Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Заключение в водные среды - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

В тех случаях, когда по условиям обработки препарат не может соприкасаться со спиртами, ксилолом и подобными растворами, его заключают в среду, содержащую воду (например, при окраске среза на жир проведение через спирты вызывает его растворение и вымывание). Как уже упоминалось, к таким средам относят глицерин, глицерин- желатин, гуммисироп Апати. Они обладают просветляющими свойствами.
Методика. Срез извлекают из воды, удаляют лишнюю влагу (обсушивая стекло вокруг препарата с помощью фильтровальной бумаги), накапывают несколько капель глицерина, теплого глицерин-желатина или гуммисиропа и накрывают покровным стеклом, как обычно. Гуммисироп и глицерин-желатин быстро загустевают, поэтому следует максимально сократить время между накалыванием раствора и покрытием препарата стеклом (густая среда плохо растекается, образуется толстый слой, что ухудшает оптические свойства препарата).
Так как нанесение глицерина на препарат, извлеченный непосредственно из воды, приводит к его сжатию, рекомендуется срезы из нежных тканей помещать вначале в промежуточные смеси (глицерин и вода в соотношении 1:5, 1:3 или 1 :1) и лишь затем заключать в чистый глицерин.
Следует помнить, что глицерин плохо сохраняет многие краски, в том числе и гематоксилин, поэтому употреблять его нужно по возможности реже.
Чаще применяют глицерин-желатин и гуммисироп.
Гуммисироп приготавливают, растворяя в 50 мл дистиллированной воды 50 г чистого гуммиарабика и 50 г сахара (при этом сосуд помещают в водяную баню). Для консервации смеси добавляют 0,5 г тимола.
Для приготовления глицерин-желатина берут 41 мл дистиллированной воды, засыпают 7 г желатина и оставляют для набухания в течение нескольких часов. Затем прибавляют 50 мл глицерина и 1 г концентрированной карболовой кислоты, нагревают в течение 10—15 мин, постоянно помешивая, после чего отфильтровывают через обычную или стеклянную вату. При комнатной температуре смесь представляет собой плотную массу, поэтому перед употреблением ее нужно подогреть в водной бане или термостате при 56—<60 °С.
После заключения препаратов в жидкие незастывающие среды (глицерин, гуммисироп и т. д.) необходимо производить их окантовку во избежание высыхания среды и сползания покровных стекол. Для этой цели используют различные лаки, парафин, целлоидин и др.
Хорошие результаты дает смесь ланолина с канифолью: 20 частей безводного ланолина умеренно нагревают в фарфоровой чашке в течение 15—30 мин (для удаления возможных остатков воды). Затем, продолжая нагревать добавляют 80 частей канифоли (по кусочкам) и растирают до получения прозрачной желтовато-коричневой массы. Полученную смесь разливают в формочки (жестяные баночки из-под вазелина и т. д.), где она застывает. Нагревать надо осторожно, так как смесь огнеопасна.
Препарат, подлежащий окантовке, тщательно вытирают, чтобы среда для заключения не выступала за края покровного стекла. После этого нагревают прямоугольно изогнутую металлическую проволоку (стеклянную палочку, глазной скальпель), отделяют кусочек массы и наносят по маленькой капле на углы покровного стекла, фиксируя его к предметному. Затем заделывают непрерывным кантом все стороны покровного стекла.
Если препарат не требует длительного хранения, то его обычно окантовывают парафином. Горячий парафин наносят кисточкой на край покровного стекла.
При окрашивании и заключении препарата необходимо придерживаться следующего правила: вначале окрасить и заключить один срез, проверить в микроскопе его качество и лишь после этого приступить к дальнейшей обработке остальных препаратов. Такой порядок позволяет своевременно устранить возможные погрешности (плохое окрашивание, недостаточное обезвоживание, загрязнение и др.) и обеспечить изготовление качественных препаратов.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы педиатрии »