Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Возбудитель дифтерии - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

Впервые дифтерийная палочка Corynebacterium diphtheriae) была описана Э. Клебсом в 1883 г., а Ф. Леффлером — в 1884 г.
Морфология и тинкториальные свойства. Бактерии отличаются резко выраженным полиморфизмом. Обычно они имеют 3—4 мк в длину и 0,3—0,5 мк в толщину (рис. 83 и 84).

Мазок из дифтерийной пленки
Рис. 84. Мазок из дифтерийной пленки. Окраска метиленовой синькой (одномоментный способ).
Рис. 83. Дифтерийная палочка в культуре Окраска по Нейссеру.
Дифтерийная палочка в культуре

Встречаются, однако, то более длинные, то более короткие формы. В морфологическом отношении дифтерийные палочки характеризуются тем, что их цитоплазма содержит зернистые включения, а на одном или обоих концах клетки имеются колбовидные утолщения, что придает им форму булавы (согупа — булава). Отсюда и название Corynebacterium diphtheriae. Flo отношению друг к другу палочки располагаются под прямым или острым углом, часто наподобие растопыренных пальцев.
Дифтерийная палочка грамположительна и хорошо красится всеми анилиновыми красками, но воспринимает окраску неравномерно, что. зависит от содержащихся в ней зерен волютина (Бабеша—Эрнста). Последние имеют круглую или овальную форму и располагаются обычно по концам палочек. Волютиновые зерна воспринимают окраску значительно интенсивнее остальной цитоплазмы, благодаря чему их легко обнаружить и при помощи простых методов окраски. В лабораторной практике для этой цели пользуются окраской препаратов метиленовой синью или по методу Нейссера (см. технику окраски, стр. 51).
Культуральные и биохимические свойства. Рост дифтерийных бактерий происходит в аэробных условиях при оптимальной температуре 37°.

Колонии дифтерийной палочки
Рис. 85. Колонии дифтерийной палочки на теллуритовой
среде.
а — колонии типа gravis; б — колонии типа mitis.

Самой лучшей питательной средой для выращивания дифтерийных бактерий является свернутая лошадиная или бычья сыворотка. На этой среде колонии дифтерийной палочки можно обнаружить уже через 8—10—14 часов. Колонии круглой формы, выпуклые, в центре несколько приподнятые, диаметром 1 мм. Поверхность колонии гладкая или слегка зернистая, цвет кремовый. На периферии колонии более прозрачны, чем в центре. Культура вырастает в виде не сливающихся между собой колоний, что придает ей слегка бугристый вид (шагреневый).
Типы дифтерийных бактерий. На основании культуральных и биохимических свойств различают три типа дифтерийных палочек: gravis, mitis, intermedius. С типом возбудителя связывали и различия в клинической картине заболевания. Считали, что дифтерийные палочки типа gravis встречаются в тяжелых токсических случаях. Они образуют на теллуритовой среде (агар с кровью и теллуритом калия) относительно крупные сероваточерные или черные плоские, шероховатые колонии с радиальной исчерченностыо и зубчатым краем (рис. 85), на бульоне дают зернистый осадок и пленку, разлагают крахмал и гликоген, гемолиза не вызывают. Палочки типа mitis наблюдаются в тех случаях, когда общие токсические явления выражены слабо, хотя пленки на миндалинах могут быть довольно велики. Они образуют на теллур-агаре гладкие выпуклые мелкие блестящие колонии
чёрного цвета с ровным краем, равномерно мутят бульон, крахмала и гликогена не разлагают, гемолитичны. Тип intermedius занимает промежуточное положение между gravis и mitis. Бактерии типа intermedius растут скудно и образуют мелкие плоские колонии черного цвета с прозрачной каймой по краю. На среде Тиндаля (цистин-теллурит — сывороточная среда) колонии дифтерийной палочки окружены темнокоричневым ореолом. Однако в настоящее время установлено, что клиническое течение болезни часто не зависит от типа дифтерийной палочки. Все типы дифтерийной палочки разлагают глюкозу, мальтозу, галактозу с образованием кислоты, без газообразования. Лактозу, сахарозу и маннит они не разлагают.
Дифтероиды и ложнодифтерийные бактерии. Под названием «дифтероиды» условно объединяют палочки, морфологически сходные с дифтерийной, но не обладающие токсическими свойствами. Они встречаются на коже и слизистых оболочках здоровых людей. В состав этой группы входят Corynebacterium xerosis, Corynebacterium acne и др.
На слизистой оболочке зева, носа, носоглотки встречается ложнодифтерийная палочка — Corynebacterium Hoffmani.
Особых трудностей при дифференциации их от дифтерийной палочки опытный лаборант-микробиолог не испытывает. Например, палочка Гофмана короче и толще, не обладает полиморфизмом, располагается попарно или частоколом, не имеет зерен волютина. Corynebacterium xerosis в отличие от дифтерийной палочки имеет несколько зерен волютина. Другие дифтероиды по размерам меньше дифтерийной палочки, не обладают полиморфизмом, располагаются друг к другу под углом или частоколом, совсем не имеют зерен волютина или имеют только одно зерно на одном полюсе клетки.
В сомнительных случаях приходится прибегать к изучению биохимической активности выделенной культуры и токсигенности.
Теллуровые питательные среды. 1. Кровяно-теллуровый агар. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 50° 2% мясо-пептонного агара (pH 7,6) добавляют 5—10% дефибринированной крови человека или животного и 1 мл 2% раствора теллурита калия (КгТе04). Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки. На этой среде бактерии дифтерии восстанавливают теллурит калия в металлический теллур.
На теллурит-кровяном агаре микробы кокковой группы растут медленно. Колонии стафилококка к концу 2-х суток становятся крупными серого или черного цвета с коричневым оттенком. Колонии палочки Гофмана к концу 1-х суток роста — гладкие, слизистые с черным центром и серые по периферии, на 2-е сутки вся поверхность колонии становится черной.

  1. Среда Клауберга. 100 мл 3% питательного агара (или 7,5 г сухого питательного агара на 100 мл дистиллированной воды) расплавить, добавить 3 мл 2% раствора теллурита калия, 10 мл глицериновой смеси и 50 мл лаковой крови. Быстро все перемешивают и разливают в чашки. Среда прозрачная, цвет красного вина.

Лаковая кровь готовится следующим образом: к 34 мл дистиллированной воды (стерильной) добавить 16 мл дефибринированной крови крупного рогатого скота или человека либо сухой крови, разведенной соответственно наставлению.
Приготовление глицериновой смеси: к 40 мл дефибринированной крови крупного рогатого скота или человека либо сухой разведенной крови добавить 20 мл химически чистого стерильного глицерина. Смесь рекомендуется выдержать в холодильнике 3—6 недель. На этой среде дифтерийная палочка, восстанавливающая соли теллура, растет в виде круглых непрозрачных колоний черного цвета или с темно-серым центром. Ложнодифтерийные палочки образуют мелкие непрозрачные колонии серого цвета с коричневым центром. Дифтероиды растут в виде выпуклых блестящих колоний серого цвета с черным центром.

  1. Цистин-теллурит-сывороточная среда Тиндаля (модифицированная по инструкции). К 100 мл 2% расплавленного и охлажденного до 60° питательного агара добавляют последовательно: 1) 1% раствор цистина на 0,1 N растворе H2S04 (или НС1) — 12 мл; цистин надо растворять в серной или соляной кислоте, подогревая на водяной бане при температуре 80—85°, 2) 0,1 н. раствор NaOH—12 мл, 3) 2% раствор теллурита калия 1,8 мл, 4) 2,5% раствор гипосульфита натрия—1,8 мл, 5) нормальную лошадиную или бычью сыворотку — 20 мл. Среду перемешивают и разливают в стерильные чашки слоем в 4—5 мл.
  2. Сухая хинозольная индикаторная среда Б учина (по инструкции). К 100 мл холодной воды добавляют 7—8 г порошка сухой хипозольной среды, тщательно размешивают и нагревают на слабом огне до полного расплавления агара. Среду кипятят в течение 2—3 минут, не допуская пригорания агара, до образования крупнопузырчатой, быстро оседающей пены.

К охлажденной до 50° среде добавляют 5 мл (лучше 10—15 мл) стерильной крови, размешивают и разливают в чашки.
После застывания среду слегка подсушивают в термостате и она «может быть использована в течение 3—4 суток при условии хранения от +4 до +10. Приготовленная среда имеет синий цвет. Колонии дифтерийной палочки вырастают через 24—48 часов, при этом восстанавливают индикатор и среда приобретает фиолетовый цвет на месте роста дифтерийной палочки. Колонии дифтерийной палочки окрашиваются в синий цвет.
Резистентность. Температура 60° убивает дифтерийную палочку в течение 10 минут. К прямому солнечному и рассеянному свету палочка дифтерии чувствительна.
К высыханию относительно устойчива. 5% раствор карболовой кислоты убивает ее в течение 1 минуты.
Дифтерийный токсин и патогенность для животных.
Дифтерийная палочка выделяет экзотоксин, токсичность которого может быть настолько велика, что 0,002 мл его при подкожном введении морской свинке вызывает смерть животного через 3—5 дней. Дифтерийный токсин крайне неустойчив: он разрушается при нагревании до 60° и резко ослабляется от действия света и кислорода воздуха. Под влиянием одновременного действия формалина (0,3—0,4%) и температуры 40° в продолжение 1 месяца удается получить — анатоксин. Анатоксин применяется для активной иммунизации людей против дифтерии и при изготовлении лечебных сывороток.
В противоположность токсину анатоксин достаточно стоек: под влиянием действия света и от долгого хранения его антигенная сила не изменяется.
Лучшей средой для получения экзотоксина является мартеновский бульон (см. стр. 67). Сила токсина определяется его наименьшей смертельной дозой — Dim, т. е. тем наименьшим количеством токсина, которое при подкожном введении убивает морскую свинку весом 250 г на 4-й или на 5-й день. У животных не удается получить заболевание, аналогичное дифтерии человека. Однако у некоторых животных, особенно у морской свинки, после заражения развивается ряд весьма характерных патологоанатомических изменений. В результате подкожного введения дифтерийной культуры или дифтерийного токсина животное погибает в ближайшие дни. При вскрытии на месте введения наблюдается серозный или серозно-геморрагический инфильтрат. Надпочечники увеличены и резко гиперемированы. В плевральной полости, в околосердечной сумке и в полости брюшины наблюдается скопление серозного экссудата.
При внутрикожном введении дифтерийного токсина или культуры наблюдаются характерные местные некротические поражения кожи.
Патогенез и клиника дифтерии. Источником инфекции при дифтерии является больной человек, который через выделения — слизь, гной, слюну, мокроту рассеивает микробы в окружающее пространство, на обстановку и предметы. Чаще всего заражение происходит капельноаэрогенным путем. Опасность представляют также реконвалесцент и здоровый бактерионоситель. Дифтерийные
палочки могут сохраняться довольно долго в зеве людей, перенесших дифтерию. Бактерионосительство при дифтерии имеет большое эпидемиологическое значение: оно создает иммунитет и в то же время способствует распространению инфекции.
Дифтерия передается капельным путем при кашле, чиханье и разговоре от бактерионосителя, а также косвенно — через различные предметы, бывшие в употреблении больного человека (белье, постельные принадлежности, игрушки, книги, посуда). Алиментарный путь заражения (через молоко и мороженое)—явление редкое.
В основе патогенеза дифтерии решающее значение имеет интоксикация дифтерийным экзотоксином. Проявляется дифтерия в виде первичного поражения слизистых оболочек миндалин, небных занавесок, носоглотки и носа, откуда процесс может распространяться глубже по дыхательным путям, поражая гортань и бронхи. Иногда наблюдается также дифтерия глаз, раневых поверхностей, уха и влагалища. На месте внедрения микробов появляются сероватые пленки, спаянные с подлежащей тканью; при удалении их видна кровоточащая поверхность.
Размножение дифтерийных палочек происходит только на месте их внедрения, и в кровь они обычно не поступают. В месте своего размножения дифтерийные бактерии вырабатывают экзотоксин, который, всасываясь, дает общую интоксикацию организма.
Инкубационный период при дифтерии 2—7 дней. Заболевание начинается подъемом температуры, болью в горле при глотании и недомоганием. Токсином поражается мышца сердца (малый и частый пульс, глухие тоны). Кровяное давление понижено вследствие поражения надпочечников. В дальнейшем в тяжелых случаях дифтерии появляется цианоз, похолодание конечностей и наступает смерть от острой недостаточности сердечной деятельности.
Дифтерия гортани, или истинный круп, характеризуется сухим лающим кашлем, сужением просвета гортани, кислородным голоданием, заканчивающимся смертью. Токсическими осложнениями при дифтерии являются параличи мягкого неба, конечностей и различных мышц; особенно опасны параличи сердечной мышцы.
Наряду с тяжелыми встречаются легкие, атипические формы дифтерии, которые протекают под видом различных
воспалений миндалин. Такие случаи трудно распознаются и поэтому весьма опасны в эпидемиологическом отношении.
Иммунитет. Иммунитет при дифтерии антитоксический. Он основан на наличии в сыворотке антител — антитоксинов. Грудные дети обычно дифтерией не болеют, что обусловлено имеющимся у них пассивным иммунитетом, который они получают от матери плацентарным путем и отчасти с молоком. В дальнейшем антитоксины накапливаются в результате активной естественной иммунизации и контакта с носителями дифтерийной палочки.

Микробиологическая диагностика. При дифтерии применяют следующие виды лабораторного исследования: бактериоскопический, бактериологический, экспериментальный. Материалом для исследования служат отделяемое пораженных слизистых оболочек, пленки, а по требованию эпидемиолога — молоко, мороженое, смывы с различных предметов (игрушек и др.) Берут материал стерильным тампоном, состоящим из комочка ваты, намотанного на конец деревянной палочки или металлического стержня. При наличии резко очерченных дифтеритических пленок следует потереть пораженный участок тампоном, чтобы получить некоторое количество экссудата. Из носа материал берут таким же тампоном, но на него наматывают несколько меньшее количество ваты. Для того чтобы захватить материал, нужно пройти тампоном первый носовой ход. При взятии материала из
нoca необходимо производить туалет ноздрей (обмывание физиологическим раствором или спиртом) и не касаться кожи носа.
Взятый материал помещают в пробирки и немедленно отправляют в лабораторию. Если доставка занимает больше 3—4 часов, то используют тампоны, смоченные 5% раствором глицерина в 0,85% растворе поваренной соли. Тампоны следует защищать от действия солнца, замораживания и высыхания. Небольшая высеваемость (20—50%) дифтерийной палочки от больных дифтерией чаще всего обусловливается неправильным взятием материала и длительностью времени от момента его взятия до посева.
В лаборатории приступают к бактериологическому исследованию. Тампоны вводят в пробирку со свернутой лошадиной сывороткой и затем втирают его содержимое в поверхность сыворотки, производя при  этом вращательные движения. Одновременно делают посев на чашку с теллуритовым кровяным агаром, на среду Клауберга или на среду Тинсдаля для получения чистой культуры дифтерийной палочки. В целях диагностики бактериоскопическое исследование содержимого на тампоне в настоящее время проводят редко, но иногда в срочных случаях по требованию врача применение его оправдано. Тогда после посева материала делают мазки для окраски синью и по Нейссеру.
Посеянный материал выращивают при температуре 37° и исследуют спустя 18—24 часа. В срочных случаях можно провести исследование раньше, например через 6—12 часов. Из выросшей культуры готовят мазки и окрашивают по Граму, щелочной метиленовой синью и по Нейссеру и микроскопируют. Иногда рост микробов задерживается. В этих случаях необходимо оставить посев еще на сутки и повторить его бактериоскопическое исследование. Присутствие микроорганизмов, обладающих характерными для дифтерии морфологическими и тинкториальными свойствами, можно расценивать как положительный результат.
Метод, который позволяет выделить дифтерийную палочку быстрее, заключается в том, что тампон предварительно смачивают стерильной сывороткой, которую свертывают на тампоне нагреванием до 80°. Сывороточным тампоном протирают пораженный участок (зев, миндалины) и помещают его в термостат при 37°.

Свойства дифтерийной палочки и близких к ней дифтероидов

 

 

 

Окрас

Ферме-
нтативные
свойства

Токси-
ген-
ность

Допол нительные признаки

Наим-
енование вида

Морфология

Поли-
морфизм

ка по Нейссеру

глюко
за

саха
роза

крах
мал

проба
Пизу

проба
на
уреазу

агглю-
тинация .

С. diphtheriae a) gravis

Длинные, тонкие, полярно-зернистые, сегмен-

тированные

Ярко выражен

+

+

+

или
+

+ +

+

б) mitis

Менее длинные, изогнутые, полярно-зернистые, сегмен-

тированные

Выражен менее ярко

+

+

*

"

+
или

+ +

 

+

С. pseudodiphtheriae (Hoffmani)

Короткие, толстые с заостренными концами палочки («сигары»)

Непо-лиморф
ные

+

 

 

 

 

 

+

*

Дифтероиды
а)   С. ceruminis
б)   С. xerosis

Сходны с дифтерийными
Сходны с дифтерийными (длинные, тонкие палочки)

Мало поли-
морфные
То же

+
+

+

+

 

 

ИЛИ +
или
+

или + или +

 

В мазках, приготовленных из 3—4-часовой культуры на тампоне, удается обнаружить значительное число бактерий.
Хорошие результаты получаются при взятии материала не сухим тампоном, а тампоном, перед употреблением пропитанным 2% раствором теллурита калия. Это дает неизменно большую высеваемость дифтерийной палочки. При пользовании теллуритовым тампоном рост дифтерийной палочки на среде Леффлера появляется не позже чем через 18—24 часа.
При идентификации чистой культуры дифтерийной палочки и отличии ее от псевдодифтерийной палочки Гофмана и дифтероидов определяют следующие основные свойства (табл. 20).
При выделении нетоксигенной культуры, не сбраживающей сахара, ставят дополнительные пробы для обнаружения ферментов уреазы (расщепляющей мочевину) и цистиназы (проба Пизу).
Для определения фермента уреазы (проба Закса) выделенную культуру засевают в бульон с мочевиной и индикатором крезолротом. Покраснение среды, наблюдающееся в течение 20 минут, свидетельствует о наличии фермента уреазы, что не характерно для истинных дифтерийных палочек. Наличие фермента цистиназы, обнаруживаемого посевом в столбик питательной среды с цистином и уксуснокислым свинцом, обязательно для дифтерийных палочек. Под действием цистиназы цистин расщепляется и, вступая в реакцию с уксуснокислым свинцом, образует сернистый свинец, который окрашивает среду по ходу укола в черно-бурый цвет.
Для окончательной дифференциации дифтерийных палочек от других представителей группы коринебактерий ставится микроскопическая реакция агглютинации на предметном стекле с поливалентной дифтерийной сывороткой следующим образом: агглютинирующую сыворотку разводят солевым раствором в отношении 1 :25. Солевой раствор готовят так. В 100 г дистиллированной воды растворяют 3 г поваренной соли, устанавливают pH 7,6, добавляя 5% раствор Na2HP04 и стерилизуют текучим паром троекратно. Выделенную культуру смывают этим же солевым раствором, набирают стерильной пастеровской пипеткой и вносят в каплю поливалентной сыворотки. Контролем служит агглютинирующая сыворотка и солевой раствор. При положительной реакции через 2—3 минуты появляются хлопья агглютината.
Можно поставить реакцию агглютинации с типовыми дифтерийными сыворотками I, II, III, IV и VI серотипов.
Если выделенная культура недостаточно типична, то для отличия ее от дифтероидов определяют токсигенность данной культуры путем заражения животных. Определять токсигенность выделенной культуры дифтерийной палочки нужно и в тех случаях, когда этот микроб выделен от здоровых носителей и реконвалесцентов или из таких мест, как раневая поверхность, половые органы, ухо, глаз и т. д. Заражают морских свинок двумя методами — внутрикожным и подкожным. В опыт берут 2 свинок, из которых одной (контрольной) вводят накануне антитоксическую противодифтерийную сыворотку в количестве 500—1000 АЕ; другой свинке (подопытной) сыворотку не вводят. В день опыта обеим свинкам вводят испытуемую культуру в количестве 0,2 мл по стандарту 50—100—200 млн. микробов в 1 мл. При введении суточной культуры под кожу морской свинке у нее развиваются следующие явления. На месте введения уже через несколько часов образуется инфильтрат тестоватой консистенции, который к концу 1-х или 2-х суток достигает весьма значительных размеров. Животное становится вялым, слабым и отказывается от пищи. Смерть наступает через разные сроки (1—5 и более суток) в зависимости от токсигенности культуры и от дозы. При вскрытии на месте введения находят серозный или серозно-геморрагический инфильтрат, в соскобах которого обнаруживаются довольно многочисленные дифтерийные бактерии; кровь и органы остаются стерильными. Из других посмертных явлений наиболее характерны увеличение и гиперемия надпочечников и серозный экссудат в плевральной полости и в околосердечной сумке. В органах находятся некротические участки, пронизанные лейкоцитами, в мышечной и нервной ткани — дегенеративные изменения. При внутри- кожном применении на месте введения культуры наблюдается воспалительная реакция и некроз. У контрольной свинки не отмечается никакой реакции при обоих способах введения культуры. Внутрикожиый метод позволяет на одной свинке проверить несколько штаммов дифтерийной палочки.
Токсигенность дифтерийной палочки можно определить и другим, более простым методом. В чашку Гейденрейха—Петри наливают 12 мл расплавленного и охлажденного до 50° 2% мясо-пептонного агара или 2% агара на мартеновском бульоне, к которому добавляют 0,3 мг цистина и 15—30% нормальной лошадиной сыворотки. Хорошо перемешивают и дают агару затвердеть. Затем на середину чашки помещают полоску фильтровальной бумаги, простерилизованную в автоклаве и смоченную противодифтерийной антитоксической сывороткой, содержащей в 1 мл 500 АЕ. Чашку подсушивают 15—20 минут в термостате, затем засевают исследуемую культуру штрихами перпендикулярно к фильтровальной бумажке или бляшками диаметром 1 см на расстоянии 0,5 см от бумажки. На одной чашке можно посеять 3—4 культуры (одна из них контрольная — токсигенная).

Рис. 86. Образование преципитата — флокулята («стрелы — усики») в результате взаимодействия дифтерийного токсина дифтерийной палочки с антитоксической сывороткой.
Посев каждой культуры производят четырьмя линиями или бляшками (по две с каждой стороны).
Посевы помещают в термостат. Учет производят через 24, 48 и 72 часа.
Определение токсигенности основано на следующем принципе: токсин, образующийся в процессе роста дифтерийной палочки, диффундируют в питательную среду, как и специфическую сыворотку из фильтровальной бумажки. Встреча токсина и антитоксина сопровождается образованием линий преципитата — флокулята в форме «усиков», или «стрелок» между штрихами посевов. Их можно особенно отчетливо видеть, рассматривая чашку на темном фоне с помощью лупы. Линии токсигенных штаммов на периферии сходятся между собой, а если рядом имеется рост контрольного токсигенного штамма, то соединяются с линиями преципитата этого штамма. Флокуляты токсигенного (контрольного) и нетоксигенного штаммов не сходятся, а перекрещиваются (рис. 86).
В случае обнаружения морфологических типичных дифтерийных палочек дается ответ: «Обнаружена дифтерийная палочка». В ответах на диагностические анализы, если не наблюдается рост дифтерийной палочки, указывают, какие другие микроорганизмы обнаружены; в ответах на бактерионосительство их можно не отмечать.
Пример.
АНАЛИЗ № 1
Слизи из зева больной Ивановой Нины на дифтерию.
При бактериологическом исследовании слизи из зева дифтерийная палочка не обнаружена. Получен рост грамположительных стрептококков.
Лаборант                            (подпись)
Специфическая профилактика и терапия. Активная иммунизация детей с целью профилактики производится путем введения анатоксина. В настоящее время в широкую медицинскую практику вошли комбинированные препараты: коклюшно-дифтерийная и дифтерийно-коклюшностолбнячная вакцина (АКДС).
В некоторых случаях для предупреждения дифтерии у детей, находящихся в контакте с больными, приходится проводить пассивную иммунизацию путем введения противодифтерийной антитоксической сыворотки.
С лечебной целью внутримышечно или подкожно больному вводят противодифтерийную сыворотку. Доза ее меняется в зависимости от возраста больного и тяжести заболевания. Ее действие будет тем эффективнее, чем раньше она введена. Антитоксическая сыворотка не обладает бактерицидным действием и леченный ею больной может остаться бактерионосителем и может заражать окружающих.
КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫЕ МИКОБАКТЕРИИ
К группе кислотоустойчивых микобактерий относятся возбудитель туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis) и возбудитель проказы (Mycobacterium leprae). К роду микобактерий относится также ряд сапрофитных микробов, встречающихся в почве, воде, молоке, масле и на коже человека (в отделяемом препуциальной складки—М. smegmatis). По некоторым своим свойствам (образование ветвистых форм и медленный рост некоторых микобактерий на питательных средах) микобактерии близки с грибами, чем и объясняется название группы (mycos — гриб). Бактерии этой группы получили название кислотоустойчивых потому, что они обладают ясно выраженной устойчивостью к минеральным кислотам: в 5—10% растворе серной и соляной кислоты они сохраняются довольно долго. Кроме того, восприняв ту или другую окраску (например, карболовый фуксин), они не обесцвечиваются растворами минеральных кислот. Помимо резистентности к кислотам, эта группа микроорганизмов щелочеустойчива и спиртоустойчива.
Кислотоустойчивые сапрофиты отличаются от патогенных тем, что не требовательны к питательным средам и растут в широком температурном диапазоне.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »