Начало >> Статьи >> Архивы >> Микробиология с техникой микробиологических исследований

Санитарно-бактериологическое исследование мяса - Микробиология с техникой микробиологических исследований

Оглавление
Микробиология с техникой микробиологических исследований
Развитие медицинской микробиологии
Морфология микроорганизмов
Строение бактерий
Бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение
Виды микроскопического исследования
Микроскопия
Окраска
Химический состав микробов
Питание и размножение микробов
Питательные среды
Подготовка посуды, приготовление физиологического раствора
Принципы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных свойств микроорганизмов
Ферменты
Дыхание микробов
Пигменты, фотогенные и ароматические вещества микроорганизмов
Распространение микробов в природе
Влияние внешних факторов на жизнедеятельность микроорганизмов
Бактериофаг
Антагонизм микробов и антибиотики
Учение об инфекции и иммунитете
Источники инфекционных заболеваний
Основные признаки инфекционного заболевания
Роль макроорганизма в инфекционном процессе
Значение внешней среды на резистентность
Формы распространения инфекционных заболеваний
Общие сведения об иммунитете
Врожденный иммунитет
Приобретенный иммунитет
Реакция преципитации
Реакция лизиса и гемолиза
Реакция связывания комплемента
Опсонины
Аллергия
Специфическая терапия и профилактика инфекционных заболеваний
Генетика микроорганизмов
Стафилококки
Стрептококки
Пневмококки
Менингококки
Гонококки
Палочка сине-зеленого гноя, вульгарный протей
Бактерии коклюша и параклюша
Клебсиеллы
Бактерии кишечно-тифозной группы
Кишечная палочка
Возбудители брюшного тифа и паратифов
Сальмонеллы
Дизентерийные бактерии
Холерный вибрион
Возбудитель дифтерии
Возбудитель туберкулеза
Возбудитель проказы, пастереллы и бруцеллы
Возбудитель чумы
Возбудитель туляремии
Бруцеллы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель сапа
Возбудитель столбняка
Возбудитель газовой гангрены
Возбудитель ботулизма
Спирохета сифилиса
Спирохета возвратного тифа
Спирохета Венсана
Лептоспиры
Возбудитель содоку
Риккетсии
Группа сыпного тифа
Группа пятнистых лихорадок, цуцугамуши, риккетсиозов
Вирусы
Вирус гриппа
Парамиксовирусы
Рабдовирусы
Энтеровирусы
Арбовирусы
Аденовирусы
Герпесвирусы
Вирус гепатита
Паповавирусы
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Санитарно-бактериологическое исследование воды и пищевых продуктов на обнаружение холерного вибриона
Санитарно-бактериологическое исследование напитков
Санитарно-бактериологическое исследование молока
Санитарно-бактериологическое исследование мяса
Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка
Исследование микрофлоры воздуха
Санитарно-бактериологическое исследование почвы
Бактериологическое исследование кала на бактерионосительство
Бактериологическое исследование смывов с рук, инструментария, инвентаря
Собирание и пересылка материала для исследования

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
Мясо и мясные продукты подвергают бактериологическому исследованию во всех случаях, когда предполагается обсеменение их возбудителями инфекций, патогенными для человека, или же микрофлорой, вызывающей порчу продуктов. Готовая продукция также исследуется в порядке санитарно-бактериологического контроля.
Взятие проб. Мясо. Пробы берут стерильным ножом из разных частей туши. Каждую пробу мяса или органов в количестве 200 г заворачивают в чистую пергаментную бумагу, на которой ставят номер. Несколько проб, взятых от одной туши, упаковывают в бумажный пакет, пломбируют и направляют в лабораторию. В сопроводительном документе обозначают дату и место взятия проб от животного, номер туши, причину и цель исследования. Все эти сведения заверяются подписью отправителя.
Колбасные изделия. Колбасные изделия подвергаются бактериологическому исследованию в случаях обнаружения фактов использования в производстве подозрительного в отношении доброкачественности мясного сырья, нарушения санитарно-гигиенического режима производственных процессов, получения сомнительных данных при органолептической оценке продукта. Отобранные образцы завертывают в пергаментную или оберточную бумагу (каждый из них нумеруется в отдельности), упаковывают в один пакет, опломбировывают и направляют в лабораторию, приложив акт об изъятии образцов, в котором указывается место и дата отбора и изготовления пробы, название продукта, его сорт, причина и цель исследования.
Методика исследования мясных продуктов. Первый день. Доставленные в лабораторию образцы мяса и мясных продуктов регистрируют в журнале, на образцах проставляют соответствующие регистрационные номера, раскладывают по порядку и приступают к исследованию. Прежде всего делают мазок-отпечаток на предметном стекле и красят по Граму для получения ориентировочных данных о степени обсемененности и характере микрофлоры. Стерильным ножом делают разрез куска мяса и прикладывают к нему предметное стекло, обезжиренное в смеси Никифорова. Полученный отпечаток просушивают на воздухе, фиксируют спиртом или смесью Никифорова и окрашивают по Граму. Просматривают под микроскопом 5—10 полей зрения, подсчитывают кокки и палочки и выводят среднее арифметическое.
Для исследования можно применить метод Фельдман и Лишанской, который заключается в следующем. Кусок мяса или колбасы обливают спиртом и обжигают. Стерильным ножом делают разрез куска через всю толщу. Из середины и из мест, расположенных ближе к поверхности до 0,5 см, берут навеску 10—20 г, которую измельчают стерильными ножницами. Тщательно растирают в ступке с равным количеством физиологического раствора, ставят ступку в наклонном положении на 5—10 минут, кашицу плотно отжимают в одну сторону, а жидкость в количестве 0,1 и 0,05 мл набирают микропипеткой и распределяют на двух тщательно обезжиренных предметных стеклах, па поверхности которых карандашом по стеклу обводят квадрат 2X2 см, для чего под стекло подкладывают начерченный на бумаге квадрат соответствующих размеров. Препарат высушивают в термостате, фиксируют спиртом и окрашивают двойной краской (15 капель карболового фуксина, 8 капель насыщенного спиртового раствора метиленовой сини на 20 мл дистиллированной воды).
Мазки красят в течение 20—30 секунд, осторожно смывают водой, высушивают и микроскопируют. При этом отчетливо видны синие бактерии на розовом фоне, ясно дифференцированные от обрывков ткани. Подсчитывают количество микроорганизмов в 10—20 полях зрения по краям и в середине препарата и выводят среднее арифметическое (количество микробов в одном поле зрения).
Для бактериологического исследования берут эту же жидкость и производят посевы на твердые цветные среды шпателем.
Лучше всего брать 2—3 чашки с разными цветными средами (Эндо, Левина и бактоагар Ж), одновременно засевая в среду обогащения (среда Мюллера, Кауфмана, Киллиана, в крайнем случае простой бульон). Во флакон со средой в 40—100 мл засевают 8—10 г исследуемого материала. Производят также посев по Шукевичу на присутствие Bact. proteus vulgaris. Для этого из приготовленной эмульсии пастеровской пипеткой набирают 1—2 капли исследуемого материала и, не прикасаясь к поверхности скошенного агара, засевают в конденсационную воду (перед посевом поверхность скошенного агара увлажняют конденсационной водой, приведя пробирку в горизонтальное положение). Все эти посевы ставят в термостат при 37° на 18—24 часа.
Второй  день. Чашки просматривают с лупой и, если обнаруживают подозрительные колонии из группы сальмонелл, берут не менее 5 колоний (колонии небольние, круглые, прозрачные, бесцветные на среде Эндо, Левина, бактоагаре Ж). Каждую подозрительную колонию пересевают в конденсационную воду скошенного агара и ставят в термостат на 2—3 часа. В конце рабочего дня или через 3 часа из конденсационной воды делают рассев по поверхности скошенного агара и на пестрый ряд: в среды с лактозой, сахарозой, глюкозой, маннитом, мальтозой, в бульон Хоттингера, в полужидкий агар. Пробирки помещают в термостат на 12—15 часов при 37°. С остатком колонии делают агглютинацию на стекле с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными групповыми и монорецепторными сыворотками. Для контроля берут каплю физиологического раствора, в которую вносят остаток колонии. В случае положительной реакции через 0,5—1 минуту наступает агглютинация, образуются хлопья и жидкость просветляется. Особенно хорошо это видно при легком покачивании стекла; контроль остается равномерно мутным. После этого контрольную каплю высушивают, фиксируют на огне и красят по Граму для того, чтобы убедиться в наличии грамотрицательных палочек. Все это дает возможность ориентировочно заподозрить присутствие сальмонелл.
В пробирке с посевом по Шукевичу присутствие Bact. proteus характеризуется сплошным нежным вуалеобразным ростом по поверхности агара, состоящим из грамотрицательных палочек.
Третий день. Посевы просматривают и учитывают таким образом: 1) мазок по Граму убеждает в чистоте культуры; 2) по биохимическим свойствам (пробу на индол не производят, так как он может не образоваться за это время и пробирку с посевом оставляют еще на сутки).
Если результаты пестрого ряда и агглютинации совпадают, то делают окончательный вывод о заражении мяса (мясного продукта или колбасы) сальмонеллами.
При положительной реакции агглютинации с несколькими сыворотками (групповая агглютинация) точное определение типа микроба может быть достигнуто дополнительными исследованиями (посев на чашку с простым агаром для валообразования, посев и среды Гисса с арабинозой, ксилозой и дульцитом, на среду Биттера с рамнозой, на среду Штерна) и обязательной реакцией агглютинации с монорецепторными сыворотками.
Исследование колбасных изделий производится так же, как и мяса, но с дополнительным исследованием на количество колоний. Батон колбасы обжигают тампоном со спиртом, после чего из периферической части и из центра стерильно вырезают небольшие кусочки, помещают в стерильный бюкс или на кусочек стерильной бумаги и взвешивают (1—2 г). Затем каждую пробу отдельно переносят в стерильную ступку и растирают со стерильным песком, добавляя 10—20 мл физиологического раствора, чтобы получилось разведение 1 : 10. Дают отстояться и из верхнего слоя жидкости берут 0,2 мл, выливают в стерильную чашку Гейденрейха—Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45° агаром (для определения общего количества колоний в 1 г колбасы).
Чашки ставят в термостат при 37° на 48 часов, после чего подсчитывают общее количество колоний, для этого подсчитанное количество колоний умножают на 5 и на степень разведения материала. 0,1 мл этой же жидкости наносят на поверхность среды Эндо или Левина (для обнаружения Е. coli и сальмонелл).
Чашки ставят в термостат при 37° на 24 часа, после чего изучают колонии, подозрительные на рост бактерий группы кишечной палочки и сальмонелл.
Присутствие протея определяется по методу Шукевича. Производят посев 0,1 мл взвеси или небольшого кусочка продукта в конденсационную воду скошенного мясо-пептонного агара. Посев помещают в термостат при 37° на 18—24 часа.
Присутствие анаэробов определяется путем посева 1-3 мл взвеси в печеночный бульон, предварительно прокипяченный и быстро охлажденный до комнатной температуры. После посева одну из пробирок вновь прогревают при температуре 80° в течение 20 минут. Посевы помещают в термостат при 37° на 5 суток.
При подозрении на наличие анаэробных микробов (помутнение, газообразование) производят высев в расплавленный и охлажденный до 50° мясо-пептонный агар (с 2% глюкозы), налитый на 2/3 высоты пробирки. Рост колоний в глубине этой среды и газообразование говорит о наличии анаэробной микрофлоры.

ИССЛЕДОВАНИЕ НА НАЛИЧИЕ ВАС. ANTHRACIS

Взятие материала производится врачом-бактериологом немедленно после извещения. При соблюдении всех мер предосторожности материал доставляют в лабораторию. Для исследования берут отечные части туш, лимфатические узлы, паренхиматозные органы и трубчатую кость. От павших и невскрытых животных берут ухо, место разреза прижигают. В лаборатории из всех подозрительных проб делают 5—10 мазков, подсушивают, фиксируют и окрашивают по Граму, фуксином, синью, по Романовскому.
Для бактериологического исследования производят посев из подозрительного материала на мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар. Посевы выращивают при 37°. Если материал сильно загрязнен, то делают посев в две пробирки с бульоном и одну из них прогревают на водяной бане при 80° в течение 20 минут.

ИССЛЕДОВАНИЕ НА НАЛИЧИЕ CL. BOTULINUM

Стерильно взятые кусочки мясопродуктов (мышцы, печень, мозг) засевают в две пробирки со средой Китта—Тароцци, предварительно прогретые на водяной бане 15—20 минут для удаления воздуха и быстро охлажденные в воде. Одну из засеянных пробирок прогревают при 80° в течение 20 минут. Выращивают до 5 суток при 37°. Присутствие грамположительных ракеткообразных палочек в случае пророста среды дает право производить дальнейшее исследование и ставить биологическую пробу (см. часть III, стр. 351).
Рыбу и рыбные изделия исследуют так же, как и мясо.
При возникновении токсикоинфекции исследуют все продукты, находившиеся в употреблении в течение последних 2 суток (завтраки, обеды, ужины). Мясные, рыбные продукты исследуют по вышеописанному методу. Первые блюда (борщ, рассольник, суп и др.) перед посевом проверяют на реакцию (лакмусовой бумажкой). Если реакция кислая, их подщелачивают 10% раствором соды до нейтральной или слабо щелочной реакции и производят посевы по указанной схеме.



 
« Методы клинического исследования при инфекционных болезнях   Микроларингоскопия и эндоларингеальная микрохирургия »