Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Бактерии кишечно-тифозной группы - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

Бактерии кишечно-тифозной группы относятся к семейству Enterobacteriaceae и включают в себя следующие микроорганизмы: 1) Е. coli (род Escherichia),

  1. S. typhosa, S. paratyphi, S. schottmulleri и возбудители пищевых токсикоинфекций (род Salmonella) и
  2. Sh. dysenteriae (род Shigella).

Несмотря на то, что бактерии кишечно-тифозной группы отличаются друг от друга степенью патогенности и вызывают различные заболевания, всех их объединяет ряд общих признаков.
Местом их обитания является кишечник. Проникают в организм через рот, вызывают патологические процессы в желудочно-кишечном тракте и имеют ряд общих морфологических и биохимических признаков. Все эти микроорганизмы представляют собой мелкие, не образующие спор и капсул, палочки. Они подвижны (перитрихи) за исключением дизентерийной палочки, окрашиваются обычными анилиновыми красками, грамотрицательны. Растут хорошо на обычных питательных средах, лучше в аэробных условиях, желатину не разжижают и не патогенны для лабораторных животных (исключение составляют возбудители пищевых отравлений — сальмонеллы).
Морфология, культуральные и биохимические свойства бактерий кишечно-тифозной группы позволяют считать, что родоначальником всех патогенных представителей этой группы является кишечная палочка, приспособившаяся в процессе эволюции к существованию в кишечнике животных и человека и обладающая наибольшей из всех видов этой группы микробов биохимической активностью. Е. coli, обладающая большой склонностью к изменчивости в зависимости от условий ее существования в организме животных и человека, постепенно теряла свою биохимическую активность и приобрела патогенные свойства. Так возникли новые виды, приспособленные к паразитическому существованию только в человеческом организме (S. typhosa, Sh. dysenteriae). При этом родоначальником тифозной группы бактерий были подвижные формы кишечной палочки, а дизентерийной группы — неподвижные формы.
Биохимическая активность различных представителей кишечно-тифозной группы бактерий подтверждает правильность этого предположения.
Наибольшей активностью обладают бактерии рода Escherichiae. Они разлагают пептон, ферментируют почти все углеводы до кислоты и газа, свертывают молоко. Из патогенных микробов к кишечной палочке наиболее близко стоит группа паратифозных бактерий, которая отличается от Е. coli тем, что не сбраживает лактозы и сахарозы и не свертывает молока. Наиболее патогенная для человека брюшнотифозная палочка отстоит далеко от кишечной палочки, и поэтому ферментирующая ее способность значительно меньше, чем у паратифозных бактерий (разлагает глюкозу, мальтозу и маннит только до кислоты, без образования газа). Таким образом, если сопоставить патогенность микробов кишечно-тифозной группы с их ферментативной способностью, то оказывается что, чем более патогенны бактерии, тем биохимически они менее активны.
Для выращивания патогенных представителей кишечно-тифозной группы бактерий, а также для их идентификации и в первую очередь для отличия от кишечной палочки используют дифференциально-диагностические и элективные питательные среды. Ввиду того что из всех микробов, входящих в кишечную группу, лишь кишечная палочка разлагает лактозу, этот углевод входит во все дифференциально-диагностические среды, применяемые для отличия патогенных представителей от Е. coli.
С этой целью, кроме среды Эндо, применяют среду Левина, бактоагар Ж(Плоскирева) и др. На этих средах кишечная палочка растет в виде окрашенных в определенный цвет колоний, в то время как колонии патогенных микробов бесцветны. Колонии патогенных бактерий, не разлагающих лактозы, будут бесцветными (рис. 77).

Рост кишечной и брюшнотифозной палочек
Рис. 77. Рост кишечной и брюшнотифозной палочек на среде Эндо (а) и среде
Левина {б).

Среда Левина. Приготовляют заранее 0,5% водный раствор метиленовой сини и 2% водный раствор эозина («желтоватого»), стерилизуют в автоклаве при 120°.
К 100 мл стерильного расплавленного агара добавляют: 1) 2 г молочного сахара, растворенного и прокипяченного в небольшом количестве воды; 2) 2 мл подогретого раствора сини; 3) 2 мл раствора эозина; 4) 0,2 г двуосновного фосфорнокислого калия (К2НРО4), предварительно растворенного в стерильной воде. Среду разливают по чашкам.
Среда имеет фиолетовый цвет.
На среде Левина кишечная палочка образует синие или черные колонии, а патогенные бактерии — колонии прозрачные, бесцветные или с розоватым оттенком.
В настоящее время выпускается сухая среда Левина (среда с эозином и метиленовой синью). Приготовляется она аналогично сухой среде Эндо.
Сухой бактоагар Ж (Плоек и рев а). Выпускается обычно в виде готовой питательной среды. Предназначен для выделения тифо-паратифозных и дизентерийных бактерий из испражнений больного. Гигроскопичный и светочувствительный порошок надо хранить герметически закрытым в темноте. Индикатором является нейтральрот. Препарат содержит также соли желчных кислот. Для изготовления среды 7 г порошка высыпают в 100 мл холодной дистиллированной воды, разбалтывают до полного смачивания порошка водой. Смесь нагревают до кипения, не допуская прогорания, и кипятят 2 минуты, затем охлаждают до 50° и разливают в чашки, хорошо подсушивают, приоткрывая крышки, и предохраняют от действия света. Бактерии, разлагающие лактозу (кишечная палочка), образуют красные колонии, а бактерии, не разлагающие лактозы (тифо-паратифозные и дизентерийные), дают прозрачные, бесцветные колонии. Рост сопутствующей микрофлоры, в том числе кишечной палочки, сильно подавляется. Учитывая бактерицидные свойства среды, ее можно разливать в нестерильные чашки.
Для идентификации выделенной культуры применяют «пестрый ряд» углеводов, среду Ресселя, а также молоко с лакмусом.
Среда Ресселя. К 100 мл мясо-пептонного агара (рН = 7,2) добавляют 1 г лактозы, 0,05 г глюкозы и 1 мл реактива Андредё. Разливают в пробирки по 10—15 мл и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут. После стерилизации агар следует скосить так, чтобы нижняя половина осталась столбиком, а верхняя — в виде скошенного агара. При сбраживании глюкозы покраснение наблюдается только в столбике агара, при разложении лактозы резко краснеет вся среда как по уколу, так и по штриху. Разрыв агара свидетельствует о газообразовании.

Техника посева на среду Ресселя следующая. Стерильной петлей снимают с чашки подозрительную (на наличие патогенных бактерий) колонию, вносят уколом в столбик среды, а остаток микробов на петле засевают штрихом по скошенной поверхности.
Молоко с лакмусом. К молоку добавляют 5—10% лакмусовой настойки и столько же 10% раствора углекислого натрия, чтобы пена молока приняла синевато-фиолетовый оттенок. Разливают в пробирки и стерилизуют дробно 3 дня подряд по 30 минут.
Кроме перечисленных питательных сред, для выращивания патогенных представителей кишечно-тифозной группы пользуются элективными питательными средами (среда с желчью, висмут-сульфит-агар).
Бульон с желчью. К мясо-пептонному бульону добавляют 10—25% желчи, разливают по флаконам, куда вкладывают бродильные трубки. Стерилизуют при 112° в течение 20 минут или текучим паром 3 дня подряд по 20—30 минут.
Среда Рапопорт и Вайнтруба. К 1 л мясо-пептонного бульона добавляют 100 мл желчи, 20 г глюкозы или маннита и кислый фуксин до отчетливо розового цвета, разливают по 50— 100 мл во флаконы с поплавками. В колбочки с 50 мл питательной среды опускают трубочки-поплавки с поперечным диаметром 0,8—0,9 см и такой длины, чтобы после засева они возвышались на 3—3,5 см над уровнем жидкости. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 минут. Незасеянная среда имеет слегка желтоватый оттенок. После посева она окрашивается в коричневый цвет вследствие гемолизирующего действия желчи. При росте брюшнотифозных бактерий цвет среды изменяется при росте паратифозных бактерий, отмечается диффузный рост, покраснение и газообразование»
Висмут-сульфит-агар (среда Вильсона —Влера) п о М и и к е в и ч у. 1. Смешивают 1 г глюкозы, 1,25—1,5 г сернокислого натрия, 1 г двуосновного фосфорнокислого натрия и растворяют в. 20 мл подогретой до 85° стерильной дистиллированной воды. 2. Готовят раствор висмута, растворяя 0,4 г лимонно-аммонийного висмута при встряхивании в 5 мл горячей дистиллированной воды, куда добавляют 0,1 мл 10% раствора едкого натра; раствор становится молочно-мутным. Эти два раствора смешивают и полученную смесь добавляют к 100 мл расплавленного и охлажденного до 60° агара, к которому предварительно прибавляют 1 мл 8% раствора сернокислого железа. После этого к среде добавляют 0,4 мл 1% водного раствора бриллиантгрюна; полученную молочно-мутноватую среду (pH 8,0—8,1) разливают по чашкам и подсушивают в термостате.
Брюшнотифозные бактерии на этой среде через 24 часа дают плоские колонии темного грязно-дымчатого цвета на белом фоне в проходящем свете. К концу 2 суток колонии увеличиваются в объеме и принимают темно-зеленую окраску, иногда более светлую на периферии. Паратифозные бактерии дают слизисто-влажные, слегка выпуклые, черного цвета с темными ореолами колонии. Кишечные палочки образуют колонии коричневые, вязкие, которые вырастают позже колоний брюшнотифозных бактерий.
Выпускаемую сухую среду висмут-сульфит-агар по Вильсону — Блеру приготовляют аналогично среде Эндо.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »