Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Ультратом - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Ультратом (основные принципы устройства и приготовления срезов)
Электронно-микроскопическая техника исследования биологических объектов с первых шагов столкнулась с трудностью получения достаточно тонких (10—30 нм) срезов изучаемых объектов. При большой толщине изображение одних структур как бы «накладывается» на изображение других и их изучение становится невозможным.
Преодолеть эту трудность позволяет техника ультратонкого резания. Для этой цели применяют специальные приборы — ультратомы. В нашей стране наибольшее распространение получили ультратомы Сумского завода и шведской фирмы «ЛКБ». Реже используют приборы австрийской фирмы «Рейхард» и чехословацкий прибор «Тесла» (рис. 73).
Главным принципом в работе большинства современных ультратомов является тепловое расширение металлического стержня, которое позволяет осуществлять микроподачу объекта к неподвижно закрепленному стеклянному ножу.
Ультратом
Рис. 73.
Ультратом.
1 — чугунная станина; 2 — микроскоп; 3— осветитель; 4 — несущий стержень; 5— столик для стеклянного ножа; 6 — пульт управления.

Приготовлению ультратонких срезов предшествует ряд подготовительных операций:

  1. изготовление стеклянных ножей; их наиболее широко применяют в электронно-микроскопических лабораториях; изготавливают ножи непосредственно перед ультратомией на приборе «ножеделателе» из полоски стекла определенного сорта;
  2. приготовление опорных сеток для ультратонких срезов — нанесение на сетку пленки из формвара, коллодия, углерода;

3) подготовка к ультратомии. Этот этап носит название заточки блока: участку объекта, подлежащему резке на ультратоме, на специальном приборе пирамитоме придают форму четырехгранной усеченной пирамиды (с вершиной, имеющей форму трапеции).
Далее наступает наиболее ответственный момент — момент изготовления первого ультратонкого среза объекта. Для этого необходимо:

  1. включить ультратом;
  2. закрепить блок в блокодержателе;
  3. смонтировать на ноже ванночку для жидкости, на поверхность которой собирают срезы, закрепить нож в приборе в нужном положении;
  4. подвести режущую кромку ножа максимально близко к поверхности верхней грани заточенного блока (обычно это достигается методом «высвечивания блика» от осветителя ультратома на гладкой поверхности верхней грани блока);
  5. заполнить ванночку ножа жидкостью (чаще всего дистиллированной водой), вручную получить первый полный срез объекта;
  6. включить автоматический режим работы прибора на необходимую толщину срезов;
  7. полученные срезы смонтировать на опорную сетку и, осушив фильтром, поместить в контейнер для транспортировки и хранения сеток с ультратонкими срезами.

Полученные ультратонкие срезы требуют дальнейшей обработки (как и светооптические) с целью выявления необходимых структур объекта исследования. Для этого ультратонкие срезы на опорных сетках обрабатывают определенными растворами красителей. Наиболее часто для этой цели используют растворы свинца и уранилацетата.
В ряде случаев успех исследования зависит от сопоставления данных электронно-микроскопического и светооптического изучения, причем одних и тех же структур объекта. Для этой цели приготавливают полутонкие срезы толщиной 1—2 мкм (1000—2000 нм). Их можно получить как на ультратоме, так и на пирамитоме. Затем срезы монтируют на обычных предметных стеклах и окрашивают в соответствии с задачами исследования. Наиболее распространенной является методика окрашивания полутонких срезов водным раствором 1% метилового синего и 1% бората натрия (бура) (1 : 1).
Следует подчеркнуть, что выше изложены лишь общие принципы подготовки материала к исследованию в электронном микроскопе. Для более углубленного ознакомления с методами электронной микроскопии необходимо обратиться к специальной литературе. На наш взгляд, достаточно квалифицированно и в то же время доступно этот вопрос освещен в книге Б. Уикли «Электронная микроскопия для начинающего» (М., 1975).



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы педиатрии »