Начало >> Статьи >> Архивы >> Гематология детского возраста

Техника исследования основных физико-химических свойств крови - Гематология детского возраста

Оглавление
Гематология детского возраста
Введение
Эмбриональное развитие кроветворного аппарата
Особенности кровотворения у детей
Теория кровотворения
Эритроциты
Зернистые лейкоциты
Лимфоциты, агранулоциты, незернистые лейкоциты
Моноциты
Плазматические клетки
Мегакариоциты
Кровяные пластинки
Эндотелиальные клетки
Классификация нейтрофилов
Гемограмма по
Общие и физические свойства крови
Кровь детей в период новорожденности
Особенности крови детей первого года жизни
Особенности крови детей в возрасте старше одного года
Особенности крови у недоношенных детей
Особенности крови и кровотворного аппарата детей с диатезами
Химические и биохимические свойства крови
Анемии
Анемии эндогенного происхождения
Врожденные гемолитические анемии новорожденных
Гемолитическая анемия
Редкие формы гемолитической анемии
Анемия недоношенных детей
Апластическая анемия Эрлиха
Хлороз (бледная немочь)
Злокачественное малокровие
Послегеморрагические анемии
Алиментарные анемии
Анемии инфекционные и послеинфекционные
Токсические анемии
Анемии на почве негигиенического образа жизни
Псевдоанемия
Профилактика малокровия у детей
Лечение малокровия у детей
Полицитемии
Агранулоцитозы
Лейкозы
Острые лейкозы
Хронические лейкозы
Лечение лейкозов
Лимфосаркома
Миеломная болезнь
Ретикуло-эндотелиозы
Спленомегалии типа Гоше и Ниман-Пикка
Спленопатии
Лимфогранулематоз
Инфекционные гранулемы
Геморрагический диатез
Гемофилия
Гипоконвертинемии
Болезнь Верльгофа
Геморрагическая тромбастении
Болезнь Шенлейн—Геноха
Дифференциальный диагноз геморрагического диатеза
Лечение различных форм геморрагического диатеза
Пароксизмальная гемоглобинурия
Гематопорфирия
Симптоматические изменения крови при различных заболеваниях детей
Влияние эндокринных расстройств на состав крови
Техника взятия крови
Определение общего количества крови
Техника исследования морфологических особенностей крови
Счет кровяных телец
Определение цветового показателя
Приготовление мазков крови
Окраска препаратов
Подсчет лейкоцитарной формулы
Лейкоцитарный профиль Ш. Д. Мошковского
Дополнительные методы исследования
Техника исследования основных физико-химических свойств крови
Определение ферментов
Определение групп крови
Определение Rh-фактора
Техника прижизненного исследования кровотворных органов
Функциональная диагностика кроветворного аппарата ребенка
Таблицы

ГЛАВА IV
ТЕХНИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ОСНОВНЫХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КРОВИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ УДЕЛЬНОГО ВЕСА КРОВИ

Способ Гаммершлага. 4 мл хлороформа и 11 мл бензола вливают в узкий цилиндр и осторожно из пипетки впускают туда же каплю крови. Если капля крови падает на дно, значит удельный вес ее больше удельного веса смеси и надо прибавить хлороформа; если капля всплывает наверх, она легче смеси и приходится прибавить бензола. Когда капля не падает на дно и не всплывает наверх, а держится в середине столба жидкости, измеряют ареометром (с делениями от 1,040 до 1,090) удельный вес последней, который и будет равен удельному весу крови.
Роджерс (Rogers) упрощает методику: предварительно приготовляется серия смесей воды с глицерином различного удельного веса от 1040 до 1070. Внося капли крови в эти смеси, легко установить удельный вес исследуемой крови.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ СТОЙКОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ

Способ Лимбекка. Для практических целей вполне можно ограничиться простым и легко осуществимым при всяких условиях работы видоизмененным нами способом Лимбекка.
В ряд маленьких пробирок (агглютинационных) точной пипеткой отмеривают убывающие количества 0,8%-ного раствора хлористого натрия (табл. 79), затем содержимое каждой пробирки доводят до объема в 1 мл, добавляя дистиллированную воду.

Разведение раствора хлористого натрия
(по методу Лимбекка)
№ пробирки


Растворы

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

 15

16

17

0,8%-вый

1

0,95

0,9

0.85

0,8

0.75

0.7

0,65

0,6

0,55

0.5

0,45

0.4

0.35

0,3

0,25

0,2

раствор NaCl (в мл)
Дистиллированная

 

0,05

0,1

0,15

0,2

0.25

0,3

0,35

0,4

0,45

0,5

0,55

0,6

0,65

0,7

0,75

0,8

 вода (в мл) NaCl (в %)

0,8

0,76

0,72

0,68

0,64

0,6

0,56

0,52

0,48

0,44

0,4

0,35

0,32

0,28

0,24

0,2

0,16

 При массовых исследованиях можно заготовить в ряде бутылочек растворы хлористого натрия различной концентрации (см. табл. 79) и в каждую пробирку наливать сразу по 1 мл из отдельных склянок. Однако эти растворы легко портятся, и их надо часто заменять новыми.
В пробирках с растворами хлористого натрия слабой концентрации происходит гемолиз, причем в некоторых только частичный, в других— полный. При полном гемолизе содержимое пробирки совершенно прозрачно, не мутится при взбалтывании и окрашено в ярко-красный цвет. Первая пробирка, в которой произошел полный гемолиз, характеризует максимальную осмотическую стойкость эритроцитов, условно обозначаемую процентом поваренной соли в этой пробирке. В тех пробирках, где гемолиз только начался, верхний слой жидкости оказывается окрашенным в желтый цвет, а где гемолиза совсем нет — жидкость бесцветна. По первой пробирке с самым слабым желтоватым оттенком определяется минимальная стойкость красных кровяных телец, выражаемая также процентом поваренной соли.
Для более точных исследований мы пользуемся способом Зиммеля.
Способ Зиммеля. Приготовляется основной изотонический раствор Тироде: natrium chloratum 8,2; kalium chloratum 0,2; magnesium chloratum 0,2; calcium chloratum 0,2; natrium phosphoricum (NaH2PO4) 0,4; natrium carbonicum 0,5; aq. dest. 1000,0.
Этот изотоничный по отношению к крови раствор (Δ = 0,56 — 0,57°) условно обозначается единицей (1) и из него приготовляют гипотонические растворы: 0,7 (70 мл раствора Тироде + 30 мл aq. dest.), 0,6 (60 мл раствора Тироде+40 мл aq. dest.), 0,5 (50 мл раствора Тироде + 50 мл aq. dest.), 0,4 (40 мл раствора Тироде + 60 мл aq. dest.), 0,3 (30 мл раствора Тироде+70 мл aq. dest.), 0,2 (20 мл раствора Тироде+80 мл aq. dest.).

Берут 7 смесителей для красных кровяных телец, набирают в каждый до метки 1 кровь, а до метки 101 один из перечисленных растворов, т. е. в первом смесителе кровь оказывается разведенной изотоничным раствором (1), во втором — несколько гипотоничным (0,7), в третьем — еще более гипотоничным (0,6) и т. д.
После продолжительного встряхивания смесители оставляют на 1,5 часа лежать при комнатной температуре и затем после нового тщательного взбалтывания подсчитывают в обыкновенной счетной камере по общим правилам, сколько эритроцитов сохранилось в каждом смесителе, и на основании этого высчитывают, сколько эритроцитов в исследуемой крови и какой они осмотической стойкости. В норме при разведении 0,7 и 0,6 гемолиза не бывает совсем или гемолизируются только единичные кровяные тельца. При разведении в 0,5 гемолизируются 1/5-1/2 всех телец, а при 0,4 — почти все.

РЕАКЦИЯ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ

Способ Т. П. Панченкова. В педиатрической практике вполне можно ограничиться микрометодом Т. П. Панченкова. Прибор Т. П. Панченкова (рис. 48) состоит из штатива с 4 зажимами для 4 пипеток с делениями от 0 до 100.
На каждой пипетке у 50-го деления имеется буква р (реактив), а у 100-го — буква к (кровь). Пипетки должны быть безупречно чисты. Перед употреблением пипетку промывают свежеприготовленным 5%-ным раствором лимоннокислого натра, затем набирают этот раствор до метки р и выпускают его на часовое стекло; не просушивая пипетки, ею же набирают дважды кровь до буквы к и выпускают ее оба раза на то же часовое стекло в раньше взятую каплю лимоннокислого натрия. Смесь на часовом стекле хорошенько смешивают, набирая и осторожно выдувая ее из пипетки; затем набирают ее еще раз до деления 100, устанавливают строго вертикально в штативе и отмечают стояние столба эритроцитов через 10, 20, 30 мин, через 1, 2 и 24 ч. Лучше с каждой исследуемой кровью ставить не одну, а две пробы.
Различают нормальную, замедленную и ускоренную реакцию оседания.
По Т. П. Панченкову, для взрослых приняты следующие показатели за первый час.
Нормальное осаждение эритроцитов 7—8 мм
Малое ускорение 8—14      »
Среднее »                                           .. 15—30    »
Выше среднего . 30—42   »
Выраженное .. 40—50   »
Очень резко выраженное .. 60  » и более
Вместо 5%-ного раствора лимоннокислого натрия можно применить 30%-ный раствор его, что упрощает исследование: капилляр промывают раствором несколько раз, сразу набирают в него кровь до метки к и помещают в штатив. Дальнейшее наблюдение ведется так же, как и при оригинальной методике автора.
Способ Линценмейера, так же как и описываемый ниже способ Вестергрена, применим только для исследования крови у детей

старшего возраста, так как требует большего количества крови. В однограммовый шприц набирают 0,2 мл 5%-ного раствора лимоннокислого натрия и затем в него же берут из вены 0,8 мл крови. Полученное разведение хорошенько встряхивают, выпускают на часовое стеклышко, затем набирают в стеклянную трубочку 6,5 см высотой и с просветом 5 мм и помещают в штатив. На этой трубке имеются деления — 6, 12, 18 мм. Отмечают, через сколько времени столбик оседающих эритроцитов достигнет деления с меткой 18 мм.

Рис. 49. Прибор Вестергрена.
Способ Вестергрена. В двухграммовый шприц набирают 0,4 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия и 1,6 мл крови. Содержимое шприца хорошо перемешивают, выпускают на часовое

Рис. 48. Прибор Панченкова.
стекло, оставляют стоять около 10—15 мин и затем набирают в пипетку высотой 30 см и с внутренним диаметром 3 мм·, на пипетке имеются деления с цифрами до 200. Пипетку укрепляют в штативе и отмечают, на сколько делений осядут эритроциты через 1 ч, 2 ч и сутки (рис. 49).

РЕАКЦИЯ ОСЕДАНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ

Способ Бауэра. Кровь берут из вены и дефибринируют в стеклянной колбочке со стеклянными бусами. 4 мл дефибринированной крови смешивают с 1 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты и оставляют в центрифужной пробирке на 1 ч, до полного гемолиза эритроцитов; затем производят центрифугирование, и лейкоциты, оказывающиеся в центрифуге, 3—4 раза промывают физиологическим раствором. После каждого добавления физиологического раствора снова производят центрифугирование. К отмытым лейкоцитам прибавляют 4 мл 0,85%-ного раствора NaCl и хорошенько встряхивают. Совершенно гомогенную эмульсию переливают в пробирку с диаметром 10 мм и оставляют стоять в вертикальном положении. Скорость оседания отмечается через определенные промежутки времени (15 мин — 30 мин — 45 мин— 1 ч— 1 ч 15 мин— 1 ч 30 мин и т. д.) в миллиметрах градуированной линейкой. Лейкоциты нормальной крови начинают оседать лишь через 2 ч, а лейкоциты с токсическими изменениями скорее.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ

Способ Гесса. Принцип вискозиметра Гесса (рис. 50) заключается в том, что через одинаковые капилляры при одинаковой степени разрежения воздуха насасываются дистиллированная вода и кровь.
Различие в объемах воды и крови, проходящих через капилляры за один и тот же промежуток времени, зависит только от степени вязкости обеих жидкостей. ч

Рис. 50. Вискозиметр Гесса.
1— Т-образный кран; 2, 3, 4, 5, 6, 7 — система капилляров; 8 — зажим; 9 — вентильное отверстие; 10 — резиновый баллон.
Вязкость крови условно выражается отношением объемного количества воды, проходящей через капилляр за определенный промежуток времени, к количеству крови, проходящей за тот же промежуток времени через капилляр такого же диаметра.
Открыт Т-образный кран 1, находящийся в трубке, соединяющей капилляры 2 и 3 и соединенной с резиновым баллоном 10, устанавливают сообщение с системой капилляров 3, 4, 6. Баллон сжимают, закрывают пальцем вентильное отверстие 9 и, постепенно освобождая баллон, насасывают в трубку 6 до капилляра 4 воду из пипетки, поднесенной к свободному концу трубки 6. После этого пипетку с водой удаляют, а воду продолжают насасывать дальше через капилляр 4 до метки 0. Как только мениск воды коснется нуля, освобождают вентильное отверстие 9 и закрывают кран У; необходимо убедиться в отсутствии в этой системе пузырьков воздуха. Теперь приступают к взятию крови: снимают стеклянную трубочку 7 с прибора, цилиндрическим концом ее прикасаются к капле крови, полученной из пальца обыкновенным уколом, и дают наполниться ей на три четверти кровью. После этого трубочку 7, поворачивают вертикально, и когда кровь начинает выступать из нижнего воронкообразного отверстия, вставляют ее назад в прибор так, чтобы выступившая капля крови пришла в соприкосновение с капилляром 5, к свободному концу которого плотно прижимают воронкообразное отверстие трубки и фиксируют ее зажимом 8. Действуя, как и раньше, баллоном, т. е. сперва сдавив его, затем закрыв отверстие 9 и постепенно давая баллону расправляться, насасывают кровь в капилляр 5 до метки 0. Затем поворачивают кран, устанавливая снова сообщение с системой капилляров 3, 4, 6, и, продолжая освобождать баллон при закрытом вентильном отверстии, насасывают одновременно кровь в капилляр 2 и воду в капилляр 3. Как только кровь достигнет деления с цифрой 1, вентильное отверстие открывают, прекращая этим насасывание, и по шкале вдоль капилляра 3 смотрят, до какого деления продвинулся столбик воды. Цифра у этого деления показывает относительную вязкость крови. Если кровь очень вязка, ее насасывают только до метки 1/2 или 1/4, а цифру стояния столбика воды умножают соответственно на 2 или 4. По окончании работы кровь выдувают, капилляры 2 и 5 промывают аммиаком и оставляют его в них до следующего раза.

Рис. 51. Вискозиметр Детерман — Гесса.
Способ Детермана. Весьма распространен, прост в употреблении и точен вискозиметр Детерман — Гесса (рис. 51); состоит из двух одинаковых и параллельно расположенных трубок, проходящих через стеклянную муфту, наполненную водой температуры 20°. В одну набирают до метки 0 воду, в другую — кровь (для предотвращения свертывания крови можно прибавить пылинку гирудина). Аппарат переворачивается вертикально, и обе жидкости начинают под влиянием силы тяжести опускаться книзу в градуированные части капилляра. Когда кровь дойдет до метки 1, смотрят, на какой цифре стоит столбик воды; эта цифра и обозначает относительную вязкость крови.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВРЕМЕНИ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

В капиллярную стеклянную трубочку длиной 12— 15 см и с диаметром просвета 1 мм быстро набирают кровь, заполняющую капилляр в силу волосности. Верхний конец капилляра закрывают кусочком замазки и погружают трубочку нижним концом в цилиндр с теплой водой (37°). Отмечают время, затраченное на наполнение капилляра кровью, и момент погружения его в воду. Через каждые 30 сек капилляр извлекают из воды и отламывают маленький кусочек с нижнего конца. Момент наступления свертывания крови легко узнается по нитке фибрина, тянущейся за отломанным кусочком трубки. Нормальная продолжительность свертывания 7—8 мин (сюда включается и время до погружения капилляра в воду).
Этот способ вполне пригоден для практических целей, но при его применении не удается отметить отдельно момент начала и окончания свертывания. Описываемые ниже способы несколько точнее.
Способ Шультца, видоизмененный Шиллингом. В хорошо вымытую водой, спиртом и эфиром стеклянную капиллярную трубочку с диаметром просвета 1,5—2 мм и длиной 12 см быстро набирают (15—30 сек) кровь (без насасывания, за счет капиллярности). Через каждые 30 сек, надпилив трубочку напильником, отламывают кусочек ее и кидают каждый раз в новую пробирку с физиологическим раствором поваренной соли. Пока кровь не свернулась, она свободно выливается из трубочки и, смешиваясь при встряхивании равномерно с физиологическим раствором, окрашивает его в красный цвет.

Рис. 52. Коагулометр Егорова,
1 — цилиндр для теплой воды; 2 — термометр; 3 — воздушная баня; 4 — капилляр для крови; 5 — манометр; 6 — зажим для сдавления баллона.
Момент начала свертывания легко узнать по появлению в красном растворе небольших хлопьев фибрина. Наконец, когда свертывание произойдет полностью, кровь из кусочка капилляра, брошенного в физиологический раствор, не вымывается совсем или, что бывает реже, вымывается в виде цельного столбика, но раствор при этом совершенно не окрашивается. Результаты свертывания можно условно обозначать следующим образом: (—)— свертывания нет; ( + )— небольшие хлопья (начало свертывания); (++) — свертывание выражено более или менее отчетливо (полусгусток, но имеется еще окрашивание); ( + + + ) — полное свертывание.
Способ А. П. Егорова. Для более точных исследований можно рекомендовать коагулометр Егорова (видоизмененный аппарат Ситковского). Аппарат (рис. 52) состоит из четырех основных частей и термометра: стеклянного капилляра 4 длиной 20 см, с диаметром просвета 0,45 мм; на расстоянии 3 см от его конца имеется метка, до которой набирается кровь; полого цилиндра (воздушная баня) 3, в который опускается капилляр, вставленный в резиновую пробку; цилиндр играет роль воздушной бани и резиновой трубкой соединен с манометром и резиновым баллоном; ртутного манометра 5; резинового баллона, который соединен резиновыми трубками с манометром и воздушной баней и может сдавливаться винтом 6; термометра 2.
Определение производится следующим образом: в цилиндр 1 наливают теплую воду температуры тела исследуемого больного, т. е. если больной лихорадит и, например, имеет температуру 40,5°, то и температура воды должна поддерживаться спиртовой лампочкой на этой высоте. Пока капилляр нагревается, делается испытание герметичности соединения системы: капилляр 4 — воздушная баня 3 — манометр 5 — баллон, для чего пальцем зажимают верхнее свободное отверстие капилляра и, сдавливая баллон зажимом 6, поднимают до максимального положения уровень ртути в манометре. Если система нигде не пропускает воздуха, ртуть остается на этом уровне, пока не будет снят палец с отверстия капилляра. Убедившись в полной исправности аппарата, приступают к взятию крови: делают укол острой иглой Франка (в палец или мочку уха) и, как только выступит большая капля крови, быстро вынимают уже согревшийся капилляр 4 вместе с резиновой пробкой из цилиндра 3 и насасывают ртом кровь до имеющейся в капилляре метки. Кончик капилляра обтирают пальцем и снова помещают в воздушную баню. Вся эта процедура должна проделываться очень быстро и при известном навыке может быть закончена в течение 10—15 сек. Отмечают, конечно, момент взятия крови. Затем винтом 6 начинают осторожно сдавливать и отпускать баллон, что вызывает повышение и понижение давления в воздушной бане, проявляющееся в движении столбика крови вверх и вниз. Пока кровь не свернулась, столбик передвигается совершенно свободно, а стенки капилляра остаются чистыми. Начало свертывания крови легко отметить, так как при этом кровь начинает приставать к стенкам капилляра. Этот момент, т. е. начало свертывания крови, фиксируется по часам. Столбик крови оставляют в покое на 20 сек, а затем снова сдавливают баллон и все время следят за движением ртутного столба манометра. Давление повышают до тех пор, пока столбик крови остается неподвижным, но как только он сдвинется с места, винт сразу отпускают, давление понижают и выжидают несколько секунд, после чего снова повторяют эту процедуру до тех пор, пока не удастся повысить давление до 60 мм рт. ст„ не вызвав этим передвижения столбика крови. Этот момент — наступление полного свертывания — снова отмечается по часам. В норме свертывание начинается через 1 мин 35 сек — 2 мин, а заканчивается в промежуток от 2 мин 40 сек до 4 мин.
При работе с коагулометром Егорова надо тщательно очищать капилляр перед взятием крови, иначе результаты будут очень неточными. Капилляр промывают насыщенным раствором двухромовокислого калия в концентрированной серной кислоте; затем тонкой проволочкой механически очищают стенки капилляра от остатков крови и тщательно промывают его водой; осмотрев капилляр через лупу и убедившись в абсолютной его чистоте, его просушивают, проводя через огонь спиртовой лампочки при одновременном просасывании воздуха резиновым баллоном. Продувать капилляр ртом или промывать его спиртом и эфиром нельзя.
Способ Бюркера. Сущность этого простого способа сводится к тому, что на стеклышко в углублении крышки водяной бани наносят каплю прокипяченной дистиллированной воды и добавляют к ней одну каплю свежей крови; через каждые 30 сек проводят через эту смесь тоненькую стеклянную палочку с небольшим утолщением на конце и следят, когда впервые появится «нежная нить фибрина». По Бюркеру, время свертывания нормальной крови равно 5—6 мин.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ КРОВОТЕЧЕНИЯ

Способ Дуке. В вымытый и высушенный обычным способом кончик пальца ребенка делают иглой Франка укол глубиной 3 мм. Руку поворачивают ладонью книзу и, не производя ни малейшего надавливания, прикасаются к кровоточащей ранке каждые 10—15 сек кусочком фильтровальной бумаги. Капли быстро уменьшаются, на что указывает быстрое уменьшение величины отпечатков, полученных на бумаге (рис. 53), и кровотечение скоро прекращается совсем. В норме продолжительность кровотечения равна 2,5—3 мин.

 


Рис. 53. Время кровотечения по Дуке.
1 — норма (3 мин); 2 — время удлинено (7,5 мин).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАКЛОННОСТИ К КРОВОИЗЛИЯНИЯМ

 

Ретракция кровяного сгустка
Рис. 54. Ретракция кровяного сгустка. 1 — нормальная; 2 — плохо выраженная.
Проба Гесса. Для определения наклонности к кровоизлияниям пользуются пробой Гесса, видоизмененной Лешке: вводят под кожу 1—2 мл 0,2%-ного раствора поваренной соли, который вызывает значительное местное раздражение. При положительной пробе на месте инъекции получается кровоизлияние.

Проба Коха (уколочная проба). На небольшом участке кожи с поверхностью около 4 см2 , приблизительно на одинаковом расстоянии друг от друга, лучше всего наподобие пятерки в игральных картах, делается пять одинаковых и не очень глубоких уколов тонкой иглой шприца. При положительной пробе контролируется на следующий день (вокруг уколов получаются кровоизлияния). Клиническое значение пробы аналогично предыдущей.
Проба Кончаловского — Румпель—Лееде. Наложением резинового жгута (или еще лучше манжеты аппарата Рива — Роччи) на плечо вызывают венозный застой в дистально расположенной части руки. Давление жгута не должно быть слишком высоким, что легко контролируется пульсом, который все время должен сохраняться на a. radialis.
При положительной пробе — через 5—15 мин (после наложения жгута) — получаются кровоизлияния в локтевом сгибе и ниже, что указывает на повышенную ранимость капилляров.

Проба Гехта. Для определения резистентности капилляров служит также и проба Гехта, позволяющая более объективно оценивать ранимость капилляров в различных местах. К поверхности тела на различных местах плотно прижимается суховоздушная стеклянная присасывающаяся банка, разрежение воздуха в которой производится с помощью водоструйного или другого насоса. Степень разрежения измеряется ртутным манометром. В норме наименьшей резистентностью отличаются капилляры на передней поверхности туловища, наибольшей — на наружной части голени.
Молоточковый феномен. Такое же клиническое значение, как и предыдущие пробы, имеет молоточковый феномен; удар перкуссионным молоточком по грудине вызывает кровоизлияние.

РЕТРАКЦИЯ КРОВЯНОГО СГУСТКА

В обыкновенную пробирку диаметром приблизительно 0,5 см берут около 1 мл крови и оставляют стоять при комнатной температуре. При нормальной ретракции уже через 5 ч наблюдается частичное отделение сгустка от стенок пробирки, а через 18 ч он отделяется уже со всех сторон, выделив при этом много сыворотки (рис. 54). При патологической ретракции (тромбопения) ретракция выражена слабо и сыворотки отделяется мало.
С малыми количествами крови можно проделывать такую же пробу на часовом стеклышке.

ВРЕМЯ РЕКАЛЬЦИФИКАЦИИ

Определение времени рекальцификации по методу Бергергофа1 . Оксалатная (цитратная) плазма: 0,5 мл N/10 раствора щавелевокислого натрия (или 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия) смешивают с 4,5 мл крови, размешивают и центрифугируют (при. 1800—2000 об/мин) в продолжении 10 мин.
Техника определения: в тонкостенную пробирку наливают 0,2 мл хлористого кальция (0,277%) и 0,1 мл физиологического раствора. Пробирка помещается в водяную баню при температуре 37—38° и включается секундомер, через 30 сек вносится 0,1 мл, испытуемой оксалатной плазмы и отмечается время появления мелких хлопьев. Время от момента введения плазмы до появления хлопьев и будет временем кальцификации оксалатной плазмы.

ПРОТРОМБИНОВОЕ ВРЕМЯ

Определение по методу Квика в модификации В. Н. Тугулукова и А. М. Абезгауза. Кровь из вены собирается в центрифужную пробирку в количестве 2 мл, содержащую 0,5 мл раствора оксалата натрия. Оксалатная кровь центрифугируется при 1500 об/мин в течение 5 мин, плазма отсасывается пипеткой и разводится 0,85%-ным физиологическим раствором в соотношении 1:1; в тонкостенную пробирку наливается 0,2 мл хлористого кальция (0,277%) и 0,1 мл тромбопластина. Пробирка помещается в водяную баню при температуре 37—37,4° и одновременно включается секундомер.

1 С видоизменением Ленинградским институтом переливания крови.

Через 30 сек градуированной пипеткой в пробирку быстро вводится 0,1 мл разведенной плазмы. Пробирка, погруженная в водяную баню, встряхивается и отмечается время появления хлопьев фибрина. Время от момента введения плазмы до появления крупинок или хлопьев фибрина и является протромбиновым временем. Для большей точности определения следует проводить не менее двух раз, с тем чтобы расхождение результатов не превышало 0,5—1 сек. Расчет протромбинового индекса производится по формуле: (протромбиновое время здорового человека:протромбиновое время больного) ·100%· За протромбиновое время здорового человека принимался стандарт, означенный на флаконе тромбопластина, приготовленного в Ленинградском институте переливания крови.

ПОТРЕБЛЕНИЕ ПРОТРОМБИНА

Под термином потребление протромбина следует понимать количество протромбина, которое переходит в тромбин во время свертывания крови.
Техника определения по Сасмэну и Козну: произвольное количество крови (2—5 мл) из вены собирается в сухую центрифужную пробирку. После свертывания крови при комнатной температуре, пробирка ставится в водяную баню (температура 37—37,5°) на 40—60 мин. Через указанное время пробирка с кровью центрифугируется 3—5 мин при 1000—1500 об/мин. Сыворотка отсасывается в тонкостенную пробирку (типа Видаля) в количестве 0,2 мл. Далее приготавливается смесь тромбопластина с фибриногеном.
Приготовление смеси: тромбопластин в количестве 50 мл сухого вещества 1 смешивается с 5 мл дистиллированной воды. Полученная суспензия центрифугируется при 1000—1500 об/мин (3—5мин); сухой бычий фибриноген берется в количестве 20 мг сухого вещества и разводится в 5 мл физиологического раствора. Суспензия с тромбопластином смешивается перед самым употреблением с раствором фибриногена в соотношении 2:1 (2 мл тромбопластина и 1 мл фибриногена); 0,2 мл полученной смеси отсасывается в тонкостенную пробирку. Пробирки, содержащие 0,2 мл сыворотки и 0,2 мл смеси тромбопластина с фибриногеном, помещаются в водяную баню при температуре 37— 37,5° на 5 мин.
К концу 5-й мин 0,1 мл сыворотки переносится в пробирку со смесью и по секундомеру отмечается время появления крупинок или сгустка фибрина. Условно принимается, что когда протромбиновое время сыворотки составляет 80 сек и более, то имеет место полное потребление протромбина, равное 100%. Соответственно этому в ЛИПК разработана таблица потребления протромбина (табл. 80). Сыворотка не должна стоять более 60 мин, а после инкубации определение должно производится тотчас же.

Потребление протромбина ( в %)


Протромбиновое время сыворотки (в сек)

Потребление
протромбина

Протромбиновое время сыворотки (в сек)

Потребление
протромбина

Протромбиновое время сыворотки (в сек)

Потребление
протромбина

13

16

44

55

73

91

14

17

45

56

74

92

15

18

46

57

75

93

16

20

47

58

76

95

17

21

48

60

77

96

18

22

49

61

78

97

19

24

50

62

79

98

20

25

51

63

80

100

21

26

52

65

 

 

22

27

53

66

 

 

23

29

54

67

 

 

24

30

55

68

 

 

25

31

56

70

 

 

26

33

57

71

 

 

27

34

58

72

 

 

28

35

59

74

 

 

29

36

60

75

 

 

30

37

61

76

 

 

31

39

62

77

 

 

32

40

63

78

 

 

33

41

 

 

34

42

64

80

 

 

35

44

65

81

 

 

36

45

66

82

 

 

37

46

67

84

 

 

39

49

68

85

 

 

40

50

69

86

 

 

41

51

70

87

 

 

42

52

71

88

 

 

43

54

72

90

 

 

Более 80 сек, принимаем за 100%
Приготовление бычьего фибриногена. Кровь из вены быка собирается в посуду с цитратом натрия (3,5%), в соотношениях
440 мл крови и 100 мл цитрата. Центрифугируется при 3000 об/мин. Плазма отсасывается и фильтруется через бумажный фильтр. 400 мл нитратной плазмы охлаждается до 0,5° С, после чего медленно добавляется 11% (объемных) сернокислого эфира (наркозного) при постоянном помешивании, а затем смесь ставится в ледяную баню при 0° С на сутки. При этом из плазмы выпадает фибрин. Жидкая часть отсасывается сифоном и удаляется. Полученный осадок центрифугируется, супернатантная жидкость сливается и к осадку добавляется 3%-ный раствор цитрата натрия, содержащий 8% (объемных) эфира, 92,4 мл цитрата и 8,0 эфира. Смесь тщательно перемешивается и центрифугируется, полученная жидкость сливается, а осадок растворяется в 3%- ном растворе цитрата натрия (0,1 исходного объема плазмы), т. е. в данном случае в 40 мл. Полученный раствор подогревается в водяной бане при 25° 2—3 мин, фильтруется через бумажный фильтр, разливается по небольшим бутылочкам и высушивается вакуум-замораживающим методом (лиофильным). Приготовленный таким образом бычий фибриноген сохраняет свою активность в течение года (хранить в эксикаторе).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ VII ФАКТОРА

Метод Оурена. Принцип метода состоит в том, что исследуемая плазма или сыворотка добавляется к системе, содержащей весь комплекс факторов необходимый для свертывания крови, кроме проконвертина, который и определяется.
Реактивы: 1. Оксалатная плазма крупного рогатого скота, освобожденная от проконвертин а. Кровь, полученную от животного, смешивают с 1,34%-ным раствором оксалата натрия (9:1) и центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. Плазму отсасывают и фильтруют через фильтр Зейтца, помещаемый в бюхнеров- скую воронку. Фильтрование производят под малым отрицательным давлением, при котором через фильтр проходит в 1 мин не более 30— 40 капель фильтрата. Фильтрат проверяют путем определения «протромбинового времени» для чего берут 0,1 мл (0,277%-ного) раствора хлористого кальция и 0,1 тромбопластина; в смесь, прогретую на водяной бане при 37° в течение 30 сек, вдувают 0,1 фильтрата. Сгусток должен появиться не ранее чем через 2,5—3 мин. При более укороченном времени свертывания плазма подлежит вторичной фильтрации. Приготовленная плазма хорошо сохраняется в замороженном виде и перед каждым употреблением оттаивается при комнатной температуре.

  1. Веронал-ацетатовый буфер (pH 7,35) готовят из основного раствора веронал-ацетата (9,714 уксуснокислого натрия и 14,714 веронала растворяют в 500 мл, дистиллированной воды). К 250 мл основного раствора веронал-ацетата прибавляют 200 мл 4,25%-ного раствора хлористого натрия и 217 мл 0,1 %-ного раствора соляной кислоты и 683 мл дистиллированной воды. Приготовленный буфер лучше хранить плотно закрытым в холодильнике при температуре + 4° С; периодически необходимо проверять pH.
  2. Оксалатная плазма. В градуированную центрифужную пробирку, содержащую 0,5 мл 1,3%-ного раствора оксалата натрия добавляют 2 мл крови из вены больного.
  3. 0,277%-ный хлористый натрий (0,025М).
  4. Эмульсия сухого тромбопластина ЛИПК (0,05 на 5 мл дистиллированной воды).      

Техника определения: в пробирку, содержащую 1,8 мл буфера, прибавляют 0,2 мл исследуемой плазмы (в градуированную центрифужную пробирку, содержащую 0,5 мл 1,3%-ного раствора оксалата натрия, добавляют 2 мл крови из вены исследуемого больного и центрифугируют), хорошо смешивают 0,1 мл этого раствора с 0,1 мл тромбопластина и с 0,1 мл замороженной плазмы. Смесь нагревают на водяной бане при температуре 37° в течение 30 сек и тотчас вносят пипеткой 0,1 мл 0,277%-ного раствора хлористого кальция.

По секундомеру определяют время появления сгустка. В норме сгусток появляется через 30—32 сек. Расчет производится по табл. 81.
Таблица 81
Содержание проконвертина (в %)


Время (в сек)

Прокон
вертин

Время (в сек)

Прокон
вертин

Время (в сек)

Прокон
вертин

31

100

46

43

60

24

32

98

47

42

61

24

33

90

48

40

62

23

34

83

49

38

64

22

35

80

50

34

65

22

36

79

51

33

66

21

37

74

52

33

67

21

38

68

53

32

68

21

39

62

54

30

69

20

40

61

55

29

70

20

41

58

56

28

71

19

42

55

57

27

72

19

43

54

58

26

73

18

45

45

59

24

74

18

 

 

 

 

75

18

ОПРЕДЕЛЕНИЕ V ФАКТОРА

Определение по методу Льюиса и Уэра. Реактивы:

  1. Старая донорская плазма или лежалая плазма. Приготавливается следующим образом: кровь из вены донора смешивается с раствором оксалата натрия 1,34 (в соотношении 1 : 10 центрифугируется при 3000 об/мин). Плазма сливается в пробирку и ставится в рефрижератор при +4° С на 6—15 дней, пока протромбиновое время лежалой плазмы не будет равно 60 сек.
  2. Тромбопластино-кальциевая смесь:готовится непосредственно перед употреблением путем смешивания равных объемов тромбопластина и 0,555%-ного раствора хлористого кальция.

Техника определения: в пробирку вносят 0,1 старой донорской плазмы и 0,1 разведенной 1 : 20 физиологическим раствором исследуемой плазмы. Пробирку устанавливают на водяную баню на 60 сек, после чего быстро вводят 0,1 мл тромбопластиново-кальциевой смеси. Определяют время свертывания плазмы.
Расчет: количество V фактора определяется по формуле:
Время свертывания плазмы здорового человека -100
Время свертывания исследуемой плазмы

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФИБРИНА КРОВИ

Метод определения по Р. А. Рутбергу. Техника определения: к 1 мл прозрачной плазмы добавляют 0,1 мл 5%- ного раствора хлористого кальция. Смесь перемешивают, тотчас включают секундомер и устанавливают время свертывания (скорость рекальцификации цитратной плазмы при комнатной температуре). Образовавшийся фибрин наматывают на палочку, которую вынимают из пробирки только после того, как в ней полностью прекратилось появление даже мельчайших сгустков или нитей фибрина. Фибрин снимают с палочки при помощи обеззоленного фильтра. Сжатием последнего удаляют сыворотку до тех пор, пока на бумаге в проходящем свете не будет следов влаги. Высушенный таким образом фибрин взвешивают на торзионных весах (точность до 1 мг). Для перерасчета в мг% по сухому веществу экспериментальным путем установлен переводной коэффициент для плазмы человеческой крови, равный 25.

РЕАКЦИЯ БРАМАЧАРИ

Первая модификация. При положительной реакции получается резкое помутнение сыворотки крови от прибавления к ней 2—3- кратного количества воды.
Вторая модификация. Сыворотку разводят 10-кратным количеством физиологического раствора поваренной соли и это разведение переслаивают с дистиллированной водой. При положительной реакции на месте соприкосновения получается мутное кольцо.
Автор описал эту реакцию как специфическую для лейшманиоза детей. По нашим наблюдениям, она не специфична, отмечается часто также и при других тяжелых формах малокровия и объясняется, надо думать, увеличением количества глобулинов в сыворотке.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА В КРОВИ

Качественная реакция Гийманса ван ден Берга. Принцип реакции состоит в том, что билирубин под влиянием диазореактива переходит в азобилирубин красного цвета.
Необходимые реактивы:

  1. ас. sulfanilicum 1,5; ас. hydrochloricum удельный вес— 1,19 15,0; aq. dest. 1000,0; 2) natrium nitrosum 0,5; aq. dest. 100,0.

Непосредственно перед употреблением 25 мл раствора 1 смешивают с 3 мл раствора 2 (диазореактив Эрлиха).

  1. Непрямая реакция. 0,5 мл сыворотки смешивают с 1 мл абсолютного спирта и получившийся осадок отделяют при помощи центрифугирования; прозрачный спиртовой раствор отсасывают пипеткой, переносят в другую пробирку и прибавляют к нему 0,125 мл свежеприготовленного диазореактива.

При положительной реакции немедленно (30 сек) или иногда в течение нескольких ближайших минут наступает отчетливое покраснение.

  1. Прямая реакция. К 0,5 мл сыворотки прибавляют 1 мл воды и 0,125 мл диазореактива.

При положительной реакции наступает сразу (не позже чем через 30 сек) отчетливое покраснение. Кроме этой быстрой прямой реакции, различают следующие ее модификации.

Прямая двухфазная реакция — после прибавления диазореактива получается слабое окрашивание, однако постепенно усиливающееся и достигающее максимума в течение 5—15 мин.
Прямая замедленная реакция — окрашивание наступает только через 3, 10, 15 мин.
При слабоположительных реакциях с неотчетливым цветовым оттенком прибавление нескольких капель децинормальной соляной кислоты дает лиловый цвет, а несколько капель децинормального раствора едкого натра — зелено-голубой.
Принято считать, что в крови билирубин встречается в двух модификациях: гепатогенного происхождения, нарастающий в крови при нарушении желчеотделения и дающий прямую диазореакцию, и билирубин экстрапеченочного, главным образом гематогенного происхождения (например, в результате усиленного гемолиза); последний вид билирубина дает только непрямую диазореакцию.
Таким образом, прямая реакция бывает положительной при механической или застойной желтухе; если получается только одна непрямая реакция, то это указывает на присутствие в крови билирубина, не прошедшего через печень или указывает на недостаточную активность печеночной глюкуронтрансферазы; эта модификация диазореакции чаще всего и резче всего бывает выражена при гемолитической желтухе и при злокачественном малокровии.
Прямая замедленная и прямая двухфазная реакции бывают положительны при наличии дегенеративных изменений со стороны печени, например при инфекционной желтухе (болезнь Боткина), циррозе печени, малярии, пороках сердца и т. д.
Слабоположительная непрямая реакция может получаться и у здоровых детей, так как в крови всегда циркулирует некоторое количество билирубина.
Количественное определение по способу Гийманс ван ден Берга. К 1 мл сыворотки прибавляют 2 мл абсолютного спирта и центрифугируют 20—30 мин. 1 мл верхнего прозрачного спиртового раствора переносят в стаканчик колориметра, прибавляют 0,25 мл свежеприготовленного диазореактива и 0,5 мл абсолютного спирта (для растворения жирных кислот) и колориметрируют, пользуясь эталонным раствором или готовым клином (при применении колориметра Аутенрита). В последнем случае расчет производится по прилагаемой к клину таблице.
При отсутствии стандартного клина или при пользовании колориметром Дюбоска и другими необходимо бывает предварительно приготовить следующий цветной раствор: 0,1508 железоаммиачных квасцов растворяют в небольшом количестве воды, затем прибавляют 50 мл соляной кислоты (удельный вес 1,19) и, добавляя воду, доводят объем до 100 мл. Получается N/320 раствор. К 10 мл этого раствора (хорошо сохраняется) прибавляют 25 мл соляной кислоты того же удельного веса и, снова добавляя воду, доводят объем раствора до 250 мл, получается N/8000 раствор. Далее берут 3 мл этого раствора, смешивают с 3 мл 10%-ного раствора роданистого калия, а получившееся роданистое железо извлекают в делительной воронке 12 мл эфира (взбалтывается и все время охлаждается струей воды). Эфир, окрасившийся в красноватый цвет, выпускают из воронки и употребляют в качестве стандарта; интенсивность окраски эфира соответствует окраске, получающейся при обработке диазореактивом сыворотки, содержащей в 100 мл 0,5 мг билирубина. Дальнейшее определение ведется по общим правилам колориметрирования. При окончательном расчете надо помнить, что после прибавления всех реактивов сыворотка оказывается разведенной в 5 раз.
Количественное определение по Герцфельду. Для практических целей вполне можно ограничиться более простым способом Герцфельда. В 7 маленьких (агглютинационных) пробирок наливают, за исключением первой, по 0,5 мл физиологического раствора хлористого натрия; затем в первую и во вторую наливают по 0,5 мл сыворотки; содержимое второй пробирки смешивают и переносят из нее 0,5 мл жидкости в третью пробирку, затем из третьей в четвертую пробирку и т. д. Из седьмой излишек жидкости (0,5 мл) выливают. Получается ряд пробирок с разведением сыворотки в 1, 2, 4, 8, 16, 32 и 64 раза. Затем в каждую пробирку прибавляют по 2—3 капли реактива Гаммарстена [заблаговременно смешивается 190,0 25%-ной ас. hydrochlorici с 10,0 25%-ной ас. nitrici (ex tempore смешивается 1 часть этого раствора с 4 частями абсолютного спирта)]. В присутствии билирубина, если количество его не меньше 0,016 мг, получается зеленый цвет (смотреть на белом фоне). Следовательно, надо считать, что последняя пробирка с зеленым оттенком содержит 0,016 мг билирубина; умножив эту цифру на степень разведения сыворотки в данной пробирке и еще на 2, получаем количество билирубина в 1 мл сыворотки. Реакция основана на том, что билирубин под влиянием реактива переходит в биливердин, дающий зеленое окрашивание.
Пример. Содержимое первой, второй и третьей пробирок окрасилось в зеленый цвет, содержимое следующих пробирок только помутнело, следовательно, в третьей пробирке содержится 0,016 мг билирубина, в 1 мл сыворотки 0,016 · 4 · 2=0,128 мг, а в 100 мл крови — 12,8 мг%.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЕЗА ПО СПОСОБУ БЕРМАНА

Необходимые реактивы: 1) 0,3%-ный раствор марганцовокислого калия (КМnO4); 2) 35%-ная бромистоводородная кислота (НВr2); 3) стандартный раствор полуторахлористого железа в разведенной соляной кислоте; для исследования приготовляют раствор, содержащий 0,01 мг железа в 1 мл; 4) 38%-ный раствор роданистого аммония; 5) 0,35%-ный раствор соляной кислоты; 6) чистый ацетон.
Ход исследования. 1. Пипеткой берут 0,04 мл крови и разводят в 2 мл дистиллированной воды, отмеренной в пробирку из иенского стекла; пипетку тщательно промывают водой.

  1. Прибавляют 0,2 мл НС1 и 2 мл КМnO4 и помещают пробирку в кипящую водяную баню на 2—3 мин; получается коричневый осадок.
  1. Прибавляют 2—3 капли 35%-ной бромистоводородной кислоты, снова ставят на 2 мин в водяную баню, а затем фильтруют в измерительный цилиндр емкостью 20 мл со стеклянной пробкой.
  2. Пробирку и фильтр промывают водой, сливаемой также в этот цилиндр; общее количество жидкости доводится до 5 мл.
  3. Прибавляют в цилиндр раствор роданистого аммония, которым споласкивают и пробирку, и фильтр; содержимое цилиндра доводят, добавляя этот раствор, до 10 мл.
  4. Прибавляют ацетон, доводя объем раствора до 20 мл, закрывают пробкой и хорошо смешивают.
  5. Содержимое цилиндра, принявшее красный цвет, через 5 мин колориметрируют со стандартным раствором железа, подвергнутым совершенно такой же обработке.

Параллельно ставят контрольный опыт.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА

Способ Аутенрита и Функа. Принцип исследования: холестерин извлекают хлороформом; эта вытяжка дает с уксусным ангидридом и серной кислотой зеленое окрашивание (реакция Ли- бермана и Бурхарда), по интенсивности которого и определяют содержание холестерина.
Необходимые реактивы: 1) 25%-ный раствор едкого кали; 2) хлороформ; 3) безводный сернокислый натрий; 4) уксусный ангидрид; 5) концентрированная химически чистая серная кислота.

Ход исследования. 1. В небольшую колбочку Эрленмейера наливают 10 мл раствора едкого кали и затем пипеткой отмеривают в нее 1 мл крови.

  1. Содержимое колбы перемешивают и колбу помещают на 6—8 ч в кипящую водяную баню.
  2. Жидкости дают остыть и переливают ее в делительную воронку, споласкивают колбочку хлороформом, который также сливают в ту же делительную воронку.
  3. Делительную воронку сильно взбалтывают в течение нескольких минут, дают хлороформу осесть и опускают его в совершенно сухую колбочку. К оставшейся в делительной воронке жидкости приливают несколько раз по 5—8 мл хлороформа и снова повторяют извлечение холестерина при сильном взбалтывании; каждый раз отстоявшийся хлороформ сливают в ту же колбочку.
  4. Для просветления мутноватых хлороформных вытяжек всыпают в колбочку около 5 г безводного сернокислого натрия, хорошо взбалтывают и фильтруют в сухую мерную колбочку емкостью 25 мл; споласкивают колбочку небольшим количеством хлороформа, сливают его через ту же воронку в мерную колбочку и доливают последнюю хлороформом до метки.
  5. Отмеривают пипеткой 5 мл хлороформной вытяжки, приливают 2 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл чистой серной кислоты. Смешивают, переливают в стаканчик колориметра Аутенрита и колориметрируют, пользуясь готовым клином и приложенной к нему кривой.

При отсутствии готового клина или при пользовании другим колориметром надо приготовить стандартный раствор холестерина (0,1 г холестерина растворяют в 100 мл хлороформа; 1 мл такого раствора содержит 1 мг холестерина) и, подвергнув его такой же обработке, как и кровь, сравнивать обе полученные хлороформные вытяжки обычным методом колориметрии.
Метод Энгельгардта и Смирновой. Принцип и реактивы те же, но вместо сернокислого натрия берут двузамещенный фосфорнокислый натрий. 0,1 мл крови выдувают на дно центрифужной пробирки, туда же этой же пипеткой 2 раза добавляют по 0,1 мл дистиллированной воды и 0,1 ли раствора едкого калия; все хорошо перемешивают и пробирку ставят на 30 мин в кипящую воду; затем добавляют 1,5 мл хлороформа и около 0,15 г фосфорнокислого натрия и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Через 10 мин пробирку погружают в горячую воду (80—100°) на несколько секунд до закипания хлороформа и растворения соли; погружают пробирку в холодную воду и прозрачную хлороформенную вытяжку сливают в градуированную пробирку; в первую пробирку еще раз добавляют 1 мл хлороформа, оставляют стоять 5 мин, погружают в горячую воду, охлаждают и эту вторую вытяжку сливают в ту же пробирку; добавляют хлороформа до 2,5 мл, 0,5 мл уксусного ангидрида и 3 капли серной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 25 мин в темном месте при комнатной температуре.
Затем колориметрируют или фотометрируют; отсчет производят по кривой, заранее откалибрированной по стандартному раствору.
Способ Герца. В последнее время некоторые авторы рекомендуют пользоваться способом Герца, требующим меньше крови и дающим более точные результаты.
Необходимые реактивы:        1) хлороформ; 2) ацетилхлорид Кальбаума; 3) 20%-ный безводный хлористый цинк, растворенный в 320 г уксусной кислоты при 50—70°; 4) белая глина Мерка; 5) 0,4%-ный раствор холестерина в хлороформе (основной раствор), из которого ex tempore готовят контрольный (0,01—0,08%); 6) едкий натр; 7) 1%-ный спиртовой раствор дигитонина.
Ход исследования. 1. В пробирку иенского стекла (150-15мм) наливают 1,5 мл дистиллированной воды и добавляют 0,1 мл сыворотки крови.

  1. Прибавляют около 0,4 г едкого натра и растворяют при нагревании и встряхивании.
  2. На 2,5 часа помещают в кипящую водяную баню.
  3. При охлаждении добавляют 10 мл хлороформа, закрывают чистой пробкой и энергично взбалтывают в течение 1 мин.
  4. Прибавляют 1,2 г белой глины, снова встряхивают в течение 1 мин и затем прибавляют 3 капли воды.
  5. Фильтруют и 5 мл фильтрата помещают в мерную колбу объемом 10 см3, прибавляют туда же 1 мл раствора цинка, 1 мл ацетилхлорида и нагревают в течение 10 мин на водяной бане при температуре 70°.
  1. Быстро охлаждают, доливают колбочку до метки хлороформом и сразу колориметрируют, сравнивая цвет полученной хлороформной вытяжки с цветом экстракта таким же образом обработанного раствора холестерина определенной концентрации.

Одновременно ставится контрольный опыт.



 
« Гематологический и иммунологический мониторинг у детей больных ИЗСД в течение инсулинотерапии   Гематология детского возраста с атласом миелограмм »