Начало >> Статьи >> Архивы >> Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Техника выполнения аналитических определении и способы интерпретации результатов - Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация

Оглавление
Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация
Введение
Фармакологическая активность и применение в медицинской практике
Лекарственное растительное сырье, используемое для приготовления
Теоретические основы процесса экстрагирования
Факторы, влияющие на процесс экстрагирования
Приготовление экстрагентов
Технологические свойства измельченного растительного материала
Методы экстрагирования и используемое оборудование
Непрерывные метопы экстракции
Интенсивные методы экстракции
Очистка извлечений
Общая характеристика современных физико-химических методов анализа и стандартизации
Спектроскопия в УФ и видимой областях спектра
Планарная хроматография
Газовая хроматография
Хромато-масс-спектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Капиллярный электрофорез
Физико-химические методы стандартизации
Методы стандартизации жидких спиртосодержащих фитопрепаратов
Характеристика разделов Подлинность и Количественное определение» нормативной документации
Развитие методов стандартизации эликсиров и бальзамов
Способы подготовки проб
Техника выполнения аналитических определении и способы интерпретации результатов
Газовая хроматография и хромато-масс-спектрометрия
Проекты общих фармакопейных статей
Проект общей фармакопейной статьи Эликсиры
Стандартные образцы и их применение для оценки качества лекарственных средств
Применение стандартных образцов при оценке качества
Анализ производства настоек, экстрактов, эликсиров
Слисок литературы

ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ И СПОСОБЫ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ
Первыми отечественными эликсирами, состав которых был подробно изучен, были разработанные Межрегиональным центром «Адаптоген» препараты эликсиров «Демидовский» и «Алтайский» (Краснов К. А., Макаров В. Г.. 1997). В ходе этих исследований, на основе которых были разработаны методы стандартизации, вошедшие в нормативно-техническую документацию, был создан достаточно общий алгоритм исследования подобных препаратов. При разработке нового препарата аналитические исследования обычно включают два основных этапа. Задачей первого этапа является как можно более полное изучение состава объекта с использованием различных физико-химических методов анализа. На вторам этапе происходит отбор наиболее доступных на практике методов и критериев контроля подлинности и качества препарата.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

В рамках изложенного выше алгоритма с использованием метода ВЭЖХ был стандартизован, например, эликсир «Алтайский». Для его исследования и разработки ВФС был использован предшествующий опыт изучения эликсира «Демидовский». При работе с этим препаратом поглощение элюируемых соединений в области длин волн 190-375 нм регистрировали непосредственно в процессе разделения с помощью диодно-матричного детектора. Для идентификации использовали доступные вещества-свидетели.
Кроме того, с помощью препаративной ВЭЖХ накапливали фракции элюента, соответствующие каждому пику на хроматограмме, и характеризовали их с помощью УФ-спектроскопии и химических методов (кислотный гидролиз). В частности, по характерным спектрам были идентифицированы производные галловой кислоты (танины). В результате гидролиза фракций, предположительно отнесенных к танинам, была получена галловая кислота. идентифицированная сравнением со стандартным образцом методами ВЭЖХ и УФ-спектроскопии, а также по реакции с железоаммониевыми квасцами (Макаров В. Г., Краснов К. А., 1996). Идентификацию содержащихся в гидролизате агликонов проводили путем сравнения хроматографических параметров удерживания со стандартными образцами апигенина и кверцетина.
Условия хроматографического разделения соединений указанных групп в составв эликсира «Алтайский» были выбраны по аналогии с условиями, рекомендованными для других объектов, содержащих природные соединения тех же классов. Для определения флавоноидов начальная концентрация метанола в 0,1 % водном растворе трифторуксусной кислоты была принята нулевой с последующим линейным градиентам от 0 до 100 % в течение 30 мин.
Выбор режима элюирования в ВЭЖХ (градиентный или изократический) в большой степени зависит от сложности решаемой задачи и от имеющегося в аналитической лаборатории оборудования. Чем больше соединений разных классов требуется идентифицировать в анализируемом объекте в одном цикле хроматографического разделения, тем труднее подобрать соответствующие условия для изократического режима. Поэтому часто при использовании современных приборов прибегают к использованию градиентного элюирования, как это было сделано при стандартизации эликсиров «Алтайский», «Кедровит», «Эвалар» и бальзамов «Московия» и «Легенда Гайдука». Однако преимуществом изократического режима (в тех случаях, когда он может быть применен) является экономия времени при выполнении серийных анализов. Это происходит за счет двух факторов. Первый фактор связан с отсутствием необходимости установления равновесия в хроматографической колонке после каждого анализа. Второй — с тем, что в некоторых случаях разделение целевых соединений удается провести за более короткое время по сравнению с градиентным элюированием. Так, при стандартизации бальзама «Первопрестольный» (ВФС 42-2780-96, раздел «Подлинность») с применением изократического режима элюирования на обращенно-фазной колонке размером 250 ± 4,6 мм было достигнуто разделение кверцетина, кемпферола и апигенина за 11 мин. Подвижная фаза состояла из системы ацетонитрил — 2 % уксусная кислота (50:50).
Для детектирования флавоноидов в рассматриваемых препаратах, как правило, используют селективный диапазон длин волн 360-367 нм, являющийся характеристичным для этого класса соединений. При этих длинах волн в минимальной степени проявляется маскирующее влияние соединений других классов. Детектирование при одной длине волны для целей идентификации требует обязательного использования стандартных образцов анализируемых веществ на стадии разработки метода анализа. Совпадение времени удерживания стандарта с временем удерживания неизвестного компонента на хроматограмме препарата является необходимым, но не достаточным условием для надежной идентификации неизвестного вещества. Для более надежной идентификации необходимо привлекать дополнительные данные, например полные УФ-спектры, полученные в результате диодно-матричного детектирования. В частности, при разработке ВЗЖХ-метода стандартизации бальзама «Легенда Гайдука» рассмотрение спектральных характеристик идентифицированных пиков, полученных с помощью диодно-матричного детектора, показало, что в отдельных случаях, несмотря на совпадение времен удерживания, пики на хроматограмме не соответствовали предполагаемым флавоноидам [например, для хризина). Поэтому за основу был принят наиболее достоверный путь идентификации, отвечающий двум критериям: 1) совпадению по времени удерживания со стандартным образцом и 2) соответствию УФ-спектра, зарегистрированного с помощью диодно-матричного детектора для соединения конкретного пика на хроматограмме, УФ-спектру вещества-свидетеля (Тюкавкина И. А. и др., 1999].
Решение задачи определения и использования флавоноидов в целях стандартизации эликсиров и бальзамов осложняется трудно- доступностью стандартных образцов многих флавоноидов. При идентификации флавоноидов без использования стандартных образцов необходимо создание и использование соответствующего подробного информационного обеспечения, формирование которого только начинается [Косман В. М.. Зенкевич И. Г, 1997]. Полезной является также информация о соединениях других классов, например кумаринах (Косман В. М. и др., 1997). Указанные массивы данных содержат информацию о хроматографических индексах удерживания рассматриваемых соединений в шкале n-алкилфенилкетонов (RI) и их относительных оптических плотностях при двух фиксированных длинах волн Аотн — АСХЛ 3/Αίλ23.
Как уже отмечалось в главе 3, интерпретация полного УФ-спектра какого-либо соединения (диодно-матричное детектирование) без использования стандартных образцов затруднительна даже при наличии литературных баз данных по УФ-спектрам. Поэтому во многих случаях более эффективной оказывается интерпретация не полных УФ-спектров, а вычисленных на их основе относительных оптических плотностей при разных фиксированных длинах волн.
По этой причине вопрос о целесообразности использования во всех случаях без исключений сложного и дорогостоящего детектора с диодной матрицей является дискуссионным. Альтернативным вариантом представляется применение детектора, позволяющего проводить регистрацию сигнала одновременно при двух длинах волн. При отсутствии такого детектора рассмотренный прием может быть реализован на любых приборах с УФ-детекторами с перестраиваемой длиной волны детектирования. Он имеет некоторое распространение в фармацевтическом анализе для контроля чистоты или подтверждения подлинности лекарственных веществ главным образом синтетического происхождения, однако выбор длин волн обычно связан с положениями максимумов УФ-спектров. Более перспективным для практических целей, в том числе для разработки методов стандартизации эликсиров и бальзамов, является использование подобных параметров при двух фиксированных длинах волн, одинаковых для любых классов соединений в сочетании с такими параметрами для характеристических длин волн, например А(254/220) «универсальные» длины волн и АС360/254, [одна из выбранных длин волн — селективная] для флавоноидов.
Другими важными критериями идентификации являются индексы удерживания, расчет которых основывается на данных не для одного, а для нескольких реперных соединений. Вычисление хроматографических индексов удерживания проводится по формуле:

где: tR.x, tR.n и tR.r+k— экспериментально измеряемые времена удерживания характеризуемого компонента и ближайших к нему реперных n-алкипфенилкетонов с числом атомов углерода в молекуле η и n+k и постулированными значениями индексов удерживания R/n= 100п и Rln±k= 100(n+k), f(tR) = tp + q/g(tR- t0), где t0 — время удерживания несорбируемого компонента, вспомогательный параметр q вычисляют по временам удерживания не менее трех реперных n-алкилфенилкетонов по формулам приведенным в справочнике (Мариничев А. Н. и др., 1990). Для упрощения расчета индексов удерживания рекомендуются простейшие программы, например приведенная в руководстве [Зенкевич И. Г., Косман В. М., 1999] программа на языке QBasic.
Сочетание индексов удерживания с по меньшей мере двумя значениями относительных оптических плотностей позволяет практически однозначно идентифицировать конкретные соединения в препаратах без использования стандартных образцов, но при наличии соответствующих хроматографических и спектральных баз данных. Характеристика определяемых компонентов хроматографическими индексами удерживания в обращенно-фазовой ВЭЖХ представляется необходимой для их идентификации, прежде всего на стадии разработки метода анализа. После того как то или иное соединение
надежно идентифицировано, оно может быть опознано на хроматограмме с помощью более простых аналитических параметров, например по относительным временам удерживания. Соответственно этому в окончательных вариантах НД на препараты могут быть представлены только такие простейшие хроматографические параметры.



 
« Наследственные факторы в формировании задержки полового развития у мальчиков   Неврологические проявления остеохондроза позвоночника »