Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Техника изготовления гистологических препаратов - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Хороший гистологический препарат должен отвечать следующим основным требованиям: 1) исследуемая ткань должна в максимальной степени сохранять свое прижизненное строение; 2) срез должен быть достаточно тонким и прозрачным (для того чтобы через него свободно проникали лучи проходящего света); 3) изучаемые микроструктуры должны отчетливо выделяться на общем фоне препарата.
Именно на обеспечение этих требований и направлены все усилия в процессе приготовления микроскопического препарата.
Первое из условий обеспечивается своевременным взятием и надлежащей фиксацией исследуемого материала, второе   —  качественным приготовлением и обработкой срезов, третье   —  соответствующей окраской изучаемых микроструктур.

Взятие материала для изготовления гистологических препаратов

Сбор материала является первым этапом в приготовлении гистологических препаратов, и от того, насколько правильно выполнена эта процедура, зависит успех всей работы. Существует несколько путей получения материала: 1) от животных, умерщвленных специально для этих целей; 2) от животных и людей в результате прижизненного оперативного иссечения кусочков тканей из органов живого организма (биопсия); 3) взятие материала от трупа.
Там, где возможно, следует предпочесть первые два способа, так как они позволяют приготовить препараты, наиболее полно отражающие прижизненное состояние микроструктур.
Качество трупного материала находится в прямой зависимости от времени, прошедшего с момента смерти организма, так как в органах и тканях очень скоро начинают развиваться посмертные изменения. Об этом следует постоянно помнить и по возможности стремиться к максимальному сокращению сроков взятия материала. В нашей стране вскрытие трупов людей разрешено не ранее чем через 12 ч после констатации смерти врачом. Лишь в отдельных случаях допускается более раннее вскрытие в присутствии комиссии, состоящей не менее чем из трех врачей (Приказ Министерства здравоохранения СССР № 667 от 15.10.70 г.).

Умерщвление экспериментальных животных

В лабораторной практике применяют ряд методов умерщвления экспериментальных животных: отсечение головы (декапитация), умерщвление при помощи наркоза, пропускание электрического тока через тело животного, введение в кровеносное русло воздуха (уколом в сердце или внутривенно) или в плевральную полость эфира (хлороформа).
Выбор метода диктуется видом животного и целями исследования, но наибольшее распространение в лабораторной практике получили первые два способа умерщвления.
Отсечение головы (декапитация) является основным способом умерщвления мелких лабораторных животных (лягушки, мыши, крысы) и осуществляется с помощью ножниц.
Для декапитации более крупных лабораторных животных (морские свинки, кролики, кошки, собаки) применяют специальные станки, в головной части которых имеется устройство с фиксацией головы и падающим на шею тяжелым ножом (гильотина).

Вскрытие лабораторных животных

После умерщвления тело животного быстро фиксируют в положении на спине. Лягушек, тритонов, мышей и других мелких лабораторных животных фиксируют на дощечках, восковых или пробковых пластинках (рис. 56), прикалывая за растянутые в стороны лапки. Для фиксации средних и крупных лабораторных животных используют специальные станки или же изготовленные для этих целей доски (оцинкованные или окрашенные с вбитыми по краям крючками или гвоздиками для привязывания конечностей).
Вскрытие лабораторного животного
Рис. 56.
Вскрытие лабораторного животного.

Техника вскрытия брюшной и грудной полостей для всех лабораторных животных одинакова. Однако у животных, имеющих шерстный покров, вначале следует иссечь достаточно широкий кожный лоскут, чтобы избежать загрязнения внутренних органов. Для этого, захватив и приподняв (с помощью хирургического пинцета) кожу нижней части стенки живота по средней линии, подрезают ножницами образовавшуюся складку по направлению к голове, срезая кожный лоскут на нужном протяжении.
Затем следует сменить ножницы (или очистить их от прилипшей шерсти) и удалить влажным тампоном шерсть, попавшую на образовавшуюся «дорожку».
Вскрытие брюшной полости. Нижнюю часть стенки живота приподнимают пинцетом по средней линии (чтобы не повредить органы), прорезают ножницами вход в брюшную полость, вводят туда одну из браншей (но обязательно тупую) и разрезают стенку кверху до грудины. Затем берут кровоостанавливающие зажимы, захватывают ими внутренние слои стенки живота вместе с брюшиной и отворачивают кнаружи, раскрывая брюшную полость.
Вскрытие грудной полости. Вскрытие производят двумя разрезами через реберные хрящи по обе стороны от грудины снизу вверх. Образовавшийся костнохрящевой лоскут удаляют.
У мелких лабораторных животных следует вскрыть одномоментно брюшную и грудную полости для обеспечения достаточно свободного доступа к внутренним органам, у крупных же вскрывать только ту полость, откуда необходимо брать органы для исследования.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы иммунологии »