Начало >> Статьи >> Архивы >> Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Высокоэффективная жидкостная хроматография - Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Оглавление
Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация
Введение
Фармакологическая активность и применение в медицинской практике
Лекарственное растительное сырье, используемое для приготовления
Теоретические основы процесса экстрагирования
Факторы, влияющие на процесс экстрагирования
Приготовление экстрагентов
Технологические свойства измельченного растительного материала
Методы экстрагирования и используемое оборудование
Непрерывные метопы экстракции
Интенсивные методы экстракции
Очистка извлечений
Общая характеристика современных физико-химических методов анализа и стандартизации
Спектроскопия в УФ и видимой областях спектра
Планарная хроматография
Газовая хроматография
Хромато-масс-спектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Капиллярный электрофорез
Физико-химические методы стандартизации
Методы стандартизации жидких спиртосодержащих фитопрепаратов
Характеристика разделов Подлинность и Количественное определение» нормативной документации
Развитие методов стандартизации эликсиров и бальзамов
Способы подготовки проб
Техника выполнения аналитических определении и способы интерпретации результатов
Газовая хроматография и хромато-масс-спектрометрия
Проекты общих фармакопейных статей
Проект общей фармакопейной статьи Эликсиры
Стандартные образцы и их применение для оценки качества лекарственных средств
Применение стандартных образцов при оценке качества
Анализ производства настоек, экстрактов, эликсиров
Слисок литературы

Данный хроматографический метод предполагает разделение компонентов анализируемых образцов в потоке подвижной фазы (элюента, характеристиками которого являются состав, ионная сила, pH и другие показатели) за счет неодинаковых взаимодействии с сорбентами (обычно поверхностно-модифицированные силикагели). Усложнение механизма разделения и увеличение числа варьируемых параметров процесса в сочетании с меньшей, чем в газовой хроматографии, эффективностью хроматографических колонок приводит к тому, что выбор и оптимизация условий разделения в ВЭЖХ оказываются более сложными, а роль опыта и интуиции специалистов оказываются выше. Поскольку варьирование эффективности применяемых колонок в ВЭЖХ если не невозможно, то сильно ограничено, и разделения многих смесей известного или предполагаемого состава (типичный вариант многих аналитических задач в современной ВЭЖХ) приходится добиваться за счет вариаций селективности хроматографических систем (модификации подвижной фазы или сорбента, в том числе в динамическом режиме). Тем не менее около 90 % всех анализов в реальной практике ВЭЖХ могут быть выполнены в условиях. достаточно близких к стандартным, и лишь небольшая их часть требует специальной оптимизации режимов разделения.
Набор экспериментальных параметров, необходимых для задания режима ВЗЖХ-анализа, как минимум, включает (Энгельгардт X., 1980; Practice..., 1986; Стыскин Е. Л. и др.. 1986);

  1. размеры хроматографической колонки и тип используемого в ней сорбента (гидрофильный или гидрофобный, что определяет так называемые прямо- или обращенно-фазный режим разделения). Указание размера частиц сорбента и фирмы-изготовителя считается обязательным;
  2. состав элюента;
  3. характер элюирования (изократическое или градиентное);
  4. тип детектора.

В ВЭЖХ не существует столь же универсальных по отношению к веществам любой химической природы детекторов, как в газовой хроматографии, но чаще всего используемыми являются различные модификации спектрофотометров с рабочими диапазонами длин волн от 190 до 700-900 нм.
Температура хроматографической системы влияет на абсолютные параметры удерживания в меньшей степени, чем в ГЖХ, вследствие чего многие модели даже современных приборов не оснащены термостатами колонок. Вместе с тем подобная невоспроизводимость параметров удерживания осложняет не только идентификацию, а даже простое соотнесение сигналов одних и тех же соединений на разных хроматограммах, и ее по возможности следует избегать.
УФ-спектрометр, в отличие от наиболее распространенных газохроматографических детекторов (потоковые, деструктивные), относится к типу концентрационных недеструктивных детекторов. Это означает, что площади пиков определяемых соединении зависят не только от количества вещества в пробе и природы хромофоров в молекуле, но и от скорости потока элюента (увеличиваются при уменьшении расхода). Такая особенность предъявляет повышенные требования к качеству и надежности оборудования.
Формы представления параметров удерживания в ВЭЖХ не отличаются от используемых в газовой хроматографии. Относительно часто встречается их выражение в виде коэффициентов емкости к (capacity coefficients) или их логарифмов (lg к):

Индексы удерживания (ИУ) в обращенно-фазовой ВЭЖХ относятся к параметрам, обладающим наибольшей межлабораторной воспроизводимостью, но, к сожалению, еще не получили достаточно широкого распространения к настоящему времени (Retention..., 1995). В качестве реперных соединений в этом методе чаще всего используют Н-алкипфенилкетоны C6H5COCnH2n+1. Однако соответствующие значения ИУ уже определены для многих компонентов эфирных масел и экстрактивных веществ растений. Естественно, все такие соединения относятся к ограниченному числу классов веществ, содержащих необходимые хромофоры в молекулах, обеспечивающие поглощение в УФ или видимой областях спектра. Начато формирование баз данных по ИУ флавоноидов (Косман В. М., Зенкевич И. Г., 1997), кумаринов [Косман В. М. и др. 1997] и других классов природных веществ. В таблице 10 в качестве примера приведены значения ИУ некоторых соединений этого типа, представленные в виде: <RI> ± sRI, где sR1 — стандартные отклонения, характеризующие межлабораторную воспроизводимость данных.
Так же как и в газовой хроматографии, совпадение одних лишь значений ИУ со справочными данными не может считаться достаточным основанием для надежной идентификации, и требуется применение дополнительных аналитических параметров. Для этого вполне могут быть использованы возможности широко применяемых УФ- детекторов. Во-первых, так называемые диодные матрицы (diode array) позволяют регистрировать полные спектры каждого из разделенных компонентов (по точкам с шагам в 2 нм) (Хубер Л., 1993).
Таблица 70
Индексы удерживания в обращенно-фазовой ВЭЖХ и относительные оптические плотности некоторых природных соединений


Соединение

Мол. масса

Индекс
удерживания
(ВЭЖХ)

А [254/220]

Бензойная кислота (Н-форма)

122

633±27

0,16±0.07

Карвакрол

150

1040+8

0,15±0,03

Тимол

150

1027±10

0,06±0,02

Метипсалииилат

150

934±9

0,25 + 0,02

Ванилин

152

702+22

-

Эвгенол

164

910±14

0,03±0,01

Иэоэвгенол

164

932±16

1,6+0,4

Герниарин

176

851±26

0,26+0,03

Кофеин

194

633±27

0,50+0,00

Ализарин

240

940±12

3,0+0,7

Совпадение таких спектров позволяет однозначно решить проблему идентичности компонентов образцов с предполагаемыми стандарта- ми, но для идентификации с помощью баз УФ-спектральных данных такой подход используют редко. Причиной этого считается зависимость УФ-спектров от состава растворителя, который в практике ВЭЖХ-анализа обычно подбирают для достижения оптимального разделения, но не для обеспечения наилучшей воспроизводимости спектральных характеристик аналитов.
Однако существует иной способ представления и интерпретации УФ-спектральной информации, заключающийся в замене полных спектров одномерными параметрами — отношениями оптических платностей при различных фиксированных длинах волн [Зенкевич И. Г.. Косман В. М., 1997]:

Такие параметры могут рассматриваться и как характеристики индивидуальных соединений (см. таблицу 9, стр. 117), и как групповые инварианты (для выявления природы хромофоров в молекулах аналитов, что позволяет устанавливать класс веществ и опознавать еще не охарактеризованные в настоящее время соединения]. Например, разные группы флавоноидов и их аналогов статистически значимо отличаются по значениям относительных оптических плотностей (Косман В. М., Зенкевич И. Г., 1997а, (таблица 11).

Таблица 11
Относительная оптическая платность флавоноидов
и их аналогов

Методы количественного анализа, используемые в ВЭЖХ. принципиально не отличаются от применяемых в других видах хроматографии (см. таблицу 9, стр. 117). Это обусловлено тем фактом, что выбор метода влияет в первую очередь на характер предварительных операций [приготовление градуировочных смесей, введение стандарта непосредственно в образец и т. д.) и не зависит от природы процесса разделения и принципов детектирования. В соответствии с этим выводом количественные результаты, полученные с помощью ВЭЖХ с УФ-детектированием, не зависят от выбранной длины волны (если определяемые соединения известны, ее обычно выбирают в области характеристичных максимумов поглощения, но это условие не является обязательным]. Такой редко применяемый в аналитической практике тест представляется безусловно полезным как важный критерий подтверждения индивидуальности хроматографических пиков определяемых компонентов.



 
« Наследственные факторы в формировании задержки полового развития у мальчиков   Неврологические проявления остеохондроза позвоночника »