недостаточность лейдиговских клеток
Экскреторное бесплодие
Асперматизм
Патологические изменения свойств семени, не связанные с заболеванием яичек
Относительное бесплодие
Диагноз бесплодия
Исследование эякулята
Установление акинозооспермии
Определение продолжительности подвижности сперматозоидов
Определение резистентности сперматозоидов
Оценка результатов исследования эякулята
Биопсия яичка
Биохимические методы исследования
Гормональные исследования
Хроматиновый тест
Пробы на пенетрационную способность сперматозоидов
Лечение
Хирургическое лечение
Прогноз
Гомологичное обсеменение

Полная неподвижность сперматозоидов при большом количестве морфологически нормальных сперматозоидов наблюдается исключительно редко. Неподвижность сперматозоидов не является доказательством их смерти. Диагноз «некроспермия» может быть поставлен тогда, когда не удается вызвать подвижность сперматозоидов при разведении эякулята в каком-либо растворителе, активирующем их подвижность (раствор Рингера с глюкозой, Баккера, Локка). Лучше всего для этой цели воспользоваться растворителем Иоэля (см. стр. 150).
Предложенный, некоторыми авторами для оживления сперматозоидов метод нагревания эякулята не является достаточно надежным и не всегда устраняет существующее сомнение.
Весьма удобным и надежным методом для отличия мертвых сперматозоидов от живых является соответствующая прижизненная окраска, основанная на том, что живые сперматозоиды не воспринимают краски.
Блом (Blom, 1950) рекомендует окраску эозиннигрозином. На чистое обезжиренное предметное стекло наносят стеклянной палочкой каплю эякулята, которую смешивают с каплей двойного объема 10%-ного раствора эозина (голубоватый эозин 0,2 а; лимоннокислый натр — 0,3 г; дистиллированная вода—10 г). После того как смесь становится гомогенной, к ней прибавляют каплю учетверенного объема 10%-ного раствора нигрозина в дистиллированной воде. Полученную смесь тонко размазывают на стекле и через минуту после этого высушивают на пламени. Мазок рассматривают при 500-кратном увеличении или под иммерсией. Так как живые сперматозоиды остаются неокрашенными, то их легко отличить от окрашенных в коричневый цвет мертвых сперматозоидов.

Можно обойтись окраской эякулята без нигрозина. Иоэль и Квиат (Joel, Kwiat, 1955) предлагают в качестве метода определения живых и мертвых сперматозоидов окраску эякулята 0,5%-ным желтоватым или 1%-ным голубоватым эозином; последний в связи со стабильностью красящего вещества является более предпочтительным. Мертвые сперматозоиды окрашиваются, в то время как живые остаются неокрашенными. Подсчет сперматозоидов облегчается, так как в результате прибавления красящего вещества подвижность сперматозоидов исчезает. Методика весьма проста: капля эякулята наносится на предметное стекло и к нему прибавляется капля эозина. При сравнении метода окраски с методом определения жизнеспособности сперматозоидов в растворе Бакера и с нативными препаратами результаты оказались весьма идентичными. Коль скоро нет доказательств смерти неподвижных сперматозоидов, правильнее говорить об акинозооспермии (отсутствие подвижности), а не о некроспермии.

Определение патологических форм.

Ненормальные (атипические) формы сперматозоидов и их количество лучше всего определяются на окрашенных препаратах. Следует отметить, что распознавание этих форм зависит от многих технических факторов и опыта исследователя. Поэтому весьма целесообразно в практической работе указать не только количество ненормальных форм, но и перечислить сами формы (см. стр. 68).
Для окраски мазков применяют различные способы. Приведем некоторые из них. Мазок приготовляют обычным способом, высушивают на воздухе и фиксируют пламенем. Наливают на него на несколько секунд 1%-ный раствор хлорамина для удаления слизи. Промывают водой и 95°-иым алкоголем. Окрашивают в течение 2— 5 мин смесью фуксина и эозина следующего состава: части карболового фуксина Циля, одна часть насыщенного спиртового раствора эозина, одна часть 95°-ного алкоголя. Промывают водой, подкрашивают синькой Леффлера и исследуют с помощью иммерсионной системы (В. Е. Предтеченский, В. М. Боровская и Л. Т. Марголина, 1950). Для определения количества ненормальных форм следует подсчитать 400—600 сперматозоидов.

Из других методов окраски укажем на следующий: густое, но не вязкое семя до изготовления мазков разводят равным количеством рингеровского раствора или другой изотонической жидкости. Семя фиксируют 6 капле 2%-ной осмиевой кислоты на часовом стекле в течение 5 мин. В дальнейшем на протяжении одной минуты семя коагулируют орошением стекла жидкостью Шаудина. После фиксации мазок ополаскивают в йод- алкоголе, в течение 10 мин отмывают в проточной воде, красят гематоксилином Деляфильда, докрашивают водным или спиртовым эозином, обезвоживают и покрывают покровным стеклом. Мазок изучают с помощью иммерсионной системы (П. Я. Герке).
Большое признание получила окраска мазков эякулята гемалаунэозином и азурэозином. Один мазок окрашивают гемалаунэозином, другой — азурэозином. Обе окраски дополняют друг друга и позволяют делать более уверенное заключение о формах сперматозоидов. При первой окраске особенно хорошо выявляются сперматозоиды, в то время как при второй удается лучше отличить незрелые клетки сперматогенеза, в особенности пресперматиды.

Окраска гемалаунэозином. Эякулят равномерно размазывают на предметном стекле и высушивают на воздухе. Фиксируют в течение 2 мин метиловым спиртом, по 5 мин 95, 80 и 70%-ным этиловым спиртом, промывают ведой. Мазок красят в течение 5 мин 5%-ным кислым гемалауном и отмывают в течение 30 мин в проточной воде. Далее следует окраска в течение 2 мин 10%-ным спиртовым раствором эозина (контрастное окрашивание), 70, 9С и 100%-ный спиртовый ряд, карбол-ксилол. Мазок заделывают в канадский бальзам.

Окраска азурэозином. Мазок фиксируют в течение 2 мин метилалкоголем и окрашивают в течение 10 мин разбавленным раствором азурэозина по Гимза — Романовскому (10 капель раствора азурэозина в 5 мл дистиллированной воды). Краску следует всегда применять свежеприготовленную. Затем мазок промывают водой и заделывают в канадский бальзам.
 Весьма ценным является метод окраски мазков эякулята, предложенный А. А. Рубенковым (1959) в практике животноводства, позволяющий подсчитать одновременно количество нормальных и патологических сперматозоидов.

В смеситель для лейкоцитов набирают 0,5 мл эякулята и разводят его из расчета 1 :20 краской следующего состава: фуксин основной — 0,1 г; азурэозин по Гимза (азур II — 0,8 г; эозин — 3 г) —0,02 г; кислота карболовая кристаллическая — 0,2 г; глицерин чистый — 0,1 г; спирт-ректификат 96%-ный — 2 мл; 1%-ный раствор химически чистого хлористого натрия на дистиллированной воде— 100 мл. Содержимое меланжера тщательно перемешивают в течение 20 мин путем колебательных и круговых движений; при этом все сперматозоиды прекращают движение и уже через 5 мин пригодны для подсчета. Счетная камера заряжается обычным образом. Подсчет сперматозоидов производится в счетной камере Горяева в 5 больших квадратах при увеличении в 400 раз (объектив 40, окуляр 10), позволяющем хороню различить головку, шейку и хвост сперматозоида и имеющиеся в них изменения. Удобно при подсчете пользоваться счетчиками для лейкоцитов крови, с помощью которых можно сразу отмечать нормальные и патологические сперматозоиды и автоматически суммировать их. Если же нет счетчика, то рекомендуется разграфить бумагу следующим образом:

Сначала производится подсчет в одном большом квадрате всех сперматозоидов, в том числе и патологических. Результаты записывают в первую клетку первой строки. Затем считают на той же площади отдельно сперматозоиды с патологией головки и заносят в первую клетку второй строки. После этого подсчитывают все сперматозоиды с патологией хвоста и записывают в первую клетку третьей строки. Также поступают при подсчете других 4 больших квадратов, после чего складывают полученный результат по горизонтали. Для определения количества сперматозоидов в 1 мл достаточно, как уже было указано (стр. 148), всю сумму сперматозоидов умножить на 1 000 000.

Как показывают наши наблюдения, а также наблюдения других авторов (П. А. Волосков, М. А. Кунин), метод А. А. Рубенкова одновременного подсчета общего количества сперматозоидов в 1 мл и процента патологических форм является весьма удобным и в достаточной степени объективным.
При оценке патологических форм сперматозоидов следует придавать особое значение изменениям головки, которые для оплодотворяющей способности эякулята имеют большее значение, чем изменения в промежуточной части и хвосте. Сперматозоиды со значительным увеличением или уменьшением объема головки, а также с двойными головками, безусловно, не способны к оплодотворению. Деформация головки является результатом дефекта развития сперматозоидов в сперматогенном эпителии. Изменения в промежуточной части, проявляющиеся в виде вздутия и утолщения, могут возникать в придатке яичка, вследствие нарушения его функции. Что касается изменений в хвосте, то они могут быть первичного или вторичного происхождения. Двойные хвосты следует считать первичным пороком развития; различные отклонения в расположении хвоста вторичного происхождения зависят нередко от вредных воздействий внешней среды после выделения семени. Сперматозоиды с цитоплазматическими остатками па промежуточной части следует рассматривать как незрелые формы, появляющиеся при быстром прохождении семени через придаток в результате весьма частых половых актов (ем. стр. 34). При длительном половом воздержании могут возникать перезрелые формы сперматозоидов, которые характеризуются образованием вакуол в головке, а также тем, что они частично или вовсе не опрашиваются (апигментированные формы).
Незрелые и перезрелые формы сперматозоидов не следует так строго оценивать, как дегенеративные. Путем повторного исследования эякулята удается выяснить, идет ли речь о временных или постоянных морфологических изменениях сперматозоидов. Патологические формы сперматозоидов, являющиеся результатом повреждения сперматогенного эпителия, отличаются большим постоянством и обнаруживаются при повторных исследованиях эякулята. Необходимо также считаться с тем, что при наличии большого количества морфологически измененных сперматозоидов в эякуляте можно допустить, что и другие нормальные на вид сперматозоиды в результате существующего повреждения семенного эпителия могут оказаться в функциональном отношении недостаточно полноценными и жизнеспособными.
Как патологию следует рассматривать увеличение в эякуляте количества незрелых форм сперматогенеза. В нормальном эякуляте количество незрелых форм (сперматогоний, сперматоцитов, и сперматид) не превышает 2—3 на 100 зрелых сперматозоидов. При выраженной олигозооспермии количество незрелых форм резко увеличивается и может достигать 25—30 и больше процентов.

Результаты приведенных методов исследования характеризуют основные наиболее важные свойства эякулята, которые позволяют судить о его оплодотворяющей способности. Результаты исследования эякулята могут быть отражены на специальной карте.

Дополнительные методы исследования эякулята. В некоторых случаях, в особенности тогда, когда перечисленные результаты исследования эякулята выпадают недостаточно отчетливо и не позволяют делать надежные выводы о его оплодотворяющей способности, можно прибегнуть к некоторым дополнительным исследованиям.



 
« Бели у девочек   Биохимические исследования при инфекционных болезнях »