Начало >> Статьи >> Архивы >> Гематология детского возраста

Счет кровяных телец - Гематология детского возраста

Оглавление
Гематология детского возраста
Введение
Эмбриональное развитие кроветворного аппарата
Особенности кровотворения у детей
Теория кровотворения
Эритроциты
Зернистые лейкоциты
Лимфоциты, агранулоциты, незернистые лейкоциты
Моноциты
Плазматические клетки
Мегакариоциты
Кровяные пластинки
Эндотелиальные клетки
Классификация нейтрофилов
Гемограмма по
Общие и физические свойства крови
Кровь детей в период новорожденности
Особенности крови детей первого года жизни
Особенности крови детей в возрасте старше одного года
Особенности крови у недоношенных детей
Особенности крови и кровотворного аппарата детей с диатезами
Химические и биохимические свойства крови
Анемии
Анемии эндогенного происхождения
Врожденные гемолитические анемии новорожденных
Гемолитическая анемия
Редкие формы гемолитической анемии
Анемия недоношенных детей
Апластическая анемия Эрлиха
Хлороз (бледная немочь)
Злокачественное малокровие
Послегеморрагические анемии
Алиментарные анемии
Анемии инфекционные и послеинфекционные
Токсические анемии
Анемии на почве негигиенического образа жизни
Псевдоанемия
Профилактика малокровия у детей
Лечение малокровия у детей
Полицитемии
Агранулоцитозы
Лейкозы
Острые лейкозы
Хронические лейкозы
Лечение лейкозов
Лимфосаркома
Миеломная болезнь
Ретикуло-эндотелиозы
Спленомегалии типа Гоше и Ниман-Пикка
Спленопатии
Лимфогранулематоз
Инфекционные гранулемы
Геморрагический диатез
Гемофилия
Гипоконвертинемии
Болезнь Верльгофа
Геморрагическая тромбастении
Болезнь Шенлейн—Геноха
Дифференциальный диагноз геморрагического диатеза
Лечение различных форм геморрагического диатеза
Пароксизмальная гемоглобинурия
Гематопорфирия
Симптоматические изменения крови при различных заболеваниях детей
Влияние эндокринных расстройств на состав крови
Техника взятия крови
Определение общего количества крови
Техника исследования морфологических особенностей крови
Счет кровяных телец
Определение цветового показателя
Приготовление мазков крови
Окраска препаратов
Подсчет лейкоцитарной формулы
Лейкоцитарный профиль Ш. Д. Мошковского
Дополнительные методы исследования
Техника исследования основных физико-химических свойств крови
Определение ферментов
Определение групп крови
Определение Rh-фактора
Техника прижизненного исследования кровотворных органов
Функциональная диагностика кроветворного аппарата ребенка
Таблицы

Счет красных кровяных телец

В специальный смеситель для эритроцитов (рис. 26) насасывают кровь до метки 0,5 или 1 (при анемиях), кончик капилляра аккуратно вытирают и погружают в маленькую стеклянную солонку1 с 1%-ным раствором поваренной соли, который и набирают до метки 101.

1 Растворы для разведения крови никогда не следует набирать в капилляры прямо из общей бутылки, небольшое количество их наливается, а еще лучше ex tempore профильтровывается в небольшие стеклянные чашечки (солонки), из которых одна (на ней делается соответствующая отметка) служит только для раствора поваренной соли, а другая — для уксусной кислоты.

 Еще предпочтительнее для разведения пользоваться жидкостью Гайема: Hydrargyri bichlorati 0,5; natrii sulfuriei 5,0; natrii chlorati 1,0; aq. dest. ad 200,0, так как 1%-ный раствор NaCl иногда через некоторое время гемолизирует часть телец, а 2—3%- ный раствор, рекомендуемый некоторыми авторами, часто вызывает сильное их сморщивание. Если кровь взята до метки 0,5, то получается разведение в 200 раз, если до метки 1 — в 100 раз. Убедившись, что жидкость в смесителе стоит ровно на метке 101 и нет пузырьков воздуха, оба конца капилляра зажимают пальцами правой руки и сильно встряхивают в течение 2—3 мин. Тщательному и равномерному размешиванию способствует стеклянная дробинка, находящаяся в широкой части

Рис. 26. Камера типа Бюркера для счета крови со смесителями для белых и красных кровяных телец.

Рис. 27. Счетная камера типа Тома — Цейсса.
смесителя. Затем из тонкой части смесителя выдувают неокрашенную жидкость, а оставшееся в капилляре содержимое снова взбалтывают в течение 2—3 мин вместе с образовавшимся во вздутой части пузырьком воздуха. После этого жидкость, содержащуюся в капиллярной части смесителя, выпускают на кусок фильтровальной бумаги, кончик капилляра обтирают и выпускают капельку взвеси эритроцитов на поверхность счетной камеры.
Счетные камеры. Для подсчета крови предложен ряд камер с различными сетками. Наиболее распространены камеры типа Тома — Цейсса с сеткой Тома и Тюрка; значительно удобнее камеры типа Бюркера с сетками Горяева, Тома, Тюрка, Бюркера и др.
Камера типа Тома — Цейсса представляет собой довольно толстое, хорошо отшлифованное предметное стекло, на середине которого приклеено маленькое кругленькое стеклышко с нанесенной на нем счетной сеткой (рис. 27). Последнее расположено в центре круглого отверстия в другом маленьком стекле квадратной формы, также плотно приклеенном на предметное стекло; таким образом, получается, что маленькое стеклышко окружено узеньким желобком. Квадратное стеклышко толще круглого на 0,1 мм.
Капля исследуемой взвеси красных кровяных телец наносится на счетную сетку на круглом стеклышке и затем осторожно, чтобы не образовалось пузырьков воздуха, на квадратное стекло накладывается хорошо отшлифованное покровное стекло и тщательно притирается к нему осторожным надавливанием и поглаживанием с противоположных сторон, пока не получатся ньютоновы кольца, указывающие, что покровное стекло наложено правильно и, следовательно, слой жидкости над сеткой точно равен 0,1 мм (глубина камеры).

Рис. 28. Счетная камера Бюркера с сеткой Тюрка.
1— основная пластинка (справа зажим снят); 2 — отверстие для зажима; 3 — покровное стекло (укреплено зажимом с одной стороны); 4 — зажимы; 5 — левый зажим; 6 — счетные сетки; 7 — глубина камеры; 8 — опорные перекладины из желтого стекла; 9 — желобок, разделяющий обе половины камеры; 10 — выступ, служащий для введения капли.

Вся трудность и состоит в том, чтобы соразмерить величину капли, которая должна покрывать все маленькое круглое стеклышко и вместе с тем не переходить через желобок и не растекаться между покровным и квадратным стеклышками. Попадание жидкости только в желобок не нарушает точности дальнейшего исследования.
В камерах типа Бюркера (рис. 28) сперва тщательно притирается покровное стекло, для чего имеются иногда даже специальные металлические лапки, с помощью которых и достигается плотное его прилегание.
На предметное стекло (у самого края покровного) наносится капля исследуемого разведения крови, которая в силу капиллярности распространяется под покровным стеклом и покрывает счетную сетку, нанесенную в этих камерах непосредственно на самом предметном стекле. Дальнейший подсчет производится различно, в зависимости от особенности счетной сетки.
В сетке Тома (рис. 29) общая поверхность всего большого квадрата, образуемого пересечением горизонтальных и вертикальных линий, распадается на 16 квадратов средней величины, разделенных между собой тройными линиями. Каждый средний квадрат состоит из 16 маленьких квадратиков со стороной, равной 1/20 мм и, следовательно, с общей поверхностью в 1/400 мм2 . Объем жидкости, соответствующий одному маленькому квадратику, равен 1/4000 мм3 ( 1/400· 1/10). так как расстояние между поверхностью сетки и нижней поверхностью правильно притертого покровного стекла, как уже было сказано, равняется 1/10 мм.

После того как капля разведенной крови правильно растеклась под покровным стеклом, камеру оставляют на 2—3 мин. в строго горизонтальном положении, чтобы эритроциты успели осесть, а затем помещают ее на столик микроскопа и с помощью объектива средней силы1 отыскивают сетку, несколько опустив для этого осветитель Аббе и слегка сузив диафрагму. Получив отчетливое изображение сетки с расположенными на ней эритроцитами и убедившись в равномерном распределении их по всем полям зрения, приступают к подсчету. Необходимо сосчитать число клеток, расположенных в 5 средних, т. е. 80 маленьких квадратах. В целях большей точности вполне целесообразно считать не по соседним средним квадратам, а по обозначенным на рисунке цифрам— 1, 2, 3, 4 и 5. Для того чтобы облегчить работу, подсчет ведут по маленьким квадратикам, а чтобы избежать повторного сосчитывания телец, лежащих на линиях, разделяющих квадраты между собой, подсчитывают все эритроциты в середине квадратика, а затем и лежащие только на левой и верхней или на правой и нижней сторонах каждого маленького квадратика (рис. 30). Таким образом исключается возможность повторного подсчета одних и тех же клеток.
Начинающим целесообразно записывать число эритроцитов в каждом маленьком квадратике, что облегчает необходимую иногда проверку; уже привыкшие к работе могут записывать число кровяных телец лишь в каждом среднем квадрате.

Дальнейший расчет ведется так: 512 эритроцитов приходится на 5 средних или 80 маленьких квадратиков:следовательно, на один маленький квадрат в среднем приходится; так как объем, соответствующий поверхности маленького квадратика,равен 1/400 мм3, то в 1 мм3 разведенной в 200 раз крови будеткровяных телец,
а в 1 мм3 цельной крови будет в 200 раз больше, т. е.


1 Объективы № 5, 6, 7 Лейтца и Цейсса. Окуляры 1, 2, 3.


Рис. 29. Сетка Тома.

Рис. 30. Средний квадрат сетки Тома с 16 маленькими квадратиками.

Рис. 31. Сетка Тюрка.

Рис. 33. Сетка Горяева.

Рис. 32. Сетка Нейбауэра.

Рис. 34. Сетка Бюркера.

Конечно, нет надобности каждый раз проделывать подсчет в такой последовательности; если всегда просчитывать 80 маленьких квадратиков, а разведение крови делать в 200 раз, то полученную при подсчете сумму эритроцитов (в нашем примере — 512) достаточно умножить на 10000, т. е. приписать справа четыре нуля. Если разведение крови сделано только в 100 раз, т. е. в смеситель кровь была взята до метки 1, то полученную цифру надо умножить на 5000.
Для получения более точных результатов следует повторить 3—4 раза такой подсчет; каждый раз (после предварительного встряхивания капилляра) в камеру вносится новая капля и каждый раз снова подсчитывается 80 маленьких квадратиков. За окончательный результат берется среднее арифметическое всех подсчетов.
Встречающиеся при подсчете эритроцитов лейкоциты, конечно, не подсчитываются.
Сетка Тюрка, хотя и менее распространенная в наших клиниках и лабораториях, является одной из наиболее удобных. Она состоит из 9 больших квадратов, образуемых пересечением горизонтальных и вертикальных тройных и двойных линий (рис. 31).
Каждый из них по поверхности равен всей сетке Тома; средний квадрат разделен совершенно так же, как в камере Тома, и служит для подсчета эритроцитов; все остальные имеют более простое деление, а четыре из них, расположенные по углам, служат для подсчета белых кровяных телец.
Сетка Нейбауэра (рис. 32) совершенно аналогична сетке Тюрка, но боковые большие квадраты разделены на 16 средних не двойными, а одинарными линиями. Подсчет производится так же, как с предыдущей сеткой.
Сетка Горяева имеет 225 (15-15) больших квадратов, из которых часть разделена на 16 маленьких (рис. 33). Последние служат для подсчета эритроцитов, большие — для подсчета лейкоцитов.
Сетка Горяева имеется на камерах типа Бюркера, изготовляемых в Советском Союзе.
Сетка Бюркера (в камере Бюркера обычно имеется 2 одинаковых сетки) представляет собой квадрат (рис. 34) со стороной, равной 3 мм, и с общей поверхностью в 9 мм2 , т. е. поверхность равна 9 сеткам Тома. Этот большой квадрат параллельными, горизонтальными и вертикальными линиями разделен на 144 маленьких квадрата со стороной в 1/5 мм и поверхностью в 1/25 мм2 . Эти маленькие квадраты отделяются друг от друга двойными линиями, отстоящими одна от другой на 1/20 мм и, следовательно, при перекресте горизонтальных и вертикальных двойных линий образуются еще меньшие квадратики с поверхностью в 1/400 мм2 (т. е. каждый из них равен маленькому квадрату сетки Тома), которыми и пользуются для подсчета эритроцитов.
Подсчитываются все эритроциты, лежащие внутри квадратика, а также и те, которые, располагаясь на всех четырех сторонах его, наполовину или больше переходят внутрь квадрата.
Большие квадраты, разбитые на 16 малых и отделенные один от другого тройными линиями, служат для подсчета белых кровяных телец. Эта сетка не особенно удобна для подсчета красных кровяных телец и, наоборот, удобна для счета лейкоцитов.
На других счетных сетках, как менее удобных и не столь распространенных, мы не будем останавливаться.

Счет белых кровяных телец

Для подсчета лейкоцитов используется другой смеситель — с метками 0,5—1—11. Между двумя последними имеется небольшое вздутие, содержащее, как и смеситель для эритроцитов, небольшую стеклянную дробинку. Техника взятия крови совершенно такая же, как и для красных кровяных телец, но кровь обычно насасывается не до 0,5, а до 1 (разведение в 10 раз) и лишь при значительных лейкоцитозах — до 0,5 (разведение в 20 раз). Для разведения крови служит 1—2%-ный раствор уксусной кислоты, растворяющий только эритроциты. Для большей отчетливости раствор уксусной кислоты подкрашивается генциан- виолетом или метилвиолетом (1 мл 1%-ного раствора краски на 100мл раствора уксусной кислоты), благодаря чему ядра лейкоцитов окрашиваются и становятся еще более заметными. Подкрашенный раствор уксусной кислоты насасывают в капилляр до метки с цифрой 11, после чего содержимое смесителя тщательно встряхивается. В дальнейшем капля наносится на сетку в камеры совершенно так же, как при подсчете красных кровяных телец.
Сетка Тома наименее удобна для подсчета лейкоцитов, так как имеет малую поверхность. При пользовании ею сосчитываются все тельца, расположенные на всей сетке, т. е. над поверхностью в 1 мм2 (описание делений см. выше). Допустим, что у нас во всей камере (1/10 мм3) оказалось 78 лейкоцитов; следовательно в 11 мм3 разведенной крови их будет 780, а в 1 мм3 цельной крови — 7800. При пользовании камерой с сеткой Тома ограничиваться однократным подсчетом (одной капли) ни в коем случае не следует, а желательно произвести подсчет 2—3 раза. Перед нанесением новой капли камера вытирается насухо, а оставшееся в смесителе содержимое снова тщательно смешивается. Сумма лейкоцитов, полученная при всех подсчетах, делится на число сосчитанных капель, а полученное среднее умножается на 100 при разведении крови в 10 раз и на 200 — при разведении в 20 раз.
Для подсчета белых кровяных телец гораздо удобнее пользоваться камерой с сеткой Горяева, Тюрка или Нейбауэра, в которых сосчитывается число лейкоцитов в четырех больших угловых квадратах (см. рис. 31, 32 и 33) и полученная сумма умножается на 25, что и дает число белых кровяных телец в 1 мм3. Поверхность каждого углового большого квадрата равна 1 мм2 , соответствующий ему объем равен 0,1 мм3, объем же четырех полей — 0,04; следовательно, общую сумму телец в четырех полях надо разделить на 0,4 и умножить на 10, т. е. на разведение крови.
При разведении крови в 20 раз полученная сумма умножается на 50.

Для подсчета белых кровяных телец особенно удобна камера с сеткой Бюркера (см. рис. 33), в которой подсчитываются лейкоциты в 125 маленьких квадратах, разделенных между собой двойными линиями, причем целесообразно на одной сетке сосчитать 63, а на другой 62 квадрата. Так как поверхность каждого квадрата равна 1/25 мм2 , а соответствующий ему объем 1/250 мм2 , то объем 125 квадратов равен 1/2 мм2 , и, следовательно, полученную сумму телец во всех квадратах надо умножить на 20 при разведении крови в 10 раз и на 40 при разведении в 20 раз.
При лейкемиях для подсчета белых кровяных телец приходится делать еще большие разведения; кровь набирается в смеситель для лейкоцитов не до 0,5, а лишь до деления 1 или 2; еще лучше пользоваться смесителем для эритроцитов и делать разведение в 100 раз. В конечном подсчете вводится соответствующая поправка.
По окончании работы капилляры и камера должны быть немедленно тщательно вымыты. Капилляры промывают сначала несколько раз дистиллированной водой, затем два раза спиртом и два раза эфиром, а затем высушивают, продувая их с помощью двойного резинового баллона. Капилляр должен быть совершенно чист и сух, что легко узнать по свободному движению стеклянной дробинки в расширенной части смесителя. Если в капиллярной части, что бывает особенно часто в верхнем ее отделе у метки 1, образуется небольшой сверток фибрина, то необходимо удалить его механически чистым конским волосом, обезжиренным эфиром или тончайшей металлической проволокой. От времени до времени смесители промываются раствором двухромовокислого калия в серной кислоте (Kalium bichromatum 20,0; aq. dest. 200,0; ас. sulfuricum purum 20,0).
Камера промывается дистиллированной водой и тщательно вытирается тонкой полотняной тряпочкой. Очищать камеру спиртом, эфиром и особенно ксилолом не следует, так как склеивающий камеру канадский бальзам при этом легко растворяется.
В последнее время в практику больших лабораторий входят более точные подсчеты — фотометрический и электронный. На описании этих методов, пока еще не получивших широкого применения мы останавливаться не будем ·.

Счет эозинофилов по Дунгеру

В некоторых случаях желательно бывает подсчитать отдельно число эозинофилов, для чего можно пользоваться не только мазком, как это будет описано ниже, а той же счетной камерой с сеткой Горяева, Бюркера, Тюрка или Нейбауэра. Кровь набирается в смеситель для белых кровяных телец до метки 1, а до 11 насасывается вместо обычного раствора уксусной кислоты раствор эозина: 1%-ный водный раствор эозина, ацетон аа 10,0; дистиллированная вода 100,0.
Зерна эозинофилов отчетливо окрашиваются. Расчет ведется по правилам, указанным выше для подсчета белых кровяных телец.1

1 Описание имеется в руководстве И. Тодорова. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София. 1961.

Счет кровяных пластинок

По Фонио. Наиболее распространенным является метод Фонио, дающий при хорошей технике весьма точные результаты. После обычной обработки пальца теплой водой и эфиром (у маленьких детей в области мякоти, у старших — лучше в области ногтевого ложа) наносится капля свежеприготовленного 14%-ного раствора сернокислой магнезии (magnesium sulfuricum), через которую делается пером Дженнера или, еще лучше, обыкновенной иглой от шприца совсем маленький укол. Капля крови, поступающая сама или под очень слабым надавливанием непосредственно в раствор магнезии, тщательно перемешивается с раствором тонкой стеклянной палочкой, вытянутой над огнем спиртовой лампочки в ниточку с небольшим утолщением на конце. Капля крови должна быть приблизительно в 4—5 раз меньше капли раствора магнезии. Затем обычным способом (см. стр. 304) покровным стеклышком делается мазок на хорошо вымытом и обезжиренном предметном стекле. Мазок высушивается на воздухе и через сутки фиксируется метиловым спиртом (3 мин) и затем окрашивается краской Романовского — Гимзы (2 капли краски на 1 мл слегка подщелоченной дистиллированной воды) в течение 1 ч (см. детали на стр. 307). Мы обычно помещаем чашку Петри с окрашивающимся мазком в термостат при температуре 37°. После этого мазок промывается осторожно водой и высушивается на воздухе. Для подсчета пластинок, окрашивающихся при таком способе в темно-фиолетовый цвет, пользуются окуляром Эрлиха или вкладным счетным окошечком Шиллинга (рис. 35). Очень удобно пользоваться «вкладышем» Сименштейна: из плотной черной бумаги вырезают два кружочка диаметром чуть меньше диаметра просвета окуляра; посередине каждого кружочка пробойником выбивают отверстие диаметром 2,25 см. Одно из этих бумажных колечек смазывают с одной стороны клеем, и на него накладывают на равном друг от друга расстоянии 5 волосков или ниток, затем поверх их наклеивают второе бумажное кольцо. Такой «вкладыш» помещают в окуляр. При пользовании им все поле зрения разделяется на 6 колонок, по которым легко сосчитываются бляшки и эритроциты. Пользуясь одним из этих приспособлений, в различных местах препарата подсчитывают 2000 эритроцитов, причем одновременно отмечают и количество кровяных пластинок, встретившихся во всех просмотренных полях.

Рис. 35. Счетное окошечко Шиллинга.
Абсолютное количество пластинок в 1 мм3 легко высчитать, если предварительно сосчитано число эритроцитов.

Пример. Допустим, что у ребенка имеется 4 600 000 красных кровяных телец в 1 мм3. При подсчете пластинок (по Фонио) оказалось, что на 2000 сосчитанных эритроцитов приходится 190 пластинок. Число пластинок в 1 мм3 легко определяется из уравнения: 190 : 2000=х : 4 600 000, откуда х=437 000. 1

1 2 капли 1%-ного раствора natrii carbonici на 100 мл воды.

Описанный способ дает точные результаты, если не пользоваться мазками, на которых пластинки лежат кучками, склеившись в небольшие группы, что нередко бывает при недостаточно пунктуальной технике (старый раствор магнезии, необезжиренные стекла и т. д.).
Метод Н. Г. Алексеева для одновременного подсчета ретикулоцитов и тромбоцитов. В колбу емкостью 100 мл насыпают 1,0 азур II и вливают ранее приготовленный раствор 5,0 лимоннокислого натрия и 0,4 хлористого натрия в 45 мл дистиллированной воды. Колбу нагревают до начала кипения и остывший раствор фильтруют. Полученный фильтрат набирают до метки 1 в меланжер для счета лейкоцитов и сразу же насасывают кровь приблизительно до 4\5 объема расширения меланжера. Чистую кровь из капиллярной части меланжера выдувают на ватку, а оставшуюся кровь с красителем выдувают на часовое стекло и всасывают обратно в меланжер 3 раза. Набрав раствор в 3-й раз, меланжер оставляют лежать в горизонтальном положении на 15—30 мин. После этого хорошо, 1—2 мин, встряхивают меланжер и удаляют из него 2 капли, а из оставшейся части смеси делают на предметных стеклах несколько обычных мазков. Высохшие на воздухе мазки окрашивают 3 мин краской Май—Грюнвальд и докрашивают по Гимзе—Романовскому (1,5—2 капли на 1 мл дистиллированной воды) в течение 30—45 мин. Включения ретикулоцитов окрашиваются в синий цвет, а тромбоциты в сиренево-розовый. Подсчет производится так же, как и при выше описанном методе.
По Данилину. Тромбоциты подсчитываются в обычной камере для счета крови. В смеситель для эритроцитов набирают кровь до метки 0,5 и быстро насасывают до метки 101 раствор малахитовой зелени (2%-ный водный раствор поваренной соли—53 мл и 1%-ный водный раствор малахитовой зелени— 1 мл.).
Смеситель осторожно встряхивают в течение одной минуты; каплю полученной взвеси помещают в камеру, оставляют стоять 3 мин и затем производят подсчет. Тромбоциты окрашиваются в интенсивно зеленый цвет; эритроциты имеют слегка зеленоватый оттенок и также могут быть сосчитаны одновременно в течение первых 20 мин. Позже наступает частичное их растворение.



 
« Гематологический и иммунологический мониторинг у детей больных ИЗСД в течение инсулинотерапии   Гематология детского возраста с атласом миелограмм »