Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Вирус гриппа - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования


Грипп — острая инфекционная болезнь, которая отличается крайней заразительностью и вызывающая большие эпидемии и даже пандемии.
Вирус гриппа
Рис. 114. Вирус гриппа. Ув. 25 000,
Вирусную этиологию  гриппа установили в 1933 г. английские исследователи У. Смит, К. Эндрюс, Р. Лейдлоу. Они доказали, что смывы из носоглотки людей, больных гриппом, содержат вирус, к которому оказались чувствительны белые африканские хорьки.
Морфология. Вирус гриппа имеет округлую форму, размером от 80 до 100 ммк (рис. 114). Иногда располагается кучками или цепочками. В развивающемся курином зародыше приобретает нитевидную форму. Вирус можно обнаружить при помощи электронного микроскопа.
Культивирование. Вирус гриппа культивируют в развивающемся курином зародыше, в культурах ткани и при интраназальном заражении белых мышей, хорьков и белых крыс.
Резистентность. Вирус гриппа малоустойчив во внешней среде. При комнатной температуре погибает в течение нескольких часов, при нагревании до 60° — за 30 минут, а при кипячении моментально. Неустойчив к действию озона и ультрафиолетовых лучей. Хлор, формалин,
хлорная известь, кислоты, щелочи, спирт быстро разрушают гриппозный вирус. Более устойчив к высушиванию.
Антигенная структура. В настоящее время установлено, что возбудителями эпидемического гриппа являются три типа вируса — А, В и С, отличающиеся по своим антигенным свойствам. Тип А имеет разновидности А, А1 и А2. В пределах каждого типа встречаются серологически различные варианты. Каждый серологический тип обладает антигенной самостоятельностью, и поэтому перекрестного иммунитета не наблюдается. Этим объясняются повторные заболевания гриппом. Каждая большая эпидемия гриппа вызывается появлением и распространением новой разновидности гриппозного вируса.
Патогенность для животных и токсические вещества. К вирусу гриппа очень чувствительны хорьки. Хорьков можно заразить через дыхательные пути, причем болезнь у них протекает при подъеме температуры и гнойном катаре слизистых оболочек. Гриппозный вирус удалось перенести и на белых мышей путем интраназального заражения их под легким эфирным наркозом материалом, полученным от больных хорьков. Течение болезни у мышей характеризуется отсутствием поражения верхних дыхательных путей, но у них развивается тяжелое поражение легких, часто приводящее к гибели.
Токсические свойства вируса гриппа установлены в экспериментах на кроликах, морских свинках и мышах. Токсический фактор находится в крови людей, больных гриппом.
Патогенез и клиника. Источником инфекции является больной человек. Заражение гриппом происходит воздушно-капельным путем и прямым контактом. Размножение вируса происходит в эпителиальных клетках слизистой оболочки дыхательных путей. Вирус гриппа оказывает как местное, так и общее токсическое воздействие на организм, проникая в кровь и внутренние органы.
Инкубационный период при гриппе короткий (1 — 2 суток). Заболевание характеризуется внезапным подъемом температуры, головной болью, головокружением, покраснением зева, истечением из носа, кашлем со слизистым отделяемым из бронхов и гортани. Заболевание, вызванное вирусом гриппа, способствует резкому усилению агрессивности ряда других патогенных микробов, встречающихся на слизистых оболочках дыхательных путей: пневмококков, гемолитического стрептококка
и палочек инфлюэнцы. Присоединение вторичной инфекции, вызываемой перечисленными микробами, обусловливает различные осложнения гриппа (пневмония, миокардит, поражения суставов и др.); очень серьезным осложнением является гриппозная пневмония.
При этих пневмониях наблюдается, как правило, бактериемия. Наряду с бактериальными гриппозными пневмониями встречаются и пневмонии, вызванные одним вирусом.
Перенесенное заболевание оставляет непродолжительный иммунитет, длящийся не более 2 лет. Он характеризуется строгой специфичностью в отношении типа вируса, вызвавшего данное заболевание. В сыворотке переболевших содержатся антитела, губительно действующие на вирус гриппа. Напряженность противогриппозного иммунитета зависит не столько от наличия антител в крови, сколько от резистентности слизистой оболочки носа.
Микробиологическая диагностика. Материалом для лабораторного исследования служат носоглоточная слизь, смывы из носоглотки (в первые дни болезни) с целью обнаружения гриппозного вируса. Ретроспективный диагноз ставится при помощи реакции торможения гемагглютинации и реакции связывания комплемента для обнаружения антител в парных сыворотках больного.
Для получения смыва из носоглотки больному предлагают прополоскать зев 15 мл теплого физиологического раствора и полоскательный материал собирают в стерильную банку. В носовые ходы больного поочередно вводят пипеткой по 2—2,5 мл теплого физиологического раствора. При наклоне головы жидкость собирают в ту же банку. Носовые ходы протирают ватным тампоном, который также опускают в банку. Смывы фильтруют через вату для удаления крупных частиц.
У тяжелобольных и детей материал из зева собирают ватным тампоном, увлажненным стерильным бульоном. Носовые ходы протирают свежими тампонами, которые погружают в пробирку с 5 мл стерильного бульона. Если смывы пересылают в лабораторию, их консервируют глицерином  или помещают в термос со льдом.
Перед посевом на 1 мл смыва добавляют (для подавления роста посторонней микрофлоры) 400 ЕД пенициллина и 0,4 мг стрептомицина, затем вводят его (0,1—0,2 мл) в амниотическую полость 11—12-дневных  куриных эмбрионов. Зараженных куриных эмбрионов выдерживают в термостате в течение 72 часов при 35—36°, Для обнаружения вируса из эмбриона стерильно отсасывают 5—8 мл аллантоисной и 0,5—2 мл амниотической жидкости. Присутствие в них вируса обнаруживают с помощью реакции гемагглютинации. Реакцию гемагглютинации можно поставить на предметном стекле и в пробирках. На обезжиренном предметном стекле смешивают каплю аллантоисной жидкости с каплей 5% взвеси эритроцитов курицы или морской свинки. Агглютинация эритроцитов наступает через 2—3 минуты.
Опыт в пробирках ставят следующим образом. Аллантоисную жидкость разводят физиологическим раствором 1 : 10, далее разведение удваивают (1 : 20, 1 : 40, 1 : 80 и 1 : 160), как видно из табл. 28.
Таблица 28
Схема реакции гемагглютинации (РГА)

 

 

 

Пробирка

 

 

Ингредиент

1-я

2-я

3-я

4-я

5-я

6-я

Физиологический раствор

___

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Аллантоисная жидкость (разведение 1 : 10)

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

 

1% эритроциты 30 минут при комнатной температуре Результат

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл эритроцитов курицы. Учет реакции производят через 30—45 минут стояния пробирок при комнатной температуре. В контрольной (6-й) пробирке агглютинации эритроцитов не будет.
Для выращивания вируса гриппа в культуре ткани из пробирок, содержащих монослой клеток, отсасывают питательную среду, 2—3 раза отмывают раствором Хэнкса или другим солевым раствором и вместо нее вносят 0,1—0,2 мл носоглоточного смыва. После контакта в течение 1 часа добавляют 1 мл питательной среды или раствора Хэнкса. Через 2—5 дней стояния в термостате культуру микроскопируют и рост вируса  определяют по цитопатогенному действию. Вирус гриппа не всегда оказывает такое действие на клетки, поэтому для его обнаружения ставят реакцию гемадсорбции, которая заключается в следующем. В пробирку с культурой ткани добавляют взвесь отмытых куриных эритроцитов, которые фиксируются на поверхности эпителиальных клеток, содержащих вирус, в виде гроздьев, розеток, что определяется микроскопически. Добавление типоспецифической сыворотки устраняет гемадсорбцию. Это дает возможность еще определить и тип вируса.
Тип выделенного вируса определяют с помощью реакции задержки гемагглютинации  (РЗГА). Ее можно поставить на предметных стеклах и в пробирках. На предметные стекла наносят каплю выделенного вируса гриппа, типовые сыворотки разводят физиологическим раствором 1:5, 1 : 10, на первом стекле смешивают вирус с каплей противогриппозной сыворотки типа А, на втором — с противогриппозной сывороткой A1 и т. д. На седьмое стекло добавляют каплю нормальной сыворотки. Затем вносят на каждое предметное стекло третий ингредиент реакции — каплю 5% взвеси эритроцитов. Учет реакции производят через несколько минут. При смешивании вируса гриппа с соответствующей типоспецифической сывороткой реакция агглютинации не наступает, что объясняется нейтрализацией вируса.
Реакция связывания комплемента ставится для обнаружения антител в сыворотке крови больных. В последнем случае ее следует поставить в первые дни заболевания и повторно спустя несколько дней (для определения нарастания титра антител), так как в сыворотке многих людей имеется некоторое количество антител в результате ранее перенесенных заболеваний.
Биологическая проба ставится на мышах, которым под эфирным наркозом интраназально вводят 0,05—0,1 мл исследуемого материала. Через 2—4 дня у животных развивается пневмония, приводящая к гибели их в течение 1—2 суток.
Простым и вместе с тем ценным методом лабораторного исследования является изготовление препаратов отпечатков (со слизистой оболочки нижней раковины), на которые наносят каплю флюоресцирующей сыворотки. Обнаружение при такой экспресс-диагностике через несколько часов специфического зеленовато-желтого  свечения в клетках цилиндрического эпителия слизистой оболочки носа подтверждает присутствие вируса гриппа.
Специфическая терапия и профилактика. Для лечения гриппа применяется противогриппозная сыворотка, интерферон (лейкоцитарный).
Специфическая профилактика осуществляется путем иммунизации населения живой вакциной из ослабленного вируса. Вакцина вводится непосредственно в дыхательные пути путем закапывания в носовые ходы или вдыхания распыленного препарата по Смородинцеву.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »