Начало >> Статьи >> Архивы >> Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Способы подготовки проб - Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Оглавление
Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация
Введение
Фармакологическая активность и применение в медицинской практике
Лекарственное растительное сырье, используемое для приготовления
Теоретические основы процесса экстрагирования
Факторы, влияющие на процесс экстрагирования
Приготовление экстрагентов
Технологические свойства измельченного растительного материала
Методы экстрагирования и используемое оборудование
Непрерывные метопы экстракции
Интенсивные методы экстракции
Очистка извлечений
Общая характеристика современных физико-химических методов анализа и стандартизации
Спектроскопия в УФ и видимой областях спектра
Планарная хроматография
Газовая хроматография
Хромато-масс-спектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Капиллярный электрофорез
Физико-химические методы стандартизации
Методы стандартизации жидких спиртосодержащих фитопрепаратов
Характеристика разделов Подлинность и Количественное определение» нормативной документации
Развитие методов стандартизации эликсиров и бальзамов
Способы подготовки проб
Техника выполнения аналитических определении и способы интерпретации результатов
Газовая хроматография и хромато-масс-спектрометрия
Проекты общих фармакопейных статей
Проект общей фармакопейной статьи Эликсиры
Стандартные образцы и их применение для оценки качества лекарственных средств
Применение стандартных образцов при оценке качества
Анализ производства настоек, экстрактов, эликсиров
Слисок литературы

Особенность эликсиров и бальзамов состоит в том. что они содержат сложные смеси биологически активных веществ, часть из которых находится на уровне концентраций лишь незначительно превышающем следовые количества 10-4-10-6г/л). В составе рассматриваемых препаратов важную роль играют как летучие, так и малолетучие или нелетучие компоненты растительного сырья. Доступные в настоящее время методы газовой (анализ летучих компонентов) и жидкостной (анализ нелетучих компонентов) хроматографий являются эффективными в стандартизации эликсиров и бальзамов лишь при условии оптимального выполнения подготовки проб. При разработке способов подготовки проб для каждого из этих методов необходимо учитывать специфические особенности состава характеризуемых препаратов.
Многие эликсиры и бальзамы содержат в своем составе мед, сахар и сахарный колер. Это ограничивает возможности прямого дозирования таких препаратов в хроматограф, так как присутствие, например, сахаров и компонентов воска (из меда) при анализе методом ВЭЖХ приводит к быстрому выходу из строя предколонки и колонки. Дозирование препаратов, содержащих сахарный колер, не только ускоряет старение колонки, но и нередко делает невозможной интерпретацию результатов анализа при УФ-детектировании. Это обусловлено УФ-спектральными свойствами компонентов сахарного колера, которые могут маскировать целевые компоненты образцов. По этим причинам традиционно используют методы подготовки проб жидких спиртосодержащих фитопрепаратов, направленные на устранение мешающих примесей [Тюкавкина И. А. и др., 1998]. При этом часто одновременно решают и другую важную задачу, а именно — превращение всех флавоноидных гликозидов в агликоны при кислотном гидролизе препарата, что значительно упрощает интерпретацию результатов анализа. Так, при стандартизации эликсиров «Алтайский» (Макаров В. Г. и др.. 19963 и «Эвалар», Пименов А. И. и др.. 1998) для того, чтобы исключить маскирующее влияние сахарного колера, анализируемые образцы подвергали кислотному гидролизу с помощью хлороводородной кислоты с последующей экстракцией полученного гидролизата диэтиловым эфиром. Схема подготовки проб в этом случае включала в себя кислотный гидролиз препарата, исчерпывающую эфирную экстракцию, промывку эфирного экстракта водой для удаления кислоты и компонентов колера, удаление из эфирного экстракта остатков воды с помощью сульфата натрия, полную отгонку эфира и растворение сухого остатка в этиловом спирте. Было показано (Краснов К. А. и др., 1999), что после кислотного гидролиза соединения флавоноидной природы (кемпферол, кверцетин, апигенин) могут быть количественно переведены в эфирный раствор при 4-кратной экстракции эфиром. Это было подтверждено данными ВЭЖХ по результатам анализа эликсиров после кислотного гидролиза и их эфирных экстрактов. На основе этих данных были разработаны способы подготовки проб, используемые в аналитических методах контроля подлинности и качества препаратов, включенные в ВФС 42-2598-95 и 42-3164-98. Для устранения мешающих определению высокомолекулярных примесей применяется также прием их осаждения с использованием избытка метанола. Этот способ был применен при стандартизации определения антоцианов в эликсире «Эвалар». Схема подготовки проб включала в себя осаждение компонентов меда десятикратным избытком метанола с последующим подкислением раствора хлороводородной кислотой. Затем раствор выдерживали при температуре 0 °С в течение 40 минут, осадок отфильтровывали и фильтрат упаривали на ротационном испарителе при 40 °С до первоначального объема (Пименов А. И. и др., 1998).

При разработке проекта ФС «Эликсир Алтайский» методика подготовки пробы для определения флавоноидов была усовершенствована, так как в результате предварительных исследований было установлено, что в процессе гидролиза эликсира и последующей эфирной экстракции не удается полностью избавиться от мешающего влияния компонентов сахарного колера и меда. Поэтому в раздел «Количественное определение» проекта ФС была введена модифицированная методика подготовки проб, включающая полную отгонку спирта из образцов эликсира, что практически исключает переход компонентов колера из водного слоя в эфирный на стадии экстракции (Зенкевич И. Г. и др., 2000). Стадия промывки эфирного экстракта водой в этом случае отсутствует. Удаление кислоты происходит на стадии предшествующей экстракции эфиром нейтрализацией с помощью раствора гидроксида калия. Таким образом, предложенная схема подготовки проб состоит из последовательности операций, включающей полную отгонку спирта из эликсира, кислотный гидролиз, нейтрализацию до pH ~ 6,0 и последующую эфирную экстракцию.
Рассмотренные выше подходы к подготовке пробы относятся к, варианту жидкость-жидкостной экстракции, основанной на распределении анализируемых компонентов между двумя несмешивающимися жидкостями. В последнее время все чаще используется иная процедура, известная как твердофазная экстракция, поскольку считается, что она является более быстрой и эффективной по сравнению с классическими методами. Для проведения твердофазной экстракции применяют специальные картриджи (патроны, заполненные сорбентом). Например, при стандартизации эликсира «Кедровит» (ВФС 42-2871-97) и бальзама «Московия» (ВФС 42-2660-95) для количественного определения флавоноидов применяли твердофазную экстракцию с использованием патронов «Диапак ТА» (TV 4215-002-05451931-94). СП «БиоХимМак». Схема подготовки пробы включала в себя пропускание 1 мл препарата через патрон, предварительно кондиционированный 3 мл метанола и 3 мл воды, и элюирование фракции флавоноидов 5 мл 70 % метанола. Стадия твердофазной экстракции с применением полиамидного сорбента была использована при исследовании бальзама «Легенда Гайдука» [Тюкавкина Н. А. и др., 1999]. Для стандартизации этого бальзама в качестве критериев подлинности авторами были выбраны флавоноиды. На первой стадии пробоподготовки осаждали высокомолекулярные компоненты и отфильтровывали образовавшийся осадок. Вторая стадия включала твердофазную экстракцию с применением полиамидного сорбента. Различные фенольные соединения в зависимости от строения значительно отличаются по сорбционным свойствам на таком сорбенте. Это обстоятельство позволило легко десорбировать более полярные соединения типа фенолкарбоновых кислот, используя в качестве элюента воду. Флавоноидные соединения относятся к более прочно сорбируемым веществам. Для их элюирования использовали метиловый спирт.
При исследовании эликсира «Демидовский» (Макаров В. Г. и др.. 1996) и стандартизации бальзама «Первопрестольный» (ВФС 42-2780-96) была выбрана подготовка проб, включающая лиофилизацию образца препарата. Достоинство этого способа состоит в получении сухого остатка препарата в условиях, исключающих термическую и окислительную деструкцию. С помощью экстракции диэтиловым эфиром или ацетонитрилом из лиофилизата избирательно выделяют фракцию, обогащенную фенольными соединениями и в то же время не содержащую водорастворимых сахаров, полисахаридов и других веществ.
Наиболее эффективным способом подготовки проб для анализа летучих компонентов эликсиров методом газовой хроматографии являются методики, включающие стадию их отгонки с водяным паром. Полученные отгоны экстрагируют органическими растворителями с последующим концентрированием [Макаров В. Г. и др., 1996]. Однако наряду с этим вариантом подготовки проб используют более простой способ, а именно — непосредственную экстракцию образцов органическими растворителями. Такой подход был применен при стандартизации бальзамов «Первопрестольный» и «Московия». Методика подготовки проб при стандартизации бальзама «Первопрестольный» состояла в экстракции 12 мл препарата тремя миллилитрами этилацетата (ВФС 42-2780-96). При работе с бальзамом «Московия», авторы пошли по пути концентрирования полученного эфирного экстракта. Схема подготовки проб в соответствии с ВФС 42-2680-95 включала трехкратную экстракцию препарата эфиром, удаление из эфирного экстракта остатков воды с помощью сульфата натрия, полную отгонку эфира и растворение сухого остатка в этиловом спирте.

Для газохроматографического анализа эликсиров «Демидовский» и «Алтайский» использовали специально подготовленные образцы сконцентрированных эфирных экстрактов эликсиров. Основные принципы получения таких экстрактов с целью концентрирования компонентов образца защищены патентом [Макаров В. Г., Краснов К. А.. 1997]. В данной методике летучие компоненты выделяли из препарата путем отгонки с водяным паром в виде раствора в водно-спиртовом дистилляте. С целью концентрирования анализируемых веществ их экстрагировали из водно-спиртового отгона диэтиловым эфиром. Для удаления спирта из получившегося эфирного экстракта использовали двукратную промывку водой. Далее эфир упаривали до прекращения отгонки паров растворителя, что приводило к концентрированию летучих веществ, по меньшей мере, в 100 раз. Авторы отмечают, что извлечение летучих веществ из анализируемого экстракта методом отгонки с водяным паром позволяет выделить широкий спектр характеристических веществ для их последующей идентификации методом газовой хроматографии.
Исследование состава эликсира «Кедровит» показало, что в отличие от других препаратов этого типа содержание летучих соединений (компонентов эфирных масел растений) в нем относительно невелико. Гораздо большее число биологически активных компонентов препарата относится к группе соединений средней летучести и еще большее — к группе труднолетучих. Эта особенность эликсира «Кедровит» приводит к усложнению процедур подготовки проб для газо- хроматографического анализа. Использование методик пробоподготовки, разработанных ранее для анализа препаратов эликсир «Демидовский» и эликсир «Алтайский», не позволило получить достаточно характеристичную хроматографическую картину эликсира «Кедровит». По этой причине для анализа этого эликсира был разработан специальный метод, включающий экстракцию пробы эфиром, метилирование экстрагированных компонентов диазометаном, концентрирование и последующий хроматографический анализ (Макаров В. Г. и др., 1998). В данной методике к 20 мл препарата добавляли 20 мл воды и 0,5 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и проводили экстракцию диэтиловым эфиром. К 20 мл обезвоженного эфирного экстракта добавляли 10 мл свежеприготовленного насыщенного эфирного раствора диазометана и выдерживали 30 мин, после чего эфир отгоняли до объема пробы 0,3 мл (ВФС 42-2871-97) Следует отметить, что для газохроматографического анализа эликсиров возможны и другие способы и варианты подготовки проб. Из-за объективных особенностей состава этих препаратов эти рекомендации не могут быть универсальными, и поэтому для каждого нового объекта изучения необходима разрабатывать свои специфические приемы.



 
« Наследственные факторы в формировании задержки полового развития у мальчиков   Неврологические проявления остеохондроза позвоночника »