Начало >> Статьи >> Архивы >> Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Характеристика разделов Подлинность и Количественное определение» нормативной документации - Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Оглавление
Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация
Введение
Фармакологическая активность и применение в медицинской практике
Лекарственное растительное сырье, используемое для приготовления
Теоретические основы процесса экстрагирования
Факторы, влияющие на процесс экстрагирования
Приготовление экстрагентов
Технологические свойства измельченного растительного материала
Методы экстрагирования и используемое оборудование
Непрерывные метопы экстракции
Интенсивные методы экстракции
Очистка извлечений
Общая характеристика современных физико-химических методов анализа и стандартизации
Спектроскопия в УФ и видимой областях спектра
Планарная хроматография
Газовая хроматография
Хромато-масс-спектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Капиллярный электрофорез
Физико-химические методы стандартизации
Методы стандартизации жидких спиртосодержащих фитопрепаратов
Характеристика разделов Подлинность и Количественное определение» нормативной документации
Развитие методов стандартизации эликсиров и бальзамов
Способы подготовки проб
Техника выполнения аналитических определении и способы интерпретации результатов
Газовая хроматография и хромато-масс-спектрометрия
Проекты общих фармакопейных статей
Проект общей фармакопейной статьи Эликсиры
Стандартные образцы и их применение для оценки качества лекарственных средств
Применение стандартных образцов при оценке качества
Анализ производства настоек, экстрактов, эликсиров
Слисок литературы

ХАРАКТЕРИСТИКА РАЗДЕЛОВ «ПОДЛИННОСТЬ»
И «КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ» НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ НА НАСТОЙКИ И ЖИДКИЕ ЭКСТРАКТЫ
Настоящий раздел включает более подробное рассмотрение аналитических методов, рекомендуемых в разделах «Подлинность» и «Количественное определение» в отечественных частных фармакопейных статьях 1972-1999 гг. на наиболее «традиционные» препараты класса жидких спиртосодержащих фитопрепрепаратов — настойки и жидкие экстракты. Сравнительная характеристика методов контроля подлинности таких препаратов и количественного определения основных действующих компонентов или их групп представляет значительный интерес не столько с критических позиций, сколько с целью проследить эволюцию самих представлении о выборе подходов к стандартизации сложных смесей экстрактивных веществ растительного происхождения. Подобные смеси отличаются лишь частично известным составом, а содержание отдельных компонентов может варьироваться в заметных пределах. Именно эта особенность представляет главную объективную сложность их стандартизации. Однако, помимо данной объективной причины, на конкретный выбор способов контроля подлинности и количественных определений существенное влияние оказывает степень разработанности тех или иных методов химического и физико-химического анализа. Если говорить о приборных методах, то необходимо принимать во внимание доступность, стоимость и надежность эксплуатации необходимого оборудования.
Таким образом, содержание аналитических разделов действующих в настоящее время в РФ частных фармакопейных статей на спиртосодержащие фитопрепараты во многих случаях определяется не только пожеланиями авторов, но, скорее, диктуется необходимостью выбора из достаточно ограниченного числа практических возможностей, доступных в конкретных лабораториях. С другой стороны, как уже было отмечено, это же означает актуальную необходимость расширения ассортимента привлекаемых аналитических методов и совершенствования приемов идентификации и количественного определения не только компонентов настоек, экстрактов и эликсиров, но и любых других лекарственных препаратов. Более того, обобщая рассматриваемую задачу, можно сказать, что проблемы повышения надежности и однозначности идентификации, а также повышения точности и экспрессности количественных определений относятся к важнейшим в современной аналитической химии органических соединении.
Две аналитические задачи, рассматриваемые в данном разделе [подтверждение подлинности и количественный анализ], требуют некоторых предварительных комментариев. Операцию подтверждения подлинности следует рассматривать как принятый в химии эквивалент понятия «идентификация». Под идентификацией каких-либо неизвестных объектов обычно понимают нахождение их соответствия с ранее охарактеризованными представителями некоторого множества по наборам экспериментально измеряемых характеристик. Объекты идентификации могут быть достаточно разнородными и включать индивидуальные химические соединения, многокомпонентные смеси и т. д. вплоть до заболеваний (в медицине), образцов почерка и личностей (в криминалистике). Количество ранее охарактеризованных объектов, которое подлежит рассмотрению при решении конкретных задач, зависит от их формулировки и отнесения к одному из двух принципиальных типов — разведочного (prospecting) и подтверждающего (confirmational) анализа (Зенкевич И. Г., 1993; Зенкевич И. Г. и др., 1995). В первом случае необходимо проводить сравнение характеристик исследуемого объекта с параметрами всего теоретически возможного многообразия объектов, число которых может оказаться неограниченным. Второй же случай существенно проще, так как некоторые сведения о природе образцов, веществ или соединений уже априорна известны и, следовательно, число потенциальных объектов сравнения ограничено. Именно этот вариант отражает принципы организации контроля подлинности фармацевтических препаратов, т. е. компонентный состав смесей и структуры отдельных соединений обычно не требуют полного доказательства. Применительно к рассматриваемой группе лекарственных препаратов это означает, что во многих случаях вполне достаточно использования даже простейших тестов, цветных и специфических реакций и даже органолептических показателей, которые позволяют надежно отличать настойки и жидкие экстракты друг от друга. Задача становится более сложной только в тех (пока еще относительно немногочисленных) случаях, когда жидкие спиртосодержащие фитопрепараты получены из нескольких видов растительного сырья или содержат искусственно введенные добавки. Здесь может потребоваться подтверждение наличия всех составляющих таких комплексных препаратов.
Обсуждая вопросы идентификации, нельзя не затронуть проблему ошибочных результатов. В соответствии с принятой в аналитической химии общей классификацией такие ошибки принято подразделять на ошибки 1 -го рода и 2-го рода. Эквивалентами этих терминов в медицинской диагностике являются ложноотрицательные и ложно- положительные результаты соответственно.
Ошибки 1-го рода— невозможность опознания известных объектов (наиболее часто встречается именно в подтверждающем анализе) — устраняются расширением допусков на интервалы вариаций используемых признаков или аналитических параметров. Например, для цветной реакции, для которой отмечено образование лимонно-желтой окраски, во избежание ошибочного отклонения правильных результатов, может быть, следует «загрубить» эту формулировку и отметить «все оттенки желтого цвета».
Ошибки 2-го рода (более типичны для разведочных определений) означают наверное отождествление неизвестных объектов с ранее охарактеризованными и обусловлены формальным совладением выбранных признаков. Наиболее надежный способ их устраивания — увеличение числа параметров сравнения.
Особенность разделов «Количественное определение» в НД на спиртосодержащие фитопрепараты состоит в том, что анализ смесей экстрактивных веществ растений требует предварительного выбора наиболее характеристичных и представительных компонентов или групп веществ для их последующего количественного определения.
Большой объем фактических данных, содержащийся в частных фармакопейных статьях на настойки и жидкие экстракты, действующих в настоящее время в Российской Федерации, не может быть наглядно представлен в простейшей описательной форме. Для удобства восприятия информации все методы подтверждения подлинности и количественных определений индивидуальных действующих компонентов или их групп представлены в настоящем разделе в виде таблиц.
Таблица 14 содержит краткую сводку основных методов стандартизации (подтверждения подлинности) и количественного определения некоторых компонентов настоек по данным 44 частных фармакопейных статей 1972-1999 гг. Аналогичная таблица 15 включает соответствующие данные для 23 жидких экстрактов (фармакопейные статьи 1980-1999 гг.). Однако, поскольку даже и такая сжатая форма представления информации все еще не позволяет эффективно сопоставлять методы подтверждения подлинности жидких спиртосодержащих фитопрепаратов, в таблице 16 приведено только перечисление рекомендуемых методов и тестов уже без указания конкретных фармакопейных статей. Все методы подтверждения подлинности в ней ранжированы по убыванию частоты их использования в НД. Аналогичная таблица 17 отражает результаты подобного ранжирования частоты использования различных методов количественного анализа.

Таблица 14
Важнейшие методы стандартизации (подтверждений подлинности и количественного определений действующих компонентов) настоек (по данным 44 частных фармакопейных статей 1972-1999 гг.)


Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Листьев барбариса (42-6 46-72]

Характ. запах; осадок с кремне- вольфрамовой кислотой или реактивом Шерера (реакция на алкалоиды)

Содержание алкалоидов (гравиметрически в форме гидрохлоридов)

Плодов колоцинта (42-594-72)

Цв. р. сухого остатка с серной кислотой (розовое окраш.)

Нет

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Листьев копытня
европейского
(42-592-72)

Цв. р. с хлоридом железа (III)*: осадок с ацетатом свинца; осадок с гидроксидом бария; тесты на пенообразование

Нет

Листьев лаконоса
американского
(42-593-72)

Цв. р. с дифениламином в прис. серной кислоты (синее окраш.); тесты на пенообразование

Нет

Ликоподия
(42-557-72)

Цв. р. с хлоридом железа (III)

Нет

Плодов лимонника (42-117-72)

Характ. запах; цв. пятно на фильтровальной бумаге

Содержание лимонной кислоты (титрование); содержание жирных и эфирных масел (гравиметрически после экстракции эфиром)

Листьев омелы белой
(42-590-72)

Цв. р. с фуксинсернистой кислотой (красн. окраш.); тесты на пенообразование

Нет

Травы руты
душистой
(42-591-72)

Р. с цинком в прис. соляной кислоты (розовое или красное окрашивание — рутин); р. с магнием в прис. соляной кислоты (красное окраш.— флавоноиды)

Нет

Стеркулии
(42-354-72)

Образ, мути при действ, фосфорновольфрамовой кислоты (тест на азотсодержащие ввшества)

Нет

Стручкового перца (42-108-72)

Зеленое окраш. при действ, метаванадата аммония (р. на капсаицин)

Нет

Листьев
токсикодендрона
(42-589-72)

Цв. р. с хлоридом железа (III); р. с цинком в прис. соляной кислоты (красное окраш.)

Титрование окисляемых веществ раствором парманганата калия

Багульника
(42-880-74)

Цв. р. с азотной кислотой (красное окраш.); цв. р. с хлоридом железа (III)

Нет

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Валерианы, полыни, мяты перечной, красавки [42-1674-81]

Цв. р. с азотной кислотой в прис. ацетона (фиолетовое окраш.— наст, красавки): цв. р. с n-димв- типаминобензальдегидом в прис. серной кислоты; цв. р. с серной кислотой [коричнево-красное окраш.— наст, полыни); характ. запах — наст, валерианы

Колориметрически (450 нм) — сумма алкалоидов красавки в пересчете на атропин (основание)

Красавки, ландыша, валерианы: добавка ментола
(0.2 г на 25 мл) (42-1715-81)

Цв. р. с серной кислотой (ментол); цв. р. с азотной кислотой в прис. ацетона (фиолетовое окраш.— атропин); цв. р. в прис. с n-диметиламино- бензальдегидом серной кислоты (розовое окраш.); характ. запах — наст, валерианы

Колориметрически (436 нм) — алкалоиды красавки в пересчете на атропин (основание): колориметрически (545 нм) — ментол в виде продукта конденсации с n-диметиламини- бензальдегидом; биол акт. (ЛЕД)

Валерианы (корневища с корнями); добавка хлоро- бутанолгидрата (2,5 г/п) (42-1831-82)

Нет

Содержание валериановой кислоты [титрование)

Женьшеня
(42-1886-02)

Опалесценция при разбавлении; образ, мути при действии танина; цо. р. с фелинговой жидк. (красный осадок — моносахариды); отриц. цв. р. с пикриновой кислотой — отсутствие алкалоидов

Нет

Заманихи
(42-1887-82)

Нет

Her

Календулы
(42-1948-В2)

Цв. р. с кони, серной кислотой

Нет

Лагохипуса
(42-1888-82)

Флуоресценция в отраженном свете

Нет

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Арники (42-2061 -83)

Цв. р. с n-диметипаминобензаль- дегидом в прис. серной кислоты (красно-бурое окраш.1; цв. р. с аммиаком (желтое окраш., флуоресценция в УФ-свете — флавоноиды); цв. р. с хлоридом железа (ill)

Сесквитерпеновые лактоны в пересчете на арнифолин (обратное титрование после щелочного гидролиза)

Валерианы, полыни, красавки (42-1973-83)

Те же цв. р.. что и в ФС 42-1674-81

Колориметрически (450 нм) — сумма алкалоидов красавки в пересчете на атропин (основание)

Красавки, валерианы; добавка ментола (0,2 г на 30 мл) (42-2052-ВЗ)

Цв. р. с азотной кислотой — наст красавки; цв. р. с n-диметил- аминобензальдегидом в прис. серной кислоты (сине-фиолетовое окраш.— ментол); характ. запах — наст, валерианы

Колориметрически (436 нм) — алкалоиды красавки в пересчете на атропин (основание); колориметрически (545 нм) — ментол в виде продукта конденсации с n-диметиламино- бензальдегидом

Подорожника
(42-2039-83)

Цв. р. с едким натром (желто- бурое окраш.— слизи); цв. р. с хлоридом железа (III)

Нет

Софоры японской (42-1314-83)

Цв. р. с хлоридом железа (111); цв, р. с цинком в прис. соляной кислоты (флавоны)

Нет

Эвкалипта (42-/41 -87)

Цв. р. с хлоридом железа (III)

Нет

«Биоженьшень» (ВФС 42-1890-89)

ТСХ тритерпеновых гликозидов; система 1-бутанол—этанол— нашатырный спирт (9:2;5), проявление серной кислотой (не менее 4 пятен с R, 0,26-0,43)

Сумма тритерпеновых гликозидов (гравиметрически)

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Семян лимонника (42-1822-90)

Характ. запах: помутнение при разбавлении водой

Суммарное содержание жирных и эфирных масел после экстракции эфиров — гравиметрически; эфирные масла после перегонки с паром и экстракции диэтиловым эфиром — гравиметрически

Настойка горькая (42-2231-91)

Цв. р. с серной кислотой (бурокрасное окраш.— абсиктин); цв. р.с хлоридом железа (III): горечь в разбавл. 1:1000 (органолептически)

Нет

Аралии
[42-1647-93)

ТСХ аралоэидов А, В, С: система хлороформ—метанол—вода (30.5:16:3,51. проявление серной кислотой (три пятна с R, 0,25, 0,36. 0,47; розовая окраска)

Среднее содержание аралозидов А. В, С (потенциометрическое титрование)

Периа стручкового (42-1259-93)

См. ФС 42-10Θ-72: ТСХ калсаи- циноидов (система не указана), проявление реактивом Гиббса** и аммиаком (синяя окраска)

Колориметрически (585 нм) — капсаи- циноиды в виде продуктов взаимодействия с реактивом Гиббса

Полыни
(42-2434-931

Цв. р. с серной кислотой [бурокрасное окраш.— гликозиды); горечь в разбавл. 1:4000 (органолептически)

Нет

Чаги
(42-659-94)

Образ, бурого осадка при действ, конц. соляной кислоты (хромогенный комплекс)

Нет

Чемерицы
(42-2142-94)

Цв. р. с серной кислотой (желто- коричневое окраш. при нагревании — красно-фиолетовое — алкалоиды чемерицы); цв. р. с соляной кислотой (желтое окраш.— вератровые алкалоиды)

Суммарное содержание алкалоидов в пересчете на протовератрин (экстракция хлороформом с последующим обратным титрованием сухого остатка)

Нестойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Зверобоя
(42-1889-95)

ТСХ флавоноидов: система этил- ацетат—муравьиная киспота-2н— соляная кислота (85:6:9), проявление раствором хлорида алюминия в этаноле, просмотр в УФ-свете (366 нм): три пятна, соответствующие кверцетину, гиперозиду и рутину; цв. р. с хлоридом алюминия в этаноле (желто-зеленое окраш.— флавоноиды); цв. р. с хлоридом железа (III)

Спектрофотометрически (415 нм) после обработки хлоридом алюминия — флавоноиды в пересчете на рутин

Стальника (42-1932-95)

Цв. р. с серной кислотой (розово- красное окраш.— оноцерин); голубая флуоресценция в УФ-свете — изофлавоноиды

Спектрофотометрически (260 нм с предварительной градуировкой по ГСО ононина) — суммарное содержание иэофлавоноиаов

«Эскулюс» (гомеопатическая) (42-2626-95)

Цв. р. с хлоридом железа (III); цв. р. с хлоридом алюминия (желтое окраш.— флавоноиды): ТСХ: система хлороформ—уксусная кислота—метанол—вода (30:16:6:4), просмотр в УФ-свете (365 нм) — две зоны желтого цвета с R- 0, 10-0,25; проявление фосфорновольфрамовой кислотой — фиолетово-коричневая зона с Rf 0,40 и 2-3 зоны серого цвета с Rf менее 0,40

Нет

«Кристина»
(12 составляющих) (42-3056-98)

УФ-спектр; максимум 278±2 нм, минимум 25Б±2 нм; ВЭЖХ-анализ (изократический режим, 50 % ацетонитрила в алюанте, УФ-детектирование при 210 нм)— алантон; изократический режим, 10% ацетонитрила в 0,5 % растворе уксусной кислоты, УФ-детектирование при 266 нм — элеутерозид В; ТСХ: система этанол— толуол—хлороформ (1:1:1),
4 варианта проявления для обнаружения компонентов различных составляющих препарата

Спектрофотометрически (396 нм) после обработки хлоридом алюминия — сумма флавоноидов в пересчете на пютеолин-7-глюкозид

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

«Панаксел»
(42-3044-98)

Цв. р. с трихлоридом сурьмы (розовое окраш.— тритерпеновые гликозиды); цв. р. с ванилином в прис. серной кислоты (темно- зеленое окраш.— то же); цв. р. с нингидрином (сине-фиолетовое окраш.— аминокислоты и белки); посторонние примеси; ТСХ; система 1-бутанол—вода (43:7)— кинетин; система изопропиловый спирт—нашатырный спирт—вода (10:1:1)— α-нафтипуксуснан кислота, просмотр в УФ-свете (отсутствие пятен с Rf, близких к R стандартов)

Спектрофотометрически (530 нм) после обработки фенил- флуороном — содержание германия: спектрафотометрически (544 нм) после обработки ванилином в прис. серной кислоты — суммарное содержание гликозидов

Пиона
уклоняющегося
(42-588-98)

Цв. р. с гидроксипамином и хлоридом железа (III) (последовательно) (фиолетовое окрашивание — иридоиды); ТСХ: система хлороформ— метанол—вода (26:14:3), просмотр в УФ-свете (254 нм. R, 9.70 — светло-фиолетовое пятно — пеонифлорин), проявление серной кислотой — сиреневое окраш.

Колориметрически (512 нм) после обработки гидроксиламином и хлоридом железа (III) (последовательно) — суммарное содержание иридоидов в пересчете на пеонифлорин.

Пустырника
(42-2278-98)

ТСХ: система хлороформ—метанол— вода (80:2:0,1), проявление реактивом Шталя, три зоны сиреневого цвета с Rf 0,4, 0.6 и 0,8 (иридоиды), цв. р. с гидроксила- мином и хлоридом железа (III) (последовательно)— сиреневое окраш. (иридоиды)

Колориметрически или спектрофотомет- рически (512 нм) после обработки гидроксипамином и хлоридом железа (III) (последовательно)— суммарное содержа ние иридоидов в пересчете на гарпагилацетат

Боярышника
(42-1652-99)

Цв. р. с магнием или цинком в прис. соляной кислоты (красно- малиновое окраш.— флавоноиды); ТСХ: система 1-бутанол—уксусная кислота—вода (9:1:0,51. проявление хлоридом алюминия — желтые пятна (флавоноиды). Данных по Rf нет, необходимы стандартные образцы

Спектрофотометрически (409 нм) после обработки хлоридом алюминия — суммарное содержание флавоноидов в пересчете на рутин

Настойка (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Прополиса
142-3736-993

Цв. р. с. ацетатом свинца — желтый осадок [полифенолы); цв. р. с магнием или цинком в прис. соляной кислоты — красное окрашивание (флавоноиды); цв. р. с хлоридом алюминия

Спектрофотометрически (290 нм) — суммарное содержание фенольных соединений

Чеснока
(42-3360-99)

Цв. р. с нингидрином (аминокислоты); цв. р. с меди сульфатом, осадок сульфида меди (органич. серосодерж. соед.): цв. р. с нитропруссидом (серосодерж. аминокислоты)

Аргентометрическое титрование серосодерж. соед. в пересчете на диаллилсульфид

Таблица 15
Важнейшие методы стандартизации (подтверждений подлинности и количественного определений действующих компонентов) жидких экстрактов и некоторых других препаратов по данным частных фармакопейных статей 1980-1933 гг. (23 статьи)

Жидкий экстракт (ФС]

Тесты на подлинность

Количественное
определение

* '
Тимьяна; добавка Глицерина [42-971 -ВО)

Цв р. с азотной кислотой в присутствии серной кислоты (вишнево-красное окраш.— тимол); цв. р. с формалином в прис. серной кислоты (красно- бурое окраш.— тимол); цв. р с сульфатом меди в присутствии едкого натра (синее окраш.— глицерин)

Йодометрическое обратное титрование — тимол

Жидкий экстракт (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Кукурузных рылец (42-1827-82)

Образование осадка грязно- зеленого цвета при действии раствора едкого натра

Лимонная кислота (титрование)

Пастушьей сумки (42-1862-82)

Нет

Нет

Валерианы
(42-20D0-83)

Цв. р. в хлоридом железа (III)

Нет

Календулы
(42-1638-86)

Цв. р. с ванилином в прис. серной кислоты (красно-бурое окрашивание — тритерпеноиды); цв. р. с магнием в прис. соляной кислоты (красно-коричневое окрашивание — флавоноиды); цв. р. с хлоридом железа (III)

Титрование окисляющихся веществ перманганатом калия

Ромашки (42-1739-86)

Цв. р. с серной кислотой (зеленое окраш.); цв. р. с магнием в прис. соляной кислоты (коричнево- красное окраш.— флавоноиды); цв. р. с хлоридом железа (III)

Титрование окисляющихся веществ перманганатом калия

Тысячелистника
(42-1637-86)

Цв. р. с серной кислотой (зеленое окраш.— сесквитерпеновые лактоны азуленового ряда); цв. р. с магнием в прис. соляной кислоты (красно-коричневое окраш.— флавоноиды): образов, осадка с кремневольфрамовой кислотой в присутствии серной кислоты — алкалоиды; цв. р. с хлоридом железа (III)

Титрование перманганатом калия окисляющихся веществ в пересчете на танин

Травы душицы (42-2646-89)

Цв. р. с хлоридом железа (III)

Нет

Чабреца; добавка
глицерина
(42-1399-89)

См. ФС 42-971-80. Цв. р. с азотной кислотой в присутствии серной кислоты (вишнево- красное окраш.— тимол); цв. р. с формалином в прис. серной кислоты (красно-бурое окраш.— тимол); цв. р. с сульфатом меди в присутствии едкого натра (синее окраш.— глицерин)

Нет

Жидкий экстракт (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Шишек хмеля (42-2631-89)

Цв. р. с серной кислотой (красно-коричневое окраш.— хиноны)

Нет

Алтейного
корня
(42-1971-90)

Образ, желтого осадка при действии раствора едкого натра; посинение лакмусовой бумаги в парах (аспарагин); отделение слизи при обработке препарата 90 % этанолом

Гравиметрически после обработки ацетатом свинца (II) (слизи)

Горицвета
(42-2221-92)

Цв. р. с 2,4-динитродифенип- сульфоном (синее окраш.— сердечные гликозиды); цв. р. с солями пикриновой кислоты (оранжево-желтое окраш.— то же)

Колориметрически или спектрофотометрически (495 нм) после обработки пикратом натрия — суммарное содержание сердечных гликозидов в пересчете на цимарин; биологическая активность в пересчете на ГСО цимарина (ЛЕД)

Элеутерококка
(42-2833-92)

Цв. р. с хлоридом железа (III); УФ-спектр после экстракции хлороформом и этанолом (5:1), максимум 278 ± 2 нм: ТСХ: система хлороформ—метанол— вода (71:33:7), просмотр в УФ- свете (254 нм. пятно синего цвета, З66 нм — не менее трех пятен с R, > 0,4) (элеутерозиды)

Спектрофотометрически (27В нм) — суммарное содержание элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В

Крапивы
(42-2050-93)

ТСХ: система бензол—петролейный эфир (1:1), просмотр в УФ- свете (366 нм. пятно с желто- зеленой флуоресценцией), проявление парами йода — желтое или сине-фиолетовое пятно (фитоменодион). Значения R, не указаны. необходим стандартный образец; цв. р. с резорцином в прис. серной кислоты — сине-фиолетовое окрашивание

Нет

Жидкий экстракт [ФС]

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Родионы (42 2163-96)

Образ, осадка при действии ацетата свинца; цв. р с 1,2-нитрозочафтогом в прис. азотной кислоты (красно-коричневое окраш.— салидрозид); цв. р. с хлоридом железа; ТСХ: система хлороформ—метанол—вида (26:14:3). просмотр в УФ-свете (254 нм — фиолетовое пятно с Rf 0,4 — розавин), проявление карбонатом натрия и диазотированным сульфацилом — красное пятно (салидрозид)

Спектрофотометрически [485 нм) после удаления дубильных веществ и флавоноидов действием ацетата свинца (II) и обработкой диазотированным сульфацилом (салидрозид)

Ротокан [цветы ромашки, ноготков и трава тысячелистника] (42-1640-96)

Цb. р с конц. соляной кислотой (зеленое окраш ); цв. р. с ванилином в прис. серной кислоты (красно-бурое окраш.); цв. р. с магнием в прис. соляной кислоты (коричнево-красное окраш.), цв. р. с хлоридом железа (III)

Титрование перманганатом калия окисляющихся веществ в пересчете на танин

«Простанорм» (водно-спиртовое извлечение), 4 компонента (42-3267-98)

Тесты на пенообразование: цв. р. с хлоридом железа (III); ТСХ: система хлороформ—этилацетат— муравьиная кислота—вода (7:50:5:45), просмотр в УФ- свете (360 нм. красное пятно с Rf 0,31, синее с Rf 0,35 и зелено-синее с Rf 0,73), после прогрева при 100 °С просмотр в УФ-свете [360 нм, красное пятно с Rf 0,59), в видимом свете желтые пятна с Rf 0,26 и 0,64

Спектрофотометрически (414 нм) после обработки хлоридом алюминия — суммарное содержание флавоноидов в пересчете на рутин

Пустырника
[42-1966-98)

ТСХ: система хлороформ— метанол—вода (80:2:0,1), проявление реактивом Шталя, не менее трех зон сиреневого цвета с R, 0,4. 0,6 и 0,8 (иридоиды)

Спектрофотометрически (512 нм) после обработки гидроксиламином и хлоридом железа (III) (последовательно) — сумма иридоидов в пересчете на гарлагил- ацетат (см. ФС 42- 2278-98)

Жидкий экстракт (ФС)

Тесты на подлинность

Количественное
определение

Боярышника
(42-3719-09)

Цв. р. с магнием в прис. соляной кислоты (красно-малиновое окраш.— флавоноиды); ТСХ: система 1 -Бутанол—уксусная кислота—вода (9:1:0,5), проявление хлоридом алюминия — желтые пятна для гиперозида, кверцетина и рутина. Значения Rf не приведены, необходимы стандартные образцы.

Спектрофотометрически (409 нм) после обработки хлоридом алюминия — суммарное содержание флавоноидов в пересчете на рутин

Левзеи
(42-1995-99)

ТСХ: система хлороформ- метанол—ацетон (6:2:1), проявление раствором ванилина в этаноле, не менее двух зон желто-зеленого цвета с R5 1,20 и 1,00 (экдистен и экдистерон относительно экдистена)

ВЗЖХ: изократический режим, элюент, 50 % ацетонитрил в 2 % уксусной кислоте, детектирование при 242 нм — сумма экдистероидов в пересчете на экдистен

Термопсиса
(42-2047-99)

ТСХ: система хлороформ— ацетон—диэтиламин (5:4:1), проявление реактивом Драгендорфа, не менее двух оранжевых пятен с R5 1,0 и 1,6 относительно СОВС цитизина; УФ-спектр: максимумы 227±2 нм. 300±2 нм, минимум 254±3 нм

Обратное титрование — суммарное содержание алкалоидов в пересчете на термопсин

Некоторые другие спиртосодержащие препараты

Раствор натрия уснината в пихтовом бальзаме (42-585-92)

Цв. р. с хлоридом железа (III)

Титрование

Корвалол
(42-2277-94)

Щелочной гидролиз и р. с нитратом серебра (бледно- желтый осадок) — этиловый эфир α-бромизовалериановой кислоты: цв. р. с гидроксиламином и хлоридом железа  (последовательно)— красно- бурое окраш.: цв. р. с сульфатом меди (светло-сиреневый осадок)— фенобарбитал; ГЖХ-анализ — ментол

Этил α-бромизоваперат —- ГЖХ — анализ (внутренний стандарт — камфоре) или аргентометрически (обратное титрование роданидом аммония); фенобарбитал — спектрофотометрически (240 нм) или титрованием комплекса с Сu2+

 

Сокращения в таблице — те же. что и в таблице 14.

Таблица 16
Характеристика частоты использования различных способов подтверждения подлинности по данным 67 частных фармакопейных статей «Настойки». «Экстракты жидкие» и некоторые другие спиртосодержащие фитопрепараты за 1972-1999 гг.


Тест на подлинность

Число статей, в которых использован данный тест

Цветная реакция с хлоридом железа *

22

Тонкослойная хроматография на пластинках Silufol

18

в том числе:

 

с использованием справочных данных по Rf

10

с параллельным хроматографированием стандартных образцов

8

Цветная реакция сухого остатка с серной кислотой

10

Цветная реакция с магнием в присутствии соляной кислоты

8

Цветная реакция сухого остатка с азотной кислотой

7

(в том числе в присутствии ацетона)

 

Цветная реакция с n-диметиламинобензальдегидом

5

Характерный запах препарата

4

Цветная реакция с цинком в присутствии соляной кислоты

4

Тесты на пенообразование (включая сравнение устойчивости пены в 0,1 н растворах едкого натра и соляной кислоты)

4

Цветная реакция с ванилином

3

Образование осадка с ацетатом свинца

3

Флуоресценция,

3

в том числе: в видимом свете

2

в УФ-свете

1

Цветная реакция с хлористоводородной кислотой

3

Образование осадка при действии раствора едкого натра

3

Цветная реакция с гидроксидом меди

2

Цветная реакция с хлоридом алюминия

2

Цветная реакция с формалином в присутствии серной кислоты

2

Образование осадка с кремневольфрамовой кислотой

2

УФ-спектры препаратов

2

Цветная реакция с пикриновой кислотой или пикратом натрия

2

Горечь при разбавлении не менее чем 1:1000 (органолептически)

2

Двухстадийная цветная реакция с
а) гидроксиламином в щелочной среде и
б) хлоридом железа (III) в кислой среде

2

Тест на подлинность

Число статей, в которых использован данный тест

Цветная реакция с нингидрином

2

Цветная реакция с сульфатом меди

2

Уникальные тесты на подлинность, используемые в единичных фармакопейных статьях

Цветная реакция с аммиаком

1

Цветная реакция с фуксинсернистой кислотой

1

Цветная реакция с хлоридом сурьмы

1

Цветная реакция с метаванадатом аммония

1

Цветная реакция с дифениламином

1

Цветная реакция с 2,4-динитродифенилсульфоном

1

Цветная реакция с 1-нитрозо-2-нафтолом

1

Образование мути при разбавлении

1

Образование осадка при разбавлении этиловым спиртом

1

Характерный цвет образца

1

Образование осадка с фосфорновольфрамовой кислотой

1

Образование осадка при действии гидроксида бария

1

Образование осадка при обработке танином

1

Цветная реакция с фелинговой жидкостью

1

Образование осадка при действии нитрата серебра

1

Анализ методом ВЭЖХ (ФС 42-3056-98)

1

Газохроматографический анализ: определение ментола в препарате «Корвалол» (ФС 42-2277-94)

1

Отсутствует

3

Общая сводка данных

 

Способ подтверждения подлинности

Число примеров

Цветные и специфические реакции

96

Прочие простейшие тесты

10

Органолептический контроль

7

Тонкослойная хроматография

18

Приборные спектральные и хроматографические методы

4

Примечание. *— особенности этой цветной реакции рассмотрены отдельно в таблице 18.

Таблица 17
Характеристика частоты использования различных методов количественного определения действующих компонентов в настойках и жидких экстрактах (по данным 66 частных фармакопейных статей 1972-1999 гг.)


Метод количественного анализа

Число статей, в которых использован данный метод

Отсутствует

27

Титрование

17

о том числе:

 

кислотно-основное (прямое и обратное)

7

Окисляющихся веществ раствором перманганата калия

5

Йодометрическое

1

Потенциометрическое

1

Спектрофотометрия

12

в том числе суммарного содержания веществ

10

в пересчете на условное содержание одного конкретного соединения

 

Колориметрия (или спектрофотометрия)

9

в том числе суммарного содержания веществ в пересчете на условное содержание одного конкретного соединения

7

Гравиметрия

6

Биологическая активность

2

Газохроматографический анализ (ФС 42-2277-94)

1

Анализ методом ВЭЖХ (ФС 42-1995-99)

1

Специальное рассмотрение представленных данных приводит к выявлению достаточно интересных общих закономерностей. При контроле подлинности явно преобладает использование цветных или иных специфических (например, образование осадков) реакций, рекомендуемых в 96 случаях из 132. Достаточно часто встречается применение других специфических тестов, как-то: пенообразование, появление мути при разбавлении препаратов, флуоресценция, опалесценция и другие, и даже органолептический контроль (характерный только для данного препарата и легко опознаваемый запах, горький вкус, ощущающийся при разбавлениях не менее чем
1:1 000). В 18 из 67 фармстатей при контроле подлинности рекомендуется тонкослойная хроматография на пластинках Silufol, как самых доступных и удобных в практической работе. Для применения этого метода необходимо конкретно указать рекомендуемые системы растворителей. Что же касается интерпретации результатов, то она возможна двумя способами. Если в конкретной статье (в 10 из 18) приведены значения R (при этом они могут быть даже не сопоставлены с определяемыми веществами), то в сочетании с цветными признаками хроматографических зон (в том числе с их окраской после проявления различными реактивами и/или в УФ-свете) становится возможным получение необходимых заключений о подлинности препаратов без использования стандартных образцов веществ- свидетелей. В остальных же случаях значения Rf не указаны, что означает необходимость хроматографирования стандартных образцов параллельно с характеризуемыми препаратами (на той же самой пластинке). И наконец, УФ-спектры препаратов в качестве контроля подлинности рекомендованы всего в двух фармстатьях. Возможно, что в наибольшей степени это обусловлено недостаточной информативностью подобных спектров именно для многокомпонентных смесей экстрактивных веществ растений. Более удивительно, что современные приборные хроматографические методы (газовая хроматография и ВЭЖХ), применение которых безусловно оправдано именно для смесей сложного состава, рекомендованы всего в двух фармакопейных статьях. Этот факт уже вполне может быть проинтерпретирован как указание на явно неблагоприятное состояние как приборного оснащения лабораторий, так и недостаточную подготовку специалистов. Последний тезис означает, что относительно несложно обучить аналитика выполнению и интерпретации простейших химических тестов и даже анализу методом ТСХ. Однако формальное перенесение такого же подхода на приборные хроматографические методы невозможно. Деятельность специалистов, владеющих только методиками определения конкретных веществ, заимствованными из частных фармакопейных статей, без знания основных принципов хроматографии и опыта работы с современной техникой и другими образцами оказывается весьма неэффективной.
Из бопее специальных комментариев таблицы 16 как некоторый парадокс следует отметить, что известны три фармстатьи, в которых разделы «Подлинность» отсутствуют (настойка заманихи ФС 42-1887-82, настойка валерианы ФС 42-1831-82 и экстракт пастушьей сумки жидкий ФС 42-1862-82). Документация на настойку «Панаксел» (ФС 42-3044-08), в отличие от всех других аналогичных препаратов, включает раздел «Посторонние примеси», причем результат их контроля методом ТСХ должен быть, естественно, отрицательным.

Говоря о вопросах подтверждения подлинности многокомпонентных спиртосодержащих фитопрепаратов переменного состава с помощью специфических реакций, нельзя не затронуть проблемы надежности получаемых при этом результатов. Подобные химические тесты обычно не вызывают сомнений при применении к индивидуальным веществам, но в случае смесей веществ неопределенность может оказаться весьма значительной. В качестве конкретного примера целесообразно более подробно прокомментировать цветную реакцию с хлоридом железа (III), находящуюся на первом месте по частоте применения в существующей НД на настойки и жидкие экстракты (см. таблицу 18).

Таблица 18
Особенности чаще всего используемой для подтверждение подлинности настоек и жидких экстрактов цветной реакции с хлоридом железа (III)


Препарат

ФС (ВФС)

Характер окраски

Интерпретация результатов [указание на присутствие каких- либо соединений)

 

Настойки

 

Ликоподия

42-557-72

Желто-бурая

Нет [единственный параметр]

Листва
токсикодендрона

42-589-72

Черно-зеленая

Дубильные
вещества

Копытня
европейского

42-592-72

Зелено-бурая

Нет

Багульника

42-880-74

Темно-зеленая

Нет

Софоры японской

ВФС
42-1314-83

Зеленая

Фпавоны

Подорожника

42-2039-83

Темно-зеленая, образование мути

Дубильные
вещества

Арники

42-2061-83

Буро-зеленая

Диоксикарбоновые
кислоты

Эвкалипта

42-741-87

Синевато-серая

Дубильные
вещества

Настойка горькая

42-2231-91

Черно-зеленая

Дубильные
вещества

Зверобоя

42-1889-95

Зеленая

Дубильные
вещества

Препарат

ФС (ВФС)

Характер окраски

Интерпретация результатов [указание на присутствие каких- либо соединений)

Эскулюс
гомеопатическая

ВФС
42-2626-95

Зеленая

Дубильные
вещества

Прополиса

42-3736-99

Темно-зеленая

Фенольные гидроксильные группы

 

Жидкие

экстракты

 

Валерианы

42-2000-83

Зеленоватая

Валериановая
кислота

Тысячелистника

ВФС
42-1637-В6

Зелено-коричневая

Дубильные
вещества

Календулы

ВФС
42-163Β-Θ6

Зелено-коричневая

Дубильные
вещества

Ромашки

ВФС
42-1639-86

Зелено-коричневая

Дубильные
вещества

Травы душицы

42-2646-89

Зеленая

Фенольные
соединения

Элеутерококка

42-2833-92

Зеленая

Нет

«Ротокан»

ВФС
42-1640-96

Зелено-коричневая

Нет

Родиолы

42-2163-96

Темно-синяя

Дубильные
вещества

«Простанорм»

ВФС
42-3267-98

Зеленая

Фенольные
соединения

 

Другие

препараты

 

Раствор натрия уснината в пихтовом бальзаме

42-585-92

Красно- коричневая

Усниновая кислота

Как следует из данных таблицы 18, даже внешние признаки протекания этой реакции (характер изменения окраски) оказываются совершенно различными: регистрируются не только разнообразные оттенки зеленых тонов, но и желто-бурая окраска (ФС 42-557- 72), синевато-серая (ФС 42-741-87) и даже очень редко отмечаемая и не типичная для солей и комплексов железа (III) темно-синяя (ФС 42-2163-96). В случае же реакции FeCl3 с уснинатом натрия (ФС 42-585-92) окраска реакционной смеси становится красно-коричневой. Характер интерпретации этих изменений цвета также неоднозначен: с помощью данного реагента обычно выявляют присутствие дубильных веществ, но иногда вместо этого указывают более общие варианты отнесения, например фенольные гидроксильные группы (ФС 42-3736-99), фенольные соединения (ВФС 42-3276-98 и 42-2646-89). С другой стороны, встречаются, возможно, недостаточно обоснованно, такие варианты отнесения, как валериановая кислота (ФС 42-2000-83), флавоны (ВФС 42-1314-83) и диоксикарбоновые кислоты (ФС 42-2061-83). При этом в пяти из 22 примеров использования этой реакции никакой интерпретации изменений цвета и кор реляций с составом препаратов вообще не приводится.
Сама реакция солей железа (III) считается специфической для фенолов (включая полиатомные фенолы) и органических карбоновых кислот. С фенолами ионы Fe3+ первоначально образуют окрашенные комплексы переменного состава, но на этой стадии реакция не завершается. Окислительный потенциал системы Fe3 →Fe2+ в кислой и нейтральной средах достаточно велик (+0,77 В), что означает возможность окисления многих органических соединений. Скорость этих вторичных процессов зависит от концентрации окисляющихся веществ. а внешними признаками могут быть исчезновение первичней окраски, помутнение раствора, образование осадка и другие малохарактеристичные изменения. Изложенное не означает необходимости немедленного пересмотра возможностей применения цветной реакции с хлоридом железа (III) для стандартизации настоек и экстрактов но, по крайней мере, заставляет соблюдать некоторую осторожность при интерпретации получаемых с ее помощью результатов.
Если обратиться к аналогичному рассмотрению методов количественного анализа (см. таблицу 17), то здесь обращает на себя внимание факт отсутствия этого раздела в 27 из 67 фармстатей (40 % общего числа). При этом наибольшее число таких статей (21) было разработано до 1989 г. включительно, тогда как с 1990 г. примеров отсутствия рекомендаций по количественному анализу известно всего шесть. Скорее всего, подобная ситуация была вызвана не отсутствием подходящих способов анализа, а отмеченной выше сложностью выбора приоритетных компонентов или классов веществ. На первом месте по частоте применения находятся колориметрические (9) и спектрофотометрические (12) методы. Поскольку настойки и экстракты являются многокомпонентными препаратами, оптические методы количественного анализа обеспечивают определение суммарного содержания родственных веществ с близкими спектральными характеристиками. В 17 фармстатьях рекомендован прием, часто встречающийся именно в практике фитохимии при исследовании растительных экстрактов: суммарное содержание соединений некоторой
группы определяют в пересчете на одно конкретное вещество, доступное в качестве стандартного образца, по которому и была проведена градуировка фотоэлектроколориметра или спектрофотометра. В качестве примера такого подхода можно привести следующие препараты.


ФС

Спектрофотометрическое или колориметрическое определение суммарного содержания

42-1674-81 42-1715-8142-1973-83 42-2052-83

Алкалоидов красавки в пересчете на атропин (основание)

42-2061 -8З

Сесквитерпеновых лактонов в пересчете на арнифолин

42-2142-94

Алкалоидов чемерицы в пересчете на протовератрин

42-1889-95
42-1652-99
42-3267-98
42-3719-99

Флавоноидов в пересчета на рутин

42-1932-95

Изофлавоноидов в пересчете на ононин

42-3056-90

Флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид

42-588-98

Иридоидов в пересчете на пеонифлорин

42-2278-98

Иридоидов в пересчёте на гарпагида ацетат

42-2833-92

Элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В

42-2221-92

Сердечных гликозидов в пересчете на цимарин

Подобный способ количественного анализа (разновидность метода внешнего стандарта) вряд пи имеет какие-либо теоретические обоснования, и его появление da facto обусловлено исключительна потребностями аналитической практики. Достаточно трудно оценить уровень возможных ошибок определения суммарного содержания различных веществ с помощью этого приема, поскольку точность результатов зависит от сходства спектральных характеристик хромофоров. Однако вместе с тем такой способ оказался весьма полезным и часто применяется.
В 16 фармстатьях как метод количественного анализа рекомендовано титрование. Как и в предыдущем случае, титрование смесей Веществ родственной химической природы приводит к некоторому Неопределенно-усредненному результату. Среди различных разновидностей этого метода довольно велико число примеров определения суммарного содержания окисляющихся веществ титрованием раствором перманганата калия: 1 мг 0,1 М раствора титранта соответствует 4,157 мг [внимание, указаны избыточные значащие цифры) окисляемых веществ в пересчете на танин (который и сам является смесью переменного состава). Достаточно очевидна, что результатом такого анализа оказывается весьма интегрированная характеристика исходного образца.
Прочие рекомендуемые способы количественных определений в шести статьях включают гравиметрический анализ: в двух случаях как количественный критерий характеристики препарата выбрана его биологическая активность (ЛЕД). В единственной статье использована газовая хроматография для контроля содержания этилового эфира α-бромиэовалериановой кислоты в препарате «Корвалол» (ФС 42-2277-94). И, так же как и при рассмотрении способов подтверждения подлинности, к сожалению, приходится отметить, что только в единственной статье на экстракт левзеи жидкий (ФС 42-1995-99) количественное определение экдистероидов в пересчете на экдистен, доступный в качестве стандартного образца, предлагается проводить методом ВЭЖХ. Несмотря на то что в оригинальной фармстатье в качестве прибора зафиксирован отечественный жидкостный хроматограф «Милихром-2». эту рекомендацию не следует воспринимать буквально. Приведенные условия разделения (состав элюента) и длина волны детектирования позволяют воспроизвести такой анализ на любом другом хроматографе.



 
« Наследственные факторы в формировании задержки полового развития у мальчиков   Неврологические проявления остеохондроза позвоночника »