Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

ВАКЦИНЫ

Метод получения активного иммунитета при помощи вакцин называется вакцинацией, а возникающий при этом активный искусственный иммунитет — поствакцинальным. Вакцинация, производимая с предохранительной целью, носит название вакцинопрофилактик и. Применение вакцин с лечебной целью называется вакцинотерапией.
В настоящее время в качестве вакцин для предохранительных прививок применяют: 1) живые вакцины; 2) вакцины из тел убитых микробов; 3) химические вакцины, приготовленные из определенных компонентов бактериальных клеток; 4) анатоксины, изготовленные из бактериальных экзотоксинов.
Живые вакцины получают из ослабленных в своей вирулентности микроорганизмов. Не вызывая заболевания живые вакцины, однако, воспроизводят в организме невосприимчивость к заражению вирулентными возбудителями.
Вакцины из живых микробов были получены различными методами: длительным пассированием микроба через организм лабораторного животного, чувствительного к этому возбудителю; длительным культивированием бактерий на специальных питательных средах, неблагоприятных для их развития или с добавлением каких-нибудь веществ (например желчи); методом селекций и отбора лабораторных штаммов.
В 1881 г. Л. Пастер разработал метод получения живой вакцины против сибирской язвы, а в 1885 г. против бешенства. В 1919 г. А. Кальметт и Ш. Герен во Франции получили ослабленный вариант туберкулезной палочки, применяемый для профилактики туберкулеза. Получены живые вакцины и против других инфекционных болезней (чумы, полиомиелита, гриппа, желтой лихорадки). В отношении эффективности живые вакцины являются наиболее полноценными препаратами, так как
позволяют успешно воспроизводить прочный прививочный иммунитет там, где убитые вакцины малоэффективны.
Вакцины из убитых микробов изготовляются из культур патогенных микробов, убитых либо термическим воздействием обычно при температуре 56—58° в течение часа (гретая вакцина), либо действием химических веществ (спиртом, формалином, мертиолятом). При действии формалина получаются: 1) формолвакцины, в которых микробы убиты формалином, и 2) анавакцины, изготовленные по принципу получения анатоксинов, т. е. при помощи комбинированного действия формалина и температуры 39—40°.
Химические вакцины представляют собой специфические антигены определенного химического состава, которые получаются из бактериальных клеток путем ферментативного переваривания с последующим осаждением спиртом или извлечением соответствующим растворителем (трихлоруксусная кислота). При надлежащем приготовлении полные антигены обладают очень высоким иммунизирующим свойством, но в то же время могут быть токсичными. Такой вакциной является химическая вакцина TABte. Препарат этот представляет собой смесь из осажденных полных антигенов для одновременной иммунизации против брюшного тифа, паратифа А и В и очищенного концентрированного столбнячного анатоксина.
Для того чтобы продлить время всасывания вакцины и, следовательно, удлинить иммунологическое раздражение организма к вакцинам, добавляют неспецифические вещества, замедляющие всасывание, например фосфорнокислый кальций, квасцы, ланолин или растительные масла.
Эти вещества получили название адъювантов (от англ. adjuvant — помощник), действие которых проявляется не только в том, что они задерживают антиген в месте введения, но и значительно повышают синтез антител.
Анатоксины. При некоторых заболеваниях, когда основное значение в патогенезе имеет экзотоксин возбудителя, вакцину приготовляют из бактерийных экзотоксинов. Анатоксин — это экзотоксин, лишенный ядовитых свойств, но сохранивший свою антигенность. Для его получения к экзотоксину (см. стр. 130) добавляют 3—4% формалина, выдерживают в термостате при температуре 38—40° в течение 3—4 недель, периодически встряхивая, очищают и адсорбируют на алюминиевых квасцах. Силу анатоксина определяют методом флокуляции и обозначают в иммуногенных (антигенных) единицах (ИЕ).
Анатоксины используют для активной иммунизации против дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма, рецидивирующих гнойничковых поражений кожи стафилококкового происхождения и для получения антитоксических сывороток.
Виды вакцин. Вакцина, в состав которой входит только один вид микроба, называется моновакциной (например, противотифозная вакцина), приготовленная из двух микробов — дивакциной (из бактерий брюшного тифа и паратифа). Поливакцины содержат смесь возбудителей многих инфекционных заболеваний. Вакцины, в состав которых входят два возбудителя или больше, называются ассоциированными. В ассоциированные вакцины могут входить не только микробы, но и анатоксины, например, коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (КДС), состоящая из дифтерийного и столбнячного анатоксинов и убитых коклюшных бактерий.
Аутовакцины представляют собой моновалентные вакцины, приготовленные из культуры, выделенной от больного, и предназначены для его лечения. Аутовакцинотерапия имеет своей целью повысить иммунологическую реактивность. Эту же цель преследует аутогемотерапия, при которой у больного берут кровь из вены и вводят в ягодичную мышцу.
Приготовление убитых вакцин. Убитые вакцины приготовляют в крупных микробиологических институтах. Микробы, из которых приготовляется вакцина, засевают в большие плоские бутылки с агаром, так называемые матрацы. Культуру, выросшую на агаре, смывают физиологическим раствором и полученную маточную взвесь стандартизуют, т. е. устанавливают необходимую концентрацию микробов (в 1 мл вакцины должно содержаться определенное количество микробных тел). Титрование вакцины (стандартизация) производят оптическим методом путем сравнения, опалесценции (густоты) маточной взвеси со стандартами.
Стандартизация вакцин производится следующим образом. В пустую пробирку, равную по диаметру и толщине стенки пробирки стандарта, помещают 1 мл маточной взвеси. Затем в нее добавляют столько физиологического раствора, сколько требуется для того, чтобы степень мутности сравнялась с мутностью стандартной пробирки. Для сравнения обе пробирки ставят рядом перед светом. Например, если к 1 мл маточной взвеси пришлось добавить 9 мл физиологического раствора, для того чтобы приравнять ее густоту к концентрации стандарта в 1 млрд., это значит, что в 1 мл маточной взвеси содержится 10 млрд. бактерий. Следовательно, чтобы приготовить вакцину с титром 1 млрд., нужно развести основную взвесь в 10 раз, с титром 2 млрд. — в 5 раз и т. д.
Стандарт состоит из 4 запаянных пробирок — эталонов, содержащих жидкость различной степени мутности. Пробирки содержат взвесь мельчайших частиц стекла пирекс, соответствующих по величине бактериям. Выпускаются стандарты государственным контрольным институтом медицинских биологических препаратов имени Л. А. Тарасевича. На стандартах указывается, какому количеству микробных тел в 1 мл соответствует мутность данного стандарта. Готовая вакцина в обязательном порядке проверяется на стерильность и густоту местной контрольной лабораторией и органами государственного контроля. На этикетках ампул обозначают название вакцины, место и время приготовления, количество микробов в 1 мл, номер серии, номер государственного контроля и срок годности.
Вакцины надо хранить в сухом прохладном месте. Обычно жидкие вакцины представляют собой беловатую мутную жидкость, дающую незначительный, при встряхивании исчезающий осадок. Если вакцина нестерильна, то микробные тела могут лизироваться и вакцина будет прозрачная либо в ней образуются крупные хлопья за счет посторонних микробов. И в первом, и во втором случае вакцины не пригодны для употребления.
Методы введения вакцины и их дозировка. Вакцины вводят в организм преимущественно парентеральным путем (минуя кишечник). Вакцины против кишечных инфекций и анатоксины вводят под кожу; оспенную, сибиреязвенную, туляремийную — накожно, туберкулезную (вакцину БЦЖ) — внутрикожно, против полиомиелита— энтерально, гриппозную — через слизистую оболочку носа.
Эффективность вакцинации зависит от правильности введения, от точности дозирования и соблюдения ревакцинаций и в значительной степени от общего состояния вакцинируемого.

СЫВОРОТКИ

Подвергая животных, например лошадей, активной  иммунизации по отношению к какому-нибудь микробу или его экзотоксину, можно получить сыворотки, обладающие специфическими антимикробными или антитоксическими свойствами. Такая сыворотка, введенная человеку, создает невосприимчивость его организма к тому виду микроба или токсину, которым пользовались для иммунизации лошадей. Иммунитет создается при этом путем введения в организм готовых антител, почему и называется пассивным.
Применение иммунных сывороток для лечебных целей называется серотерапией, а с целью профилактики (что бывает реже) — серопрофилактикой.
Различают два основных вида лечебных сывороток: 1) антитоксические и 2) антимикробные.
Получают антитоксические сыворотки гипериммунизацией лошадей небольшими, а затем все возрастающими дозами анатоксина и токсина. При накоплении в крови достаточного количества антител проводят частичное или полное кровопускание. Собранную при этом в специальные стеклянные сосуды кровь оставляют для свертывания. После того как от образовавшегося кровяного сгустка отделится прозрачная сыворотка, к ней прибавляют небольшое количество консерванта (хинозол, фенол, хлороформ и др.). Для того чтобы удалить из сыворотки вредные для организма балластные белки, не являющиеся антителами, ее подвергают очистке и концентрации. В основе этих процессов лежит ферментативное переваривание неиммунных белков сыворотки с последующей ее очисткой диализом. Поэтому очищенные этим методом сыворотки носят название «д и а ф е р м». Затем сыворотку выдерживают при температуре 8° в течение 4—6 месяцев и разливают по ампулам. Перед разливкой в ампулы выдержанную сыворотку испытывают на стерильность, пирогенность (способность вызывать повышение температуры), безвредность и содержание антитоксина.
Титрованием полученных сывороток в опыте на животных определяют антитоксическую силу сыворотки. Сила антитоксина обозначается условной единицей — международной единицей (ME).
Международной единицей антитоксина называют то наименьшее количество иммунной сыворотки, которое нейтрализует определенные количества смертельных доз токсина.
Лечебная сила антитоксических сывороток может быть определена также и in vitro при помощи реакции флоккуляции. К антитоксическим сывороткам относятся противодифтерийная, противостолбнячная, противогангренозная и др.
Антимикробные сыворотки получаются путем гиперимунизации животных убитыми и живыми культурами микробов или экстрактами из них, а также лизатами— продуктами растворения микробных клеток. Для иммунизации пользуются штаммами, обладающими высокими иммунизирующими и полноценными антигенными свойствами.
Сыворотки, полученные при иммунизации лошадей одной определенной культурой, носят название моновалентных.
Сыворотки, полученные после обработки лошади несколькими штаммами одного и того же микроба, называются поливалентными. К антимикробным сывороткам относятся противочумная, противосибиреязвенная, противогриппозная, антирабическая.
С лечебной целью широко используются антитоксические сыворотки. Лечебные антимикробные сыворотки применяются реже. Антитоксические сыворотки назначаются в определенных количествах ME, антимикробные— в миллилитрах. Количество назначаемой сыворотки зависит от тяжести и дня заболевания, возраста больного. Вводят сыворотку обычно внутримышечно, в редких случаях (при особых показаниях) внутривенно и интралюмбально, против гриппа — интраназально. Сыворотку вводят дробно по методу Безредки: в начале 0,1 мл, через 30 минут — 0,5 мл и через 1,5г часа остальное количество.
Лечебные сыворотки, как и другие бактерийные препараты, предназначенные для парентерального введения человеку, перед выпуском их к употреблению подвергаются проверке в Государственном контрольном институте медицинских биологических препаратов имени Л. А. Тарасевича. Сыворотка снабжается этикеткой, на которой обозначают наименование препарата, где и когда он изготовлен, количество его в ампуле, титр, номер серии государственного контроля и обязательно указывают срок годности препарата.
С целью профилактики и лечения при некоторых заболеваниях (корь, коклюш, полиомиелит) вводят гамма-глобулины, полученные из плацентарной крови человека, путем специальной обработки (высаливанием, спиртовым осаждением на холоду и др.). Этот препарат (гамма-глобулины), содержащий достаточное количество антител, вводят в значительно меньшем объеме, чем сыворотку.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »