Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Санитарно-бактериологическое исследование воды - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ, НАПИТКОВ, МОЛОКА И ДРУГИХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ
Выживаемость патогенных микроорганизмов в различных объектах внешней среды (воздух, вода, почва; пищевые продукты и т. д.) может способствовать в определенных случаях при несоблюдении необходимых санитарно-гигиенических мероприятий заражению людей возбудителями инфекционных заболеваний (брюшной тиф, дизентерия, холера, пищевые отравления и др.).
Для предупреждения возможности заражения патогенными микроорганизмами различных объектов внешней среды Советским правительством был издан ряд законов, в которых предусмотрены необходимые санитарные мероприятия по содержанию источников водоснабжения, почвы, воздуха и пищевых продуктов.
В нашей стране ежегодно увеличивается сеть санитарных станций и химико-бактериологических лабораторий, которые призваны осуществлять контроль за качеством воды, пищевых продуктов, за санитарным состоянием воздуха, почвы и т. д.
Лаборатория осуществляет повседневный химико-бактериологический контроль за всеми источниками водоснабжения (водопровод, колодцы, реки) и пищевыми продуктами. Систематически проводит контроль за обсемененностью воздуха патогенными микроорганизмами.

ВОДА

Питьевая вода должна отвечать следующим бактериологическим показателям: 1) содержать в 1 мл не более 100 микробов; 2) в 300 мл воды должна отсутствовать кишечная палочка; 3) не должно быть обнаружено патогенных микробов.
Взятие пробы. Для производства анализа воды бактериологическая лаборатория должна иметь запас стерильной посуды (бутылки емкостью 500, 250 и 100 мл). Бутылки тщательно моют, закрывают ватными, обернутыми в марлю пробками, накрывают бумажными
колпачками и завязывают шпагатом, после чего стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 минут. Вторую пробку, завернутую в пакет, стерилизуют привязанной к бутылке. Для взятия проб хлорированной воды в бутылки перед стерилизацией вносят 2 мл 1,5% раствора гипосульфита (серноватистокислого натрия). Водопроводную воду берут для исследования в количестве 500 мл. Кран водопровода обжигают пламенем паяльной лампы или ватного тампона, смоченного спиртом, после чего открывают и в течение 10—15 минут спускают воду. Это необходимо сделать потому, что вода в трубе может застояться, и тогда результаты исследования будут неточны. Бутылку развязывают, вынимают пробку вместе с бумажным колпачком и держат в руке так, чтобы не загрязнить. Наполняют бутылку водой с таким расчетом, чтобы не замочить пробку. Закрывают над огнем, завязывают и делают надпись: откуда взята проба, адрес, дата и час взятия, цель исследования и фамилия лица, взявшего пробу, или же ставят номер, а в сопроводительном документе против номера дают описание. Бутылка с исследуемой водой должна быть возможно быстрее доставлена в лабораторию (с момента взятия до момента доставки пробы в лабораторию должно пройти не больше 2—3 часов). Летом бутылки с водой рекомендуется обложить резиновыми мешками со льдом, а зимой — грелками с теплой водой. Доставленную в лабораторию воду регистрируют в журнале под порядковым номером и сразу же делают посев. При заборе воды для исследования из колодцев, открытых водоемов, бассейнов и т. д. воду берут с определенной глубины. Для этого пользуются батометрами — приборами, представляющими собой металлический каркас, внутри которого установлена стерильная склянка с пробкой, к которой привязана веревка. Батометр опускают в воду, на нужной глубине потягиванием за веревку открывают пробку, а по заполнении склянки веревку опускают и пробка автоматически захлопывается. При извлечении сосуда из каркаса металлическую пробку заменяют ватной.
Повседневно воду исследуют: а) на общую бактериальную обсемененность (микробное число) и б) на фекальное загрязнение (коли-титр). Исследование на патогенную группу (возбудителей брюшного тифа, холеры и дизентерии) производится по эпидемическим показаниям.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ НА ОБЩУЮ БАКТЕРИАЛЬНУЮ ОБСЕМЕНЕННОСТЬ

Техника определения количества микробов в воде следующая. Стерильной пипеткой набирают 1 мл исследуемой воды и вносят в чашку Гейденрейха—Петри. Заливают расплавленным и остуженным до 45° мясо-пептонным агаром, хорошо перемешивают, дают застыть агару и ставят в термостат при 37° вверх дном на 24 часа. Воду с более богатой микрофлорой предварительно разводят стерильной водой в 10, 100 раз и т. д.

Камера Вольфюгеля
Камера Лафара
Рис. 120. Камера Вольфюгеля для счета колоний.
Рис. 121. Камера Лафара для счета колоний.

Счет колоний. Подсчет выросших колоний производят с помощью лупы через 24 часа пребывания в термостате. В случае обильного роста — более 50 колоний — счет производится в камере Вольфюгеля или Лафара. Чашку с посевом помещают под стекло камеры Вольфюгеля (рис. 120) и подсчитывают число колоний в нескольких квадратах, например в десяти (если колоний немного и они крупные, считают в больших квадратах; если колоний много и они растут густо, считают в малых квадратах). Общий подсчет колоний производится следующим образом: сосчитанное в 10 квадратах число колоний делят на число квадратов, т. е. на 10, и получают среднее число колоний на один квадрат. Например, если общее количество колоний для 10 квадратов было 100, то среднее число колоний на один квадрат составит 100: 10, т. е. 10.Еще проще вести счет колоний в камере Лафара. (рис. 121). В ней круглая стеклянная пластинка разделена на секторы и сегменты, причем диаметр круга равен диаметру чашки, т. е. 10 см. Сосчитывание колоний производится по секторам пластинки, накладываемой на чашку так, чтобы центр ее совпадал с центром чашки. Пластинка разделена на 6 секторов, и количество колоний бактерий, сосчитанное в одном секторе, умножается для всей чашки на 6. Если колоний много, тогда сосчитывают колонии в маленьких треугольниках, равных 1 см2, и, вычислив площадь чашки, соответственно умножают.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ НА КОЛИ-ТИТР

Исследование воды на коли-титр может быть произведено: а) бродильным методом и б) посевом на мембранные фильтры.
Метод санитарно-бактериологического исследования воды определяется ее категорией. Воды централизованного водоснабжения, артезианских скважин исследуют в соответствии с ГОСТ 5216—50. Для исследования вод открытых водоемов, сточных вод ГОСТ не предусмотрен, поэтому в зависимости от качества воды и условий может быть использован двух-, трехэтапный бродильный метод и метод мембранных фильтров.

Бродильный метод

Для исследования этим методом применяют следующие питательные среды.
Среда Булира (модификация). К обычному мясо-пептонному бульону прибавляют 0,25% маннита и по растворении его устанавливают pH 6,8—7,0, кипятят 10—15 минут, добавляют водный насыщенный раствор нейтральрота до ясной вишнево-красной окраски, фильтруют и разливают в колбы и пробирки с поплавками (по мл среды обычной концентрации), стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 15 минут.

Среда Эйкмана (модификация). Основной концентрированный раствор готовят, смешивая 100 мл дистиллированной воды, 10 г пептона, 2,5 г глюкозы, 5 г хлористого натрия, кипятят и фильтруют (глюкозу добавляют после кипячения и фильтрации), устанавливают pH 7,4—7,6, разливают в колбы по 10 мл, а в пробирки по 1 мл, стерилизуют дробно 3 дня подряд по 30 минут ежедневно. Для. приготовления разведенной среды к 1 части концентрированного раствора добавляют 9 частей дистиллированной воды.
Розоловая дифференциальная среда (РДА). К 1 л мясо-пептонного 1,5% агара с pH (концентрацией водородных ионов) 7,4—7,6 добавляют 50 мл жидкой желчи или из того же расчета сухой желчи, 10 г лактозы, 1 г глюкозы, 2 мл 1% раствора спиртового индикатора бромтимолового синего и 2 мл 5% спиртового раствора розоловой кислоты. Полученную среду тщательно смешивают и проверяют на буферную способность следующим образом: 1—2 капли приготовленной среды помещают на стекло, чашку Гейденрейха — Петри или белую фарфоровую пластинку. Когда среда остывает, на ее поверхность наносят каплю 10% раствора соляной кислоты и рядом (так, чтобы не смешивалось) каплю 20% раствора едкого натра или углекислого натрия. Правильно приготовленная среда должна иметь с индикатором - бромтимоловым синим коричнево-красный цвет, а без индикатора — бледно-розовый и должна быстро изменять цвет в желтый от кислоты и в слабомалиновый от щелочи. Если реакция протекает медленно (неправильно установлен pH мясо-пептонного агара), необходимо для получения быстрого изменения окраски добавить к среде 10% раствор соляной кислоты, — если среда интенсивно малинового цвета, или 10% раствор щелочи, если среда серо-желтого цвета. После этого надо снова проверить pH.
Приготовленную среду разливают в серологические или узкие бактериологические пробирки до 1/4 их высоты и стерилизуют под давлением 0,5 атм. 10 минут следующим образом. Среду помещают в автоклав, предварительно нагретый до парообразования. По окончании стерилизации пар спускают и тотчас же открывают крышку автоклава. Когда пар выйдет, среду вынимают и в вертикальном положении (не допуская отклонения поверхности среды) дают застыть. Потом ставят в термостат на 2 суток для проверки стерильности и просушивания пробок. Перед употреблением среду предварительно расплавляют и дают застыть с небольшой скошенной поверхностью.
Примечание. РДА можно готовить и без индикатора бромтимолового синего.
Среда Краевской. К 1 мл жидкой желчи добавляют 10 г пептона, смесь кипятят 30 минут, фильтруют, добавляют 10 г лактозы, устанавливают pH 7,8—8,2, добавляют 8 мл 1% водного раствора генцианвиолета, разливают в пробирки с поплавками, стерилизуют при 120° в течение 15 минут. Генцианвиолет прибавляют к среде Краевской как антисептик, подавляющий рост грамположительной флоры, а желчь вводят как защитный фактор для кишечной палочки.
рис. 122. Колба со средой Булира, в которую погружена опрокинутая пробирка для собирания газа.

Среда Кесслера — Свенартона. К 1 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи, смесь кипятят, помешивая, в течение 20—30 минут на водяной бане и фильтруют через вату. Потом растворяют в ней 2,5 г лактозы и доводят объем водой до 1 л. Устанавливают pH 7,4—7,6 и добавляют на 1 л 2 мл 1 % водного раствора генцианвиолета. Разливают по 5 мл в пробирки и стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 15 минут или дробно.
Выбор объема воды для посева при определении титра кишечной палочки зависит от источника водоснабжения и степени предполагаемого микробного загрязнения.
Первый день. Водопроводная вода. Водопроводную воду берут для исследования в количестве 500 мл. Подготовляют к посеву две бутылки емкостью 100—120 мл и 10 пробирок с основной средой Эйкмана (или Булира) с поплавками (рис. 122), стерильную чашку Гейденрейха — Петри и пипетки 10 и 1 мл, моровские пипетки или цилиндры на 50—100 мл. На бутылках и пробирках ставят номер исследуемой воды и дату посева.
Открывают бутылку с исследуемой водой над огнем и делают посевы: 1 мл вносят на чашку Гейденреха— Петри (для определения микробного числа), приоткрыв крышку, чашку заливают 15 мл расплавленного до 45° мясо-пептонного агара; хорошенько размешивают, вращая чашку на столе кругообразными движениями, дают агару застыть и переворачивают чашку вверх дном. 10-миллилитровой пипеткой или цилиндром засевают по мл воды в 10 пробирок с основной средой Эйкмана (или Булира), а 50—100-миллилитровой пипеткой или цилиндром засевают в 2 бутылки со средой Эйкмана (или Булира) по 100 мл воды для определения коли-титра. Посевы на коли-титр ставят в термостат на 24 часа при 43°, на микробное число — при 37°.

При температуре 43° кишечная палочка теплокровных будет размножаться, в то время как сапрофитная флора погибает или рост ее угнетается.
Колодезная вода. Колодезную воду берут для исследования в количестве 200—300 мл и засевают на чашку в количестве 0,1 мл для определения микробного числа.
Для определения коли-титра засевают 100; 10; 1 и 0,1 мл воды, последние два объема — в пробирки с разведенной средой Эйкмана.
Речная вода. Речную воду берут в количестве 100 мл. Разведения для посевов делают от 1 : 10 до 1 : 100 000. Разведение воды делают следующим образом: 1 мл исследуемой воды вносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды, хорошенько перемешивают, промывая пипетку несколько раз. Получают разведение воды 1 : 10. Из этого разведения берут 1 мл и переносят в следующую пробирку. Получают разведение воды 1 : 100 и т. д. На общее бактериальное обсеменение засевают не менее двух чашек от двух разведений в зависимости от предполагаемого загрязнения (например, 1 : 10 и 1 : 100 или 1 : 100 и 1 : 1000).
На коли-титр засевают 10; 1; 0,001; 0,0001, 0,00001 мл. Посевы в чашках ставят в термостат температуры 37°, а бутылки и пробирки — при температуре 43°.
Сточная вода. Сточную воду берут в количестве 100 мл. Засевают на общее бактериальное обсеменение не менее двух чашек с разведением 1 : 1000 и 1 : 10 000. На коли-титр делают посевы, начиная с 1 мл и кончая разведением 1 : 100 000 и 1 : 1 000 000. Посев производят в среду Кесслера.
Второй день. Чашки с посевами на общую обсемененность вынимают из термостата и подсчитывают общее количество выросших колоний.


Найденное количество колоний в 1 мл

Результат анализа

1—50

Приводится, как подсчитано

 

51 — 100

Округляется до ближайших

5

101—250

» » »

10

251—500

» » »

25

501—1 000

» i »

50

1 001—50 000

» » »

100

10 001—50 000

» » »

1000

50 001—100 000

» » »

10 000

Бутылки и пробирки с посевом на коли-титр вынимают из термостата и просматривают. В рабочем журнале отмечают рост (помутнение — газ). При отсутствии роста при посеве водопроводной воды заканчивают анализ и дают определенный ответ: коли-титр более 333. Более загрязненную (речную, сточную) воду при отсутствии роста оставляют еще на сутки.
Из бутылок и пробирок с наличием мути и газа или одного помутнения делают пересевы на цветные среды Эндо или Левина.
Третий день. Просматривают чашки с цветными средами, отмечают в рабочем журнале наличие роста, характер колоний. Колонии кишечной группы будут гладкие (красные на среде Эндо и синие на среде Левина) с металлическим оттенком. Из таких подозрительных колоний делают мазки и красят по Граму. При наличии грамотрицательных неспоровых палочек такие колонии пересевают на второй бродильный титр (в пробирку с разведенной средой Эйкмана и с поплавком) и ставят в термостат при 43°.
Прозрачные бесцветные колонии отвивают на скошенный агар для последующей идентификации по пестрому Ряду.
Четвертый день. Учитывают посев во втором бродильном титре. При наличии помутнения и газа дают окончательный положительный ответ, при отсутствии газа — отрицательный. На этом анализ заканчивается. В журнале отмечают коли-титр или коли-индекс по табл. 29, 30, 31.

Водопроводная вода Общий объем 300 мл (2 объема по 100 мл и 10 объемов по 10 мл)


На 100 мл

0

1

2

 

количество
положительных объемов по 10 мл

индекс

титр

индекс

титр

индекс

титр

0

<3

>333

4

250

11

91

1

3

333

8

125

18

56

2

7

143

13

77

27

37

3

11

91

18

56

38

26

4

14

71

24

42

52

19

5

18

56

30

33

70

14

6

22

45

36

28

92

11

7

27

37

43

23

120

8

8

31

32

51

20

161

6

9

36

28

60

17

230

4

10

40

25

69

14

>230

<4

Обозначения: знак < обозначает меньше, знак > обозначает больше.
Таблица 30
Вода из колодца Общий объем 111,1 мл (объемы 100; 10; 1 и 0,1 мл)


100

10

1

0,1

Coli-индекс

Coli-титр

_

 

_

 

<9

>111

+

9

111

+

9

111

-

 

9,5

105

 

+

+

18

56

+

+

19

53

+

+

22

46

 

 

 

23

43

+

+

+

28

36

+

 

 

+

92

11

+

-

+

94

10

+

+

+

180

6

+

+

 

230

4

+

+

 

+

960

1

+

+

+

2 380

0,4

+

+

+

+

>2 380

<0,4

Обозначения; + наличие роста кишечной палочки; — отсутствие роста Кишечной палочки.

Речная вода
Определение Coli-титра и Coli-индекса при посеве 10; 1; 0,1 и 0,01 мл


10

1

0,1

0,01

-индекс

-титр

 

___

___________

__

<90

>11,1

90

11,1

+

90

11,0

 

95

10,5

+

+

180

5,6

+

+

190

5,3

+

+

220

4,6

+

230

4,3

+

+

+

280

3,6

+

+

920

1,1

+

+

940

1,0

+

+

+

1 800

0,6

+

+

2 300

0,4

+

-

+

9 600

0,1

+

+

+

23 800

0,04

+

+

+

+

>23 800

<0,04

Примечания к таблицам 29, 30, 31.

  1. При 2-й бродильной пробе получили газообразование и муть в одном объеме (бутылка) — 100 мл и в 3 пробирках по 10 мл. Ищем в табл. 29 по вертикали 1 и по горизонтали 3. На пересечении находим коли-титр 56 и коли-индекс 18.
  2. При посеве 100, 10, 1, 0,1 мл получено брожение в сосудах, засеянных 100 и 0,1 мл. В табл. 30 находим по двум вертикалям знак +, по горизонтали ответ 92 и 11.

Прозрачные колонии, идентифицированные по пестрому ряду как Е. paracoli или Е. faecalis alcaligenes, отмечают в журнале как кишечную палочку.
С 1959 г. введен двухфазный метод определения колититра и коли-индекса воды.
Посев воды двухфазным бродильным методом с применением розоловой среды (ГОСТ 5216—50 от 1959 г.).
Первый этап. Вода засевается, как было описано выше, в глюкозопептонную среду (ГПС) в тех же количествах (водопроводная вода — две бутылки по 100 мл и 10 пробирок по 10 мл, колодезная — 100; 10; 1; 0,1 мл и т. д.).
Второй этап. По истечении 7—12 часов стояния в термостате из всех засеянных сосудов независимо от наличия признаков роста (муть, газообразование) делают пересев на среду РДА следующим образом: материал из среды накопления (ГПС) берут петлей и переносят в пробирку с РДА, слегка растирают в конденсационной жидкости, делают укол в столбик, не доводя до дна пробирки, а при вынимании петли ею проводят штрих по скошенной поверхности агара. Эти пересевы ставят в термостат при 37° на 24 часа, а первичный посев на ГГ1С оставляют в термостате при 42—43° до следующего дня.
Примечания. 1. Если при пересеве через 7—42 часа роста бактерий на РДА нет, а в среде ГПС через 24 часа появится газообразование или муть, вновь делают пересев на среду РДА и выращивают 10—12 часов.

  1. Если срочный ответ не требуется при отсутствии круглосуточного дежурства в лаборатории, пересев с ГПС на РДА может быть сделан не позже чем через 24 часа. Если пересев сделан позже 16—18 часов, то первичный посев на ГПС вновь в термостат не ставится.

Третий этап. Учет посевов на среде РДА. Признаки обнаружения кишечной группы.
Кишечные палочки. Результат исследования считается положительным, если в ГПС имеется газообразование и муть или только муть. На скошенной поверхности РДА появляется рост в виде изолированных желтых колоний или желтого штриха на пожелтевшей среде, столбик РДА окрашивается в желтый цвет с разрывами, а конденсационная жидкость вспенивается. Для подтверждения наличия кишечной палочки, делают мазок и окрашивают по Граму.
Паракишечные палочки. На скошенной поверхности вырастают серые колонии или серый штрих, цвет среды в скошенной части не изменяется или в результате образования щелочи растущими бактериями появляется малиновый оттенок. В столбике РДА среда желтого цвета с разрывами, пена в конденсационной жидкости, в мазках грамотрицательные палочки.

Методика посева воды на мембранных фильтрах

Исследование воды посевом на мембранных фильтрах в последние годы применяется в большинстве бактериологических лабораторий. По сравнению с бродильным методом он имеет следующие преимущества:

  1. сокращает срок анализа до 24 часов;
  2. экономит среды и время;
  3. дает возможность обнаружить самые незначительные количества микробов в воде;
  4. позволяет производить прямой и достаточно точный подсчет количества колоний;
  5. позволяет выделить каждый микроб в чистой культуре.

Фильтры, вынутые из упаковки, просматривают. Матовая сторона имеет отметку карандашом — точку. Никаких дефектов (трещины, разрывы) фильтры не должны иметь. Фильтры кладут в эмалированную или фарфоровую кастрюлю, в которую наливают теплую дистиллированную воду, выдерживают 20—30 минут, сливают ее и снова доливают дистиллированной водой. Так поступают 3 раза. Подготовленные таким способом фильтры кипятят в дистиллированной воде 1 минуту, после чего воду сливают, заменяют свежей водой и снова кипятят в течение 15—20 минут. Это делается для того, чтобы удалить химические вещества, содержащиеся в фильтрах, и избежать их скручивания. После того как жидкость остынет, приступают к посеву. Для фильтрования воды применяют аппарат Зейтца (см. рис. 32) или специальный аппарат Рублевской водопроводной станции.
По окончании фильтрации воды фильтр снимают стерильным пинцетом и накладывают на среду Эндо кверху воздушной матовой поверхностью. На чашке Гейденрейха—Петри можно поместить 4—5 фильтров. На дне чашки против каждого фильтра ставят номер анализа. Устанавливают в термостат при 37°. На следующий день с помощью лупы просматривают фильтры. Отсутствие роста микробов вообще или Е. coli на фильтрах служит основанием отрицательного ответа, который дают через 24 часа.
Если же есть рост кишечной палочки, то дальнейший анализ проводят следующим образом.
Подсчитывают колонии, типичные для кишечной группы (рис. 123 на вклейке).

Рост колоний Е. coli
Рис. 123. Рост колоний Е. coli на мембранном фильтре.

Из подозрительных колоний делают мазки и красят по Граму. Из колоний с грамотрицательными палочками делают посев на среду Эйкмаиа (пробирки с разведенной средой по 5 мл). Выращивание ведут при температуре 43°. Через 24 часа при наличии в пробирках роста (муть и газ) дают окончательный положительный ответ в пересчете на коли-титр и коли-индекс. Например, на фильтре выросли 3 окрашенные колонии. Воды было пропущено 300 мл.
Следовательно, одна кишечная палочка находилась в 100 мл, т. е. коли-титр равен 100, а коли-индекс (количество кишечных палочек в 1 л) равен 10.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ НА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРЮШНОГО ТИФА И ДИЗЕНТЕРИИ

Исследование воды для обнаружения возбудителей брюшного тифа и дизентерии проводится по эпидемиологическим показаниям или по специальному требованию.
Для идентификации возбудителей брюшного тифа и дизентерии в воде применяют следующие методы:

  1. сигнальный (реакция нарастания титра фага);
  2. ускоренный (иммунолюминесцентный);
  3. классический, связанный с выделением возбудителя в чистой культуре.

Количество патогенных микробов в воде бывает ничтожно, выделить их обычными лабораторными методами очень сложно, поэтому используют ряд методов, чтобы сконцентрировать их в небольшом объеме воды. Это может быть достигнуто разными способами:

  1. Физическим методом: а) центрифугированием, б) выпариванием в вакууме с сильным влагопоглотителем (H2S04 и др.), в) фильтрацией через мембранные фильтры.
  2. Химическим методом (концентрация микроорганизмов при помощи различных коагулянтов).
  3. Осаждением при помощи специфических агглютинирующих сывороток.
  4. Концентрацией по методу флотации (основан на способности некоторых углеводов — ксилол, бензол адсорбировать на поверхности микроорганизмы).
  5. Методом положительного хемотаксиса подвижных микробов (метод Березова).

В практике наиболее широко применяется метод осаждения коагулянтами (способ Мюллера и др.) и метод фильтрации. В обоих случаях рекомендуется брать большое количество воды — 5—6 л.
Метод Мюллера. К 3 л испытуемой воды добавляют 12 мл стерильного 10% содового раствора и 5 мл стерильного полуторахлористого железа. Оставляют на 1 час отстояться. Получившиеся при этом хлопья осядут на дно, увлекая за собой микробов. Осторожно отсасывают прозрачную воду, а осадок сливают в центрифужки, центрифугируют при 2000 оборотов в течение 5—10 минут. Сливают прозрачную жидкость, а осадок сеют на ряд цветных чашек (лучше брать несколько цветных сред по 2—3 чашки), для этого осадок наносят на среду
и хорошо втирают материал шпателем, переходя с чашки на чашку. На последних чашках наблюдается рост единичных колоний. Выращивают при 37°. Из подозрительных колоний выделяют чистую культуру и идентифицируют по схеме для бактерий брюшного тифа и дизентерии.
Метод фильтрации. Через фильтры пропускают не менее 500 мл исследуемой воды (но лучше 5—6 л); через каждый фильтр по 25—50 мл, а можно и больше, если вода хорошо фильтруется. Половину фильтров помещают в среду обогащения (желчный бульон, среда Мюллера, селенитовый бульон). Высев из среды обогащения на чашку со средой Плоскирева или Левина производят через 18—20 часов. Остальные фильтры помещают на чашки со средой Вильсона—Блера (висмутагар), а с нескольких фильтров делают смыв физиологическим раствором и этот смыв рассеивают шпателем по чашкам со средой Плоскирева или Левина. Чашки ставят в термостат при 37° на сутки. Подозрительные колонии с чашек выделяют и идентифицируют по схеме для брюшного тифа и дизентерии.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »