Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Санитарно-бактериологическое исследование молока - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Молоко и молочные продукты подвергают микробиологическому исследованию:

  1. в порядке контроля за соблюдением санитарно-гигиенического режима в процессе обработки, хранения и реализации молочных продуктов;
  2. во всех случаях, когда возникает сомнение в качестве продуктов и подозрение, что они могут вызвать заболевание у людей;
  3. в случаях пищевой интоксикации, которую связывают с употреблением этих продуктов.

Взятие проб. Молоко, сливки, простокваша, сметана, кефир, ацидофильное молоко и другие молочнокислые продукты хорошо перемешивают черпаком или ложкой, берут 50 мл в стерильную бутылку с ватно-марлевой пробкой и бумажным колпачком.
При необходимости произвести полный микробиологический анализ необходимо 250—300 мл. Расфасованные продукты поступают на микробиологическое исследование в оригинальной упаковке—1—2 образца. Мороженое берут из середины массы. Для этого верхний слой в 2,5 см снимают стерильной ложкой или шпателем и набирают 50 г в стерильную банку. От расфасованного мороженого берут 1—2 образца, снимают упаковку (бумага, целлофан или свинцовая бумага) и кладут в стерильную банку. До исследования мороженое сохраняют на холоду (—2°). Масло, творожные изделия берут стерильным щупом на расстоянии 3—5 см от края, наклонно направляя щуп к противоположной стороне, опуская на 1\3 его длины. Из щупа отбирают 20 г продукта в стерильную банку. При исследовании сыра поверхность образца протирают ватой, смоченной этиловым спиртом и обжигают. Стерильный щуп вводят наклонно и отбирают 10 г в стерильную посуду. При подозрении на пищевую интоксикацию поверхностный слой образца берут в отдельную посуду и делают отдельный посев.
Время с момента взятия проб и до посева не должно превышать 4 часов. Если срок доставки и хранения удлинен, то это указывается в направлении и отмечается в лабораторном журнале.
Методика исследования пастеризованных молочных продуктов. Первый день. Молоко открывают, соблюдая правила стерильности, хорошо перемешивают стерильной пипеткой и делают посевы на общее бактериальное обсеменение и на коли-титр.
Для определения общего количества микроорганизмов делают разведение молока 1 : 10; 1 : 100; 1 : 1000. 1 мл из каждого разведения вносят в одну чашку Гейденрейха—Петри и заливают 12—15 мл агара, как это описано при исследовании воды, и ставят в термостат при 37° на 48 часов.

Общее количество бактерий в мороженом определяется так же, как и в молоке.
В молочнокислых продуктах (ацидофильное молоко, простокваша, кефир, творог, сметана и др.) общую обсемененность не определяют, а контролируют состав молочнокислой микрофлоры. Для этого приготавливают препараты из молочнокислых продуктов, окрашивают их метиленовым голубым и микроскопируют.
Для определения коли-титра молоко и молочнокислые продукты (кефир, простокваша, ацидофильное молоко, кумыс и др.) засевают в 6 пробирок со средой Кесслера. В 3 пробирки засевают по 1 мл цельного продукта и в 3 пробирки по 1 мл из разведения продукта 1 : 10v Мороженое засевают в 3 пробирки из разведения 1 : 10. Для сырого молока делают добавочные разведения 1: 100, 1 : 1000, 1 : 10 000, 1 : 100 000 и засевают по 1 мл каждого разведения.
Масло, сыр, брынзу засевают в среду Кесслера по пробирки из каждого разведения, творог и сметану по 1 пробирке из каждого разведения. Разведения делают, начиная с 1 : 10 и кончая 1 : 100 000; при исследовании масла сеют 1 мл цельного продукта и по 1 мл из разведений продукта 1:10, 1 : 100, 1000.
Посевы ставят в термостат при 43° на 24 часа. При исследовании мороженого пробирки с посевом выдерживают в термостате при 43° 48 часов.
Второй день. Из пробирок делают высевы на среду Эндо и ставят в термостат при 37° на 18—24 часа.
Третий день. Чашки просматривают, из характерных колоний (красных с металлическим блеском, розовых, бледно-розовых) делают мазки, красят по Граму и микроскопируют.
При обнаружении грамотрицательных неспоровых палочек оставшуюся часть колоний высевают на среду с глюкозой и на среду Козера. Пробирки с посевами на среде Козера помещают в термостат при температуре 37°, на среде с глюкозой — при 43° на 18—24 часа. Чашки на общее бактериальное обсеменение вынимают и подсчитывают количество выросших колоний.
Для сырого молока нормы коли-титра не существует.
Четвертый день. Проводится учет результатов. Образование кислоты и газа в среде с глюкозой и отсутствие роста на цитратной среде Козера является основанием для окончательного ответа на присутствие бактерий группы кишечной палочки (цитрат отрицательной разновидности), которые учитывают при определении коли- титра. Не учитывают разновидности кишечной палочки, дающие рост на цитратной среде Козера, изменяя ее при этом из оливково-зеленого цвета в васильковый.
Ответ для пастеризованного молока, сливок и молочнокислых продуктов (кефир, кумыс, ацидофильное молоко, простокваша) определяют по табл. 32.
Таблица 32
Коли-титр пастеризованного молока, сливок, мороженого, ацидофильного молока, простокваши

 

Количество пробирок с засеваемым материалом

Результат

1 мл

1 мл

1 мл

0,1 мл

ОД мл

0,1 мл

Брожение

 

 

 

 

 

>3 мл

»

+

3 »

»

+

+

+

0,3 »

»

 

+

+

+

+

+

<0,3 »

»

+

+

+

+

+

<0,3

»

+

+

+

+

+

<0,3 »

Если ни в одной пробирке не обнаружено газообразования, то считают коли-титр более 3 мл.
Если в одной пробирке с 1 мл продукта обнаружены признаки брожения, то считают коли-титр 3 мл.
Если брожение обнаружено более чем в одной пробирке с 1 мл продукта или хотя бы в одной из пробирок с 0,1 мл, то считают коли-титр 0,3 мл.
Если брожение обнаружено во всех пробирках от обоих разведений или в 3 пробирках одного (любого) разведения и в 2 пробирках другого, то считают коли- титр менее 0,3 мл.
Для мороженого, молочных коктейлей ответ определяют, руководствуясь следующим:

  1. Если ни в одной пробирке из 3 засеянных по 0,1 объема не обнаружено газообразования, то считают коли-титр более 0,3 мл.
  2. Если в одной пробирке с 0,1 продукта обнаружены признаки брожения, то считают коли-титр 0,3.
  3. Если брожение обнаружено в двух или трех пробирках, то коли-титр считают менее 0,3.

Коли-титр для остальных продуктов устанавливают, руководствуясь табл. 33.
Таблица 33
Коли-титр масла, сыра, брынзы

а)   если ни в одной пробирке не обнаружено признаков брожения, то коли-титр считают 1,1;
б)   если брожение обнаружено во всех пробирках, то коли-титр считают <0,0001, то есть менее наименьшего засеянного объема;
в)  если брожение обнаружено только в первой пробирке, то коли-титр равен 1,1 (общему весу продукта во всех засеянных объемах);
г)  если брожение обнаружено в первых двух пробирках, то коли-титр равен 0,1;
д)  если брожение обнаружено в нескольких пробирках, то за коли-титр принимают количество продукта в наибольшем разведении, давшем рост кишечной палочки.
Среда Козера. К 1 литру дистиллированной воды прибавляют: 1,5 г фосфорно-кислого натрия-аммония; 1 г — фосфорно-кислого однозамещенного калия; 0,2 г — сернокислого магния; 2,5—3 г — лимоннокислого натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере в течение 15 минут.
Перед посевом к нему добавляют 10 мл 0,5% спиртового раствора бромтимолового синего и разливают в стерильные пробирки.
Среда приобретает васильковый цвет.

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОЧНЫХ СМЕСЕЙ ИЗ ДЕТСКИХ МОЛОЧНЫХ КУХОНЬ

Детские молочные кухни выпускают для детей грудного возраста молочные смеси (№ 1, 2, 3, КРС2, КРС4 и т. д.) и молочнокислые продукты (кефир, простокваша, ацидофильное молоко).
Молочные смеси доставляют в лабораторию в посуде, приготовленной к выдаче. Для определения коли-титра засевают на среду Кесслера в количестве 10; 1; 0,1 и 0,01 мл. На общую бактериальную обсемененность засевают 1 мл из разведения 1 : 10. Выращивают 2 суток при 37°.
Результат исследования определяют по табл. 31 для объемов 10; 1; 0,1 и 0,01 мл.
Общую обсемененность кефира не определяют, так как в кефире и других молочнокислых продуктах имеется производственная молочнокислая микрофлора (молочнокислые стрептококки, грибы). Для определения качественного. состава микрофлоры в молочнокислых продуктах готовят препараты, фиксируют смесью Никифорова и окрашивают водной синью.
В хорошо приготовленном кефире при микроскопическом изучении окрашенного мазка должны быть обнаружены молочнокислые стрептококки, дрожжи в достаточном количестве. Отсутствие дрожжей в мазках показывает, что кефир не соответствует своему назначению.

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОКА НА БРУЦЕЛЛЫ

Бактериологическое исследование. Молока в количестве 10 мл центрифугируют. Из сливок и осадка готовят препарат и делают посев (0,1—0,2 мл) на печеночный агар или на печеночный бульон. Препарат окрашивают по методу Козловского и микроскопируют. Можно выращивать бруцелл также на мясо-пептонном агаре или бульоне (pH 6,8—7,0) с 1% глюкозы и 1 : 100 000 генцианвиолета.
Хотя культуры бруцелл из продуктов удается получить и в обычных аэробных условиях, все же следует провести одновременно посев и в условиях повышенного содержания углекислоты.

Исследование молока серологическим методом. Обнаружить антитела (агглютинины) в молоке можно следующим способом. В пробирку диаметром 0,5—0,8 см вносят 1 мл цельного свежего молока и добавляют 0,05 мл (1 каплю) антигена, представляющего собой взвесь убитых и окрашенных гематоксилином клеток бруцелл. Пробирку тщательно встряхивают до появления равномерной голубоватой окраски молока, помещают на водяную баню или в термостат при 37° на 30—40 минут и учитывают результат реакции. При отсутствии термостата пробирку можно выдержать при комнатной температуре в течение 75—90 минут.
Положительная реакция характеризуется появлением слоя сливок — кольца синего цвета, состоящего из окрашенных склеившихся бактерий. Столбик молока в других его частях делается более светлым.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИЗДЕЛИЙ ИЗ КРЕМА

Бактериологическое исследование крема проводится в плановом порядке и при подозрении на пищевое отравление.
При плановом бактериологическом контроле изделия из крема отбираются по ходу технологического процесса (из кремосбивательных машин, из осадочных мешочков и из готовой продукции).
Исследованию подлежат:

  1. Масло, из которого готовился крем.
  2. Крем сливочный и заварной.

Для исследования крем берут стерильной ложкой из разных участков в количестве 20—50 г и помещают в стерильные банки, обвязанные двумя слоями бумаги. Перед исследованием крем растапливают на водяной бане при 45° и тщательно перемешивают.
Кремовые изделия исследуют: 1) на общую микробную обсемененность, 2) на коли-титр, 3) на наличие стафилококка.
Для определения общего количества микроорганизмов на чашки Гейденрейха—Петри засевают по 1 мл из разведений 1 : 100 и 1 : 1000, разведение крема делают в стерильной воде, подогретой до 45°. Чашки заливают расплавленным и охлажденным до 45° мясо-пептонным агаром и ставят в термостат при 37° на 24 часа.
Для определения коли-титра крем засевают в пробирку со средой Кесслера в объемах: 1 мл, 0,1 мл, 0,01 мл и 0,001 мл, каждое разведение засевают в 2 пробирки (второй ряд служит контрольным для подтверждения результатов первого ряда).

При определении коли-титра в кремовых изделиях учитывают все разновидности кишечной палочки. Коли- титр определяется так же, как в сливочном масле.
Для обнаружения стафилококков производят посев 1-2 капель расплавленного крема на чашки с желточно-солевым агаром (среда Чистовича) и в солевой бульон.    



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »