Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Организация рабочего места лаборанта-гистолога - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Организация рабочего места во многом определяет эффективность и качество работы лаборанта. Рациональная расстановка и размещение лабораторной посуды, инструментария, необходимых растворов и реактивов позволяют без суеты, с наименьшей затратой усилий выполнить за одно и то же время больший объем работы.
Рабочий стол. При отсутствии специальных столов для лаборанта с успехом может быть приспособлен любой стол (желательно с ящиками) с площадью рабочей поверхности не менее 60 х 120 см.
Если крышка стола не имеет специального покрытия, то его следует сделать из какого-либо влагоустойчивого материала (настольное или толстое оконное стекло, линолеум, пластик или клеенка). Однако участок стола, предназначенный для непосредственной работы по приготовлению препаратов, в любом случае необходимо накрыть стеклом и расположить под ним небольшие (9 х 12 см) листы белой или черной бумаги. Этим создается соответствующий фон, облегчающий работу с окрашенными (белый лист) и неокрашенными (черный лист) объектами. Рекомендуется также на оба листа нанести контуры предметного стекла с обозначением места расположения и размеров покровного стекла. Этот простой прием позволяет рационально разместить на предметном стекле срезы в процессе их заключения.
Для того чтобы удобней расположить необходимое оборудование, следует иметь двухъярусную полку для реактивов, растворов и посуды, которая устанавливается либо перед работающим (вдоль заднего края стола), либо сбоку в зависимости от расположения стола по отношению к источнику дневного света.
Достаточная освещенность рабочего места является одним из важнейших условий, так как изготовление гистологических препаратов требует значительного напряжения зрения. Необходимо максимально использовать дневной свет. Лучше ставить рабочий стол около окна.

Однако даже при достаточном свете рабочее место должно быть оснащено специальным осветителем к микроскопу или настольной лампой (с наклоняющейся верхней частью) для обеспечения постоянной освещенности препаратов при микроскопировании, так как изменение освещенности неблагоприятно сказывается на восприятии цвета препарата и затрудняет оценку качества его окраски.
Лаборант должен содержать свой стол в надлежащем порядке: не загромождать рабочую поверхность лишней посудой и предметами, не применяемыми в данный момент в работе. По окончании рабочего дня лаборант обязан проверить, выключены ли электроприборы, с которыми он работал.

ЛАБОРАТОРНАЯ ПОСУДА

В любой гистологической лаборатории применяют большой набор разнообразной лабораторной посуды. В настоящем разделе дается описание лишь самых необходимых образцов.
Широкогорлые банки с притертыми пробками различной вместимости — от 50 до 200 мл — используют для составления гистологических батарей, предназначенных для подготовки кусочков тканей к заливке различными средами (см. раздел «Промывка и обезвоживание материала»). Более крупные банки применяют для фиксации и хранения кусочков тканей в фиксирующих жидкостях, обработки предметных стекол, приготовления нейтрального формалина и пр. Перед помещением в банки легко испаряющихся жидкостей (спирт, эфир, ацетон и т. д.) необходимо тщательно проверить, хорошо ли притерты пробки. Для этого достаточно проделать пробу с эфиром: если пробка хорошо притерта, то налитый в банку эфир не определяется по запаху.
Бюксы — небольшие круглые стеклянные стаканчики различного диаметра и высоты с шлифованными крышками — наиболее распространенная посуда для обработки гистологических срезов и маленьких кусочков тканей.
Биологические стаканчики — круглые, овальные или четырехугольные (как и высокие бюксы) — применяют для проводки гистологических срезов, монтированных на предметных стеклах. Для придания стаканчикам большей устойчивости и обеспечения определенного порядка в расстановке их помещают в специальные стойки, изготовленные из дерева или пластмассы, по нескольку штук в ряд в зависимости от методики обработки.
Кюветы — четырехугольные стеклянные чашки с крышками, имеющие на двух противоположных сторонах прорези, в которые вставляют предметные стекла. Применяют для одновременной окраски нескольких срезов, наклеенных на предметные стекла.
Чашки Петри — широкие, плоские стеклянные чашки с крышками — пригодны для различных манипуляций (окраска свободно плавающих и наклеенных на предметные стекла срезов, использование в качестве подставок под бюксы и т. д.).
Мерная посуда — цилиндры и мензурки различной емкости (от 10 до 250—500 мл), воронки разных размеров.
Химические стаканчики — круглые стеклянные стаканчики без крышек вместимостью 50—100 мл — находят широкое применение при проведении гистохимических реакций, окраски срезов, наклеенных на стекла и т. д.
Колбы (плоскодонные) вместимостью от 50 мл до 2 л. Малые колбы применяют для приготовления и хранения растворов различных красителей, большие — под дистиллированную воду и прочие жидкости, расходуемые в больших количествах.
Кристаллизаторы — круглые глубокие чашки из толстого стекла (различной вместимости) — применяют для массовой промывки наклеенных на стекла срезов, сливания отработанных жидкостей и других надобностей.
Пипетки обычные (предназначенные для закапывания лекарств) используют для накалывания на срезы красителей и различных жидкостей, градуированные (вместимостью 0,1—100 мл) применяют для отмеривания малых количеств различных жидкостей при составлении растворов (особенно в гистохимической практике).
Часовые стекла (различного диаметра) применяют для обработки свободно плавающих срезов, нуждающихся в контроле под микроскопом (серебрение нервной ткани и др.).
Правильная расстановка и этикетировка лабораторной посуды играют существенную роль, так как позволяют избегнуть лишних движений и путаницы в процессе обработки препаратов, стандартизируют рабочий процесс и в конечном итоге повышают производительность труда. Прежде чем приступить к какому-либо этапу приготовления гистологических препаратов (обезвоживание, окраска и т. д.), следует отобрать необходимую чистую посуду, обозначить ее назначение и целесообразно расположить.
Особое внимание следует уделять своевременной этикетировке посуды.
Несоблюдение этого правила может привести не только к помехам в процессе обработки материала, но и к более серьезным последствиям вплоть до несчастных случаев. Посуду, употребляемую постоянно для одних и тех же целей, этикетируют с помощью бумажных наклеек (для этой цели можно применять и лейкопластырь), на которые нанесены четкие обозначения содержимого. Надпись следует делать черной тушью, но, чтобы она не расплывалась при попадании раствора, необходимо этикетку покрыть пленкой из 1-2% целлоидина или коллодия. Посуду, подлежащую разовому употреблению, помечают специальным карандашом для письма по стеклу.
Помимо лабораторной посуды, для приготовления микропрепаратов необходимы предметные и покровные стекла.
Предметные стекла — прямоугольные пластины размером 76 х 26 мм и толщиной 1—2 мм, предназначенные для размещения гистологических срезов в процессе приготовления постоянных препаратов.
Покровные стекла представляют собой тонкие (0,15—0,2 мм толщины) пластинки различных размеров. Служат для покрытия обработанных срезов, расположенных на предметном стекле.
Чистота посуды является одним из важнейших условий в гистологической технике. Поэтому всю посуду, идущую в употребление, предварительно тщательно моют в теплой мыльной воде специальными щетками, затем в холодной проточной воде и в заключение ополаскивают дистиллированной. В тех случаях, когда посуда должна быть особенно чистой (приготовление растворов, проведение гистохимических реакций), ее помещают в смесь следующего состава:

Бихромат калия —
К2Сl2О7 (насыщенный раствор)     100 мл
Вода горячая 1000 мл
Серная кислота (концентрированный раствор) 100 мл
Приспособление для промывания пипеток
Рис. 55.
Приспособление для промывания пипеток.

Для приготовления этой смеси сначала растворяют в горячей воде бихромат калия, затем раствор охлаждают и только после этого добавляют серную кислоту тонкой струйкой. В этом составе предметные стекла (и любую другую посуду) выдерживают 2—3 дня, а затем промывают в проточной воде в течение 1—2 дней. Приготовление раствора требует соблюдения техники безопасности: работа в резиновых перчатках и обязательно в вытяжном шкафу. При этом особое внимание следует обратить на то, чтобы добавлять не водный раствор к серной кислоте, что может привести к разбрызгиванию кислоты и ожогам, а кислоту к водному раствору. Хранить раствор с помещенными в него стеклами также рекомендуется в вытяжном шкафу.
Вымытую лабораторную посуду не вытирают, а помещают для сушки в сушильный шкаф, так как при вытирании на ней могут остаться волоконца от ткани.
Предметные стекла подсушивают на воздухе (или в сушильном шкафу), закладывают в широкогорлую стеклянную банку и, залив смесью из равных частей спирта и эфира (или бензола), плотно закрывают.
Такая обработка не только очищает стекла от грязи, но и обезжиривает их поверхность, что очень важно для хорошего приклеивания срезов. Перед употреблением стекло достают пинцетом и вытирают чистой (желательно льняной) тряпкой, следя при этом, чтобы на поверхности не оставались волоконца от материи и пылинки. Держать стекло нужно за края, чтобы не оставлять на поверхности следов пальцев.
Подобным же образом подготавливают покровные стекла, помещая их после промывания в бюксы со спирт-эфиром. Протирка покровных стекол из-за их тонкости требует большой осторожности и соответствующих навыков.
Для промывания пипеток целесообразно иметь специальное приспособление, изображенное на рис. 55. Главную трубку с помощью переходного резинового шланга надевают на водопроводный кран, а на отводные трубки, также снабженные резиновыми муфточками,   — пипетки. Открыв кран, производят их промывание под напором, после чего опускают на несколько часов в цилиндр, заполненный раствором бихромата калия (на дно цилиндра обязательно нужно положить стеклянную вату, чтобы предупредить откалывание носиков у пипеток). После этого пипетки вновь тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и помещают в сушильный шкаф.
Следует принять за правило   —  не оставлять использованную посуду длительное время без промывания. Если нет возможности ее тут же окончательно вымыть, то необходимо ополоснуть и залить водой. Для удаления засохших реактивов требуется значительно больше усилий, а иногда их вовсе невозможно отмыть.

ИНСТРУМЕНТЫ

В повседневной работе лаборанту необходимо иметь набор инструментов: ножницы с прямыми браншами, средние и малые (глазные); пинцеты разных размеров и образцов: анатомические (концы браншей плоские с насечками), хирургические (концы с выступами), специальные (с тонкими изогнутыми концами); скальпели средние и малые (глазные), препаровальные иглы тонкие прямые или изогнутые с ручкой (применяются для накалывания объектов при фиксации, расправления свернувшихся срезов, переноса их из одной чашечки в другую и т. д.); стеклянные крючки для вылавливания и переноса срезов; кровоостанавливающие зажимы для пережимания сосудов и захвата тканей при вскрытии животных; корнцанг  — зажим с длинными ручками   —  для извлечения предметных стекол из банок со спирт-эфиром, а также для захвата мелких лабораторных животных; шпатели   —  металлические или пластмассовые прямые и изогнутые лопаточки для переноса срезов и кусочков тканей, взятия различных сыпучих веществ;
шприцы различной вместимости для инъекций красителей при прижизненной окраске тканей и других процедур.
За инструментом необходим тщательный уход. После применения его следует сразу же мыть (если нужно, очищать) и насухо вытирать (или высушивать в сушильном шкафу).
Хранить инструменты следует в определенном месте. Эго облегчает их нахождение и экономит рабочее время.
Лаборанту необходимо также иметь спиртовку, небольшую мягкую волосяную кисточку (для снятия срезов с микротомного ножа), иголку, нитки и плотную бумагу для этикетировки материала, карандаши для письма по стеклу, фильтровальную и индикаторную (для определения pH раствора) бумагу. Для вырезания кусочков из органов необходимы также лезвия безопасной бритвы и доска, пластиковая или деревянная, размером 40x25 см.
Каждый лаборант должен иметь несколько тетрадей для записей. Основная тетрадь служит для записей освоенных и осваиваемых методик обработки материала, ибо, несмотря на наличие методических руководств, у каждого лаборанта в процессе работы появляются свои наблюдения, вызывающие порой дополнения или некоторые видоизменения отдельных этапов обработки.
У лаборантов, работающих с экспериментальным материалом, должна быть тетрадь (вернее, книга), в которую записывают протокол эксперимента (вид и порядковый номер животного, дата и характер эксперимента, дневник наблюдений, дата умерщвления, какой материал взят для исследования и в какие фиксаторы помещен). Единой формы протокольной тетради нет. Приводим одну из форм
(табл. 1).   

Таблица 1
Форма протокольной тетради



п/п

Дата
экспери
мента

Вид
животного

Масса

Характер
экспери
мента

Дневник
наблюдения

Дата
забоя

Материал

Фиксатор

1

20.05. 67 г.

Крыса

170 г

Перерезка блуждающего нерва

Послеоперационное течение без осложнений

25.05. 67 г.

Печень
Сердце
Почка

Формалин
Карнуа
Буэна

Следует помнить, что тщательная и своевременная запись в протокольную тетрадь   —  обязательное условие как для успешного и качественного гистологического исследования объекта, так и для общих научных выводов экспериментатора.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы практической урологии детского возраста »