Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Взятие и этикетирование материала - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Главными требованиями при взятии материала являются: максимальное сокращение сроков взятия, минимальное травмирование тканей, создание оптимальных условий для фиксации.
Первое и второе требования обеспечиваются хорошим освоением техники умерщвления и вскрытия, а также применением очень острых режущих инструментов (скальпель, бритва, ножницы).
При иссечении материала необходимо максимально бережно обращаться с тканями: участки органа, подвергшиеся травмированию (например, при зажиме пинцетом), не следует оставлять для исследования.
Инструмент для вскрытия и, особенно для взятия материала необходимо хранить отдельно, своевременно затачивать и не применять для других целей.
Благоприятные условия для фиксации создаются правильным выбором размера фиксируемого материала, ибо необходимо обеспечить равномерное и сравнительно быстрое проникновение фиксирующей жидкости во всю его толщину. Поэтому нужно вырезать кусочки толщиной не более 5  — 10 мм. Поперечный же и продольный размеры не имеют столь важного значения и определяются задачами исследования.
Следует помнить, что предупреждение исследуемого материала от высыхания является одним из важнейших условий. Поэтому производить умерщвление и вскрытие животных следует лишь после того, как подготовлено все необходимое для быстрой фиксации. Если подсыхание все же возможно, то исследуемый материал необходимо смачивать изотоническим раствором хлорида натрия, смачивание водой категорически воспрещается, так как в силу разности осмотического давления вода проникает в ткани и вызывает разрушение микроструктур.
Вырезание кусочков для фиксации является одним из ответственных этапов в приготовлении качественных микропрепаратов и в исследовательской практике и, как правило, должно производиться самим исследователем. Если же эту операцию выполняет лаборант, то он должен знать основные особенности анатомо-гистологического строения органов, чтобы правильно выбрать место и направление разреза, а также величину вырезаемого кусочка.
Так, если орган состоит из участков, различных по своему строению, необходимо производить разрез таким образом, чтобы все они попали в кусочек, а при невозможности   —  брать кусочки отдельно из каждого участка. Например, при взятии кусочков мозга человека или крупных лабораторных животных приходится вырезать участки из определенных отделов. Из почки можно вырезать один кусочек, охватывающий всю толщину органа от капсулы до лоханки, что обеспечивает попадание в него всех слоев. Если же орган имеет однородное строение (большинство желез, мышцы), то выбор места для вырезания кусочка не имеет большого значения.
Особые приемы требуются для взятия материала, имеющего строение пленок, и из полых мышечных органов, выстланных слизистой оболочкой, так как пленки в фиксирующей жидкости сморщиваются, а стенка полого органа после разрезания вследствие сокращения мышечной оболочки изгибается дугообразно слизистой оболочкой наружу (кишечник, пищевод, желудок, мочевой пузырь и т.д.). Поэтому, прежде чем брать такой материал, необходимо ванночку или стеклянную чашку с плоским дном залить расплавленным воском так, чтобы толщина покрытия равнялась 1,5  — 2 см, и дать ему остыть. Следует также приготовить иглы для накалывания (металлические из нержавеющего материала, стеклянные или растительные), фиксирующие жидкости и лишь после этого приступить к взятию материала.
Вместо восковых подушек для накалывания препаратов можно применять пробковые пластинки, которые для удаления из них танина (дубящее вещество) следует предварительно несколько раз прокипятить в воде и хранить в 70  — 80% спирте, а также кусочки картона.
Если необходимо приготовить гистологический препарат из стенки кишечника, иссекают нужный отрезок органа, ополаскивают его в изотоническом растворе хлорида натрия (чтобы не высохла серозная оболочка), разрезают вдоль (напротив брыжейки) и накалывают с помощью игл на восковую или пробковую подушку в расправленном состоянии слизистой оболочкой кверху. При расправлении нужно следить, чтобы не перерастянуть взятый кусочек, так как это приведет к искажению истинного взаимоотношения слоев и деформации тканей. Затем в чашку с воском наливают фиксирующую жидкость таким образом, чтобы струя не попадала на слизистую оболочку и чтобы весь материал был покрыт полностью. При накалывании на пробку ее опускают в сосуд с фиксирующей жидкостью вниз стороной, к которой прикреплен объект.
Подобным образом берут материал из стенки желудка и пищевода, а также объекты, имеющие пленочное строение (брыжейка, сальник, мозговые оболочки).
После 1/2-2 ч пребывания в фиксирующей жидкости обрабатываемый материал освобождают от игл, вырезают кусочек, выбрав нужный участок, и помещают в сосуд с фиксатором для продолжения фиксации.
Применяют и другой способ фиксации небольших полых органов   —  без разрезания их стенок. Для этого нужный отрезок органа перевязывают с одного конца, заполняют фиксирующей жидкостью и, перевязав противоположный конец, помещают в сосуд с фиксатором. Этим достигается более быстрое проникновение фиксирующей смеси в ткани органа (одновременно с двух сторон) и сохранение естественной формы органа.
Для того чтобы легче было ориентировать кусочки полых органов в продольно-поперечном направлении при заливке и приготовлении микропрепаратов, необходимо взять за правило вырезать их таким образом, чтобы стороны имели различную длину и чтобы при этом длинная сторона кусочка соответствовала длинной оси органа.
Взятие материала из легкого также имеет некоторые особенности, ибо легкое всегда содержит воздух и ткань его плавает, не погружаясь полностью в фиксирующую жидкость. Для полного погружения необходимо кусочек органа завернуть в марлю вместе с каким-либо грузом (стекло, фарфор, нержавеющий металл), а если нужно фиксировать долю или все легкое, то груз привязать к трахее или бронху (рис. 57).
При взятии материала из кости необходимо выпиливать кусочки мелкозубчатой пилой (костной или лобзиком). Это позволяет сохранить архитектуру исследуемой костной ткани.
Помимо гистологических препаратов в виде срезов, полученных с кусочков органов, следует упомянуть о мазках и отпечатках. Первые находят широкое применение при исследованиях костного мозга и периферической крови, вторые   —  паренхиматозных органов и эпителиальных покровов слизистых оболочек.

Рис. 57.
Фиксация тканей легкого и кишечника.

Общим и обязательным условием для приготовления
таких препаратов является наличие тщательно вымытых и обезжиренных предметных стекол, а для мазков еще и стекол с отшлифованными поперечными ребрами.
Приготовление мазков   —  см. с. 235.
Приготовление отпечатков: вырезают из исследуемого органа (селезенка, печень, лимфатический узел) небольшой кусочек, один из краев которого срезают лезвием так, чтобы поверхность его была как можно ровнее. Поскольку отпечаток должен быть достаточно тонок, необходимо сначала сделать несколько отпечатков на фильтровальной бумаге, а затем аккуратно произвести отпечатки органа на тщательно обезжиренном, чистом предметном стекле; для этого достаточно лишь легкого нажатия кусочком органа на поверхность стекла.
Приготовленные мазки и отпечатки подсушивают при комнатной температуре, после чего фиксируют и окрашивают по избранной методике.

Рис. 58.

Вырезание кусочков из пораженного участка органа.

Взятие материала от трупов людей с целью приготовления гистологических препаратов также производят по изложенным выше правилам. Имеющиеся же особенности в технике вскрытия, осмотра, протоколирования и др. изложены в специальных руководствах и не касаются непосредственно гистологической техники. Укажем лишь на некоторую особенность взятия материала из патологически измененных органов животных и человека.
Вырезать кусочек следует таким образом, чтобы в него попала зона перехода очага поражения в нормальный участок (рис. 58), с прилежащими территориями здоровой и измененной ткани, необходимо также взять отдельные кусочки из обоих участков.
Для того чтобы точно знать, какой материал взят для фиксации, от какого животного, из какого органа и когда, необходимо сразу же произвести его этикетировку. Наиболее распространенный способ   —  прошивание кусочков ниткой, на конце которой прикрепляется маленькая бирка из картона или плотной бумаги с обозначением простым карандашом номера животного (соответствующего протокольной тетради), даты взятия, названия органа, а также схемы ориентации кусочка. Если кусочек или орган не могут быть прошиты, то их перед погружением следует завернуть в марлю и перевязать ниткой, снабженной на конце этикеткой. Надпись на бирке необходимо делать только простым карандашом во избежание размывания при помещении в раствор.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы практической урологии детского возраста »