Начало >> Статьи >> Архивы >> Гематология детского возраста

Определение ферментов - Гематология детского возраста

Оглавление
Гематология детского возраста
Введение
Эмбриональное развитие кроветворного аппарата
Особенности кровотворения у детей
Теория кровотворения
Эритроциты
Зернистые лейкоциты
Лимфоциты, агранулоциты, незернистые лейкоциты
Моноциты
Плазматические клетки
Мегакариоциты
Кровяные пластинки
Эндотелиальные клетки
Классификация нейтрофилов
Гемограмма по
Общие и физические свойства крови
Кровь детей в период новорожденности
Особенности крови детей первого года жизни
Особенности крови детей в возрасте старше одного года
Особенности крови у недоношенных детей
Особенности крови и кровотворного аппарата детей с диатезами
Химические и биохимические свойства крови
Анемии
Анемии эндогенного происхождения
Врожденные гемолитические анемии новорожденных
Гемолитическая анемия
Редкие формы гемолитической анемии
Анемия недоношенных детей
Апластическая анемия Эрлиха
Хлороз (бледная немочь)
Злокачественное малокровие
Послегеморрагические анемии
Алиментарные анемии
Анемии инфекционные и послеинфекционные
Токсические анемии
Анемии на почве негигиенического образа жизни
Псевдоанемия
Профилактика малокровия у детей
Лечение малокровия у детей
Полицитемии
Агранулоцитозы
Лейкозы
Острые лейкозы
Хронические лейкозы
Лечение лейкозов
Лимфосаркома
Миеломная болезнь
Ретикуло-эндотелиозы
Спленомегалии типа Гоше и Ниман-Пикка
Спленопатии
Лимфогранулематоз
Инфекционные гранулемы
Геморрагический диатез
Гемофилия
Гипоконвертинемии
Болезнь Верльгофа
Геморрагическая тромбастении
Болезнь Шенлейн—Геноха
Дифференциальный диагноз геморрагического диатеза
Лечение различных форм геморрагического диатеза
Пароксизмальная гемоглобинурия
Гематопорфирия
Симптоматические изменения крови при различных заболеваниях детей
Влияние эндокринных расстройств на состав крови
Техника взятия крови
Определение общего количества крови
Техника исследования морфологических особенностей крови
Счет кровяных телец
Определение цветового показателя
Приготовление мазков крови
Окраска препаратов
Подсчет лейкоцитарной формулы
Лейкоцитарный профиль Ш. Д. Мошковского
Дополнительные методы исследования
Техника исследования основных физико-химических свойств крови
Определение ферментов
Определение групп крови
Определение Rh-фактора
Техника прижизненного исследования кровотворных органов
Функциональная диагностика кроветворного аппарата ребенка
Таблицы

Определение фосфатазы

Необходимые реактивы: 1) основной раствор фосфатов — 2,5%-ный водный раствор β-глицерино-фосфорнокислого натрия; препарат не должен содержать неорганических фосфорных соединений; 2) буферный раствор: 6,06 г гликокола и 4,68 г хлористого натрия растворяют в 328 мл N/10 NaOH; в полученный раствор добавляют дистиллированную воду, доводя его объем до 1 л; 3) 15%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; 4) стандартный раствор фосфатов (0,4390 г КН2РО4: 1000 мл дистиллированной воды), содержащий 10 мг% Р; для исследования берется 50-кратное разведение (5 мл 0,01 мг% Р); 5) 15%-ный раствор щавелевокислого калия; 6) 0,9%-ный раствор хлористого натрия.
Ход исследования. 1. В центрифужную пробирку вносят 2—3 капли раствора щавелевокислого калия и туда же точно отмеривают 5 мл крови; хорошо смешивают и центрифугируют 10 мин.

  1. Осторожно отсасывают 2 мл плазмы и смешивают с 2 мл раствора хлористого натрия.
  2. По 0,5 мл полученного разведения (т. е. 0,25 мл сыворотки) переносят в 4 пробирки, в которые предварительно точно отмерено по 5 мл раствора фосфатов; субстрат переваривания получается при смешивании 1 части основного раствора и 5 частей буферного раствора.
  3. 2 пробирки (первую и вторую) помещают в водяную баню (38°), в две другие (третью и четвертую) прибавляют по 2 мл раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и через 10 мин фильтруют содержимое пробирки через фильтр, свободный от фосфорных соединений. В 5 мл фильтрата колориметрическим методом определяют количество фосфатов. Для сравнения служит стандартный раствор фосфатов.
  4. Первые две пробирки вынимают через 3 ч из водяной бани, охлаждают, осаждают в них белок путем добавления 2 мл трихлоруксусной кислоты и далее поступают с ними так же, как с двумя предыдущими пробирками.

Пример (вычисление):
в 5 мл фильтрата 3-й пробирки оказалось                                                0,056 мг Р;
» 5 »                                    »         4-й         »               »                             0,058 » »;
Среднее для двух пробирок —                                                                  0,057 » »;
в 5 мл фильтрата 1-й пробирки оказалось                                                0,110 » »;
» 5 »                                    »         2-й         »               »                             0,112 » »;
Среднее для двух пробирок —                                                                  0,111 »     ».
Таким образом, в течение 3 ч освободилось 0,054 мг Р.

Количество фосфатазы обозначается условными единицами, указывающими, какое количество фосфатов освободилось бы в течение 3 ч под влиянием действия фосфатазы, содержащейся в 100 мл. Для этого достаточно 0,054 умножить на 600.

Определение амилазы крови по Вольгемуту

Кровь, разведенную дистиллированной водой в отношении 1 :50 (1 пипетка гемоглобинометра Сали на 1 мл воды), переносят стерильной пипеткой в стерильные пробирки в следующих количествах: 2,0; 1,0; 0,64; 0,4; 0,25; 0,16; 0,1; 0,05 мл. В каждую пробирку добавляют дистиллированную воду до 5 мл, затем 2—5 мл 1%-ного раствора крахмала Кальбаума и по 5 капель толуола. Пробирки закрывают стерильными ватными пробками и помещают в термостат при температуре 38° на сутки.
После этого пробирки вынимают из термостата, доливают почти до верха водой и в каждую прибавляют по 2 капли децинормального раствора йода. Пробирка, содержание которой приняло ясную красную окраску, служит для определения амилолитической силы крови, которая и выражается условными единицами, указывающими, сколько миллилитров 1%-ного раствора крахмала переваривается 1 мл исследуемой крови в течение 24 н при температуре 38°.
Пример. Допустим, что в пробирке, в которой находится 0,25 мл разведения крови, получена красная окраска, а в следующей — 0,16 мл — фиолетовая. Добавлено было 5 мл 1% ο-ного раствора крахмала. Следовательно, 1 мл разведенной крови смог бы расщепить 20 мл раствора крахмала, а 1 мл цельной крови— 1000 мл.
Условно обозначают следующим образом:

Определение каталазы по Баху

В 2 маленькие колбочки Эрленмейера наливают по 7 мл дистиллированной воды. В одну колбочку наливают точно 1 мл лаковой крови (0,02 мл крови смешивают с 20 мл дистиллированной воды), в другую (контроль) — 1 мл этого же разведения крови, но предварительно подвергнутого кипячению. В каждую колбочку наливают точно по 2 мл 1%-ного раствора перекиси водорода и оставляют их при комнатной температуре (18—18,5°) на 30 мин. Затем прибавляют по 3мл 10%-ного раствора серной кислоты и титруют децинормальным раствором марганцовокислого калия до появления слаборозового окрашивания.
Количество миллилитров марганцовокислого калия, затраченное на титрование в опыте, вычитают из количества, затраченного на титрование в контроле.
Каталитическую силу крови выражают количеством чистой перекиси водорода, разлагаемой 1 мл цельной крови в течение 30 мин при комнатной температуре. 1 мл децинормального раствора марганцовокислого калия соответствует 1,7 мг чистой перекиси водорода.

Определение липазы по Рона и Михаэлису

Необходимые реактивы: 1) насыщенный раствор трибутирина в буферном растворе; к раствору, составленному из 2 мл 1/8 молекулярного раствора первичного фосфорнокислого натрия и 14 мл 1/8 молекулярного раствора вторичных фосфатов, добавляют 30 капель трибутирина и тщательно встряхивают в течение 30 минут, затем фильтруют через складчатый сухой фильтр; 2) 1/8 молекулярного раствора первичных фосфатов (10 мл фосфорной кислоты +10 мл N/1 NaOH+10 мл воды); 3) 1/8 молекулярного раствора вторичных фосфатов (10 мл фосфорной кислоты и 20 мл N/1 NaOH).

Рис. 55. Сталагмометры: 1 —Рона; 2 — Траубе.
Принцип. Метод основан на изменении поверхностного натяжения насыщенного раствора трибутирина под влиянием липазы (трибутириназы) сыворотки.

Рис. 56. Кривая, получаемая при стандартизации сталагмометра;
на горизонтальной оси — концентрация трибутирина; на вертикальной — количество капель.
Ход определения. Для исследования пользуются сталагмометром Траубе или Рона (рис. 55), который стандартизируют растворами трибутирина различной концентрации. На основании полученных данных составляют кривую, обозначая на ординате количество капель, а на абсциссе — процент насыщения трибутирина (рис. 56). 1 мл сыворотки крови, взятой у ребенка натощак, смешивают с 9 мл насыщенного раствора трибутирина и оставляют стоять при комнатной температуре. Количество капель определяют немедленно, а затем —через каждые 15 мин, после смешения сыворотки с раствором трибутирина.
Для дифференцирования имеющейся в сыворотке липазы ставят определение не только общего количества липазы, но еще и липазы, устойчивой к атоксилу, и липазы, устойчивой к хинину. Ценность этих дополнительных данных, характеризующих липолитический фермент сыворотки, многими ставится под сомнение.

Определение антитрипсина по Фульд — Гроссу

Предварительной пробой, производимой всегда перед самой постановкой определения антитрипсина, устанавливается наименьшее количество раствора трипсина (0,025 г трипсина растворяется в 10 мл N/1 раствора соды), которое в состоянии переварить 2 мл раствора казеина (1 :500) в течение 30 мин в водяной бане при 38°. Для этого в 6 пробирок наливают следующие количества раствора трипсина: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл, добавляют в каждую до 3 мл стерильного физиологического раствора NaCl и по 2 мл 2%-ного раствора казеина; пробирки, как сказано выше, помещают в водяную баню. Через 30 мин вынимают их, охлаждают и в каждую вносят 2 капли уксусно-алкогольной смеси (5,0 ас. acetici glacialis; 45,0 spiritus vini 96°; 50,0 aq. dest.), прибавляемой осторожно по стенке пробирки, наклоненной под углом в 60°. В пробирках, где казеин не успел полностью перевариться, появляется мутное кольцо, а где переваривание произошло полностью, раствор остается прозрачным. Отмечается наименьшее количество трипсина, успевшее полностью переварить казеин, и для дальнейшего основной раствор трипсина разводится так, чтобы установленное наименьшее переваривающее количество трипсина содержалось в 1 мл раствора.
Постановка опыта. Кровь, разведенную дистиллированной водой в 50 или 100 раз, градуированной пипеткой разливают в 10 пронумерованных пробирок в следующих количествах: 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; 0,1 мл. Содержимое каждой пробирки доливают до 2 мл стерильным физиологическим раствором поваренной соли, а затем в каждую пробирку вносят по 1 мл разведенного раствора трипсина. Пробирки оставляют постоять при комнатной температуре на 15 мин, чтобы антитрипсин успел связаться с трипсином, затем добавляют по 2 мл 2%-ного раствора казеина и все пробирки переносят в водяную баню на 30 мин при 38°. После этого их вынимают, охлаждают и устанавливают в порядке номеров; в каждую осторожно по стенке прибавляют по 5 капель уксусноспиртовой смеси и отмечают пробирку с наименьшим содержанием крови, оказывающим, однако, еще задерживающее влияние на переваривание, вследствие чего и появляется в растворе мутное кольцо. По этой пробирке, содержащей количество антитрипсина, условно равное единице, и высчитывают, сколько таких единиц содержится в 1 мл неразведенной крови.



 
« Гематологический и иммунологический мониторинг у детей больных ИЗСД в течение инсулинотерапии   Гематология детского возраста с атласом миелограмм »