Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Для морфологического исследования клеток крови и подсчета лейкоцитарной формулы приготавливают мазок крови. Правильно сделанный и хорошо окрашенный мазок является совершенно необходимым условием для получения достоверных результатов при изучении морфологических особенностей кровяных клеток и подсчете лейкоцитарной формулы. Мазок крови должен отвечать следующим требованиям: 1) начинаться на 1 см от начала предметного стекла и кончаться на расстоянии 2—3 см от его противоположного края, общая длина мазка должна охватывать 1/2-3/4 стекла; 2) быть равномерной толщины, а не волнообразным, хороший мазок толще всего вначале, затем постепенно истончается и заканчивается в виде следа («вид щеточки»); 3) слой крови не должен достигать краев стекла, между ним и краем стекла всегда должно быть несколько миллиметров свободного пространства.
Мазки, превышающие 3/4 длины предметного стекла, бывают очень толстыми. В них эритроциты лежат густым слоем, прижаты друг к другу и образуют монетные столбики, что мешает исследователю рассмотреть их морфологию. Мазки короче Vi предметного стекла слишком тонкие: лейкоциты лежат очень редко и деформированы. Если отсутствует свободный от мазка край предметного стекла (что бывает при большом диаметре шлифовального стекла), то большие клетки перемещаются к краю мазка, вследствие чего неравномерно распределяются в нем.
В волнообразном мазке распределение клеток крови также неправильное — толстые участки содержат больше лимфоцитов, тонкие — больше моноцитов и сегментоядерных клеток.
Техника приготовления мазка. Предметные стекла, на которых будут делаться мазки крови, должна быть хорошо обезжирены и промыты. Для этой цели их помещают в раствор хромпика (смесь К2Сг2О7 + крепкая Н2 SО4) на 24 ч (с хромпиком надо обращаться крайне осторожно, так как брызги от него могут прожечь одежду, чулки). Затем стекла промывают под проточной водой в течение 24 ч, протирают насухо и кладут в банку со смесью спирт— эфир. Перед употреблением их сушат. К капле крови прикасаются предметным стеклом так, чтобы оно не касалось пальца. Капля крови переходит на стекло. Для того чтобы мазок был величиной в 1/2-3/4 предметного стекла, капля должна быть диаметром 2—5 мм. Предметное стекло берут в левую руку большим, указательным и средним пальцами так, чтобы капля крови была сверху. Шлифованное стекло, которым будут делать мазок, ставят под углом 30—45° на расстоянии 1—2 мм перед каплей, держа его большим и указательным пальцами правой руки. Шлифованное стекло сдвигают назад так, чтобы оно коснулось капли крови и капля растеклась в углу между шлифованным и предметным стеклом (движение назад помогает также убрать лишнюю кровь, если капля была слишком большой). Затем быстрым движением руки вперед делают мазок. Нужно, чтобы при приготовлении мазка большой и указательный пальцы правой руки скользили по краям предметного стекла и создавали необходимую опору для равномерного наложения слоя крови. Шлифованное стекло должно быть уже, чем предметное, чтобы края предметного стекла были свободны от мазка.
Если ширина шлифованного стекла такая же, как и предметного, то углы у шлифованного стекла отламывают, укорачивая на 1—2 мм. Шлифованное стекло можно заменить покровным.
Приготовление хорошего мазка крови, хотя и не является трудным делом, требует определенного навыка. Следует помнить, что неверно приготовленный мазок приводит к грубым ошибкам в результатах исследований. Качество мазка является до некоторой степени «аттестатом» работы лаборанта.
Окрашивание мазков крови. Приготовленные указанным способом мазки крови подсушивают, затем фиксируют с помощью метилового спирта (3—5 мин) или абсолютного спирта (100%) (10—15 мин) или ацетона (5 мин). Наилучшие результаты дает все же фиксация мазков метиловым спиртом* . Фиксирующие жидкости денатурируют белки клетки при сохранении их прижизненной структуры, а также закрепляют мазки на стеклах. Нефиксированные мазки легко смываются.

* Следует помнить, что метиловый спирт является сильнодействующим ядом, а ацетон—легковоспламеняющейся и взрывоопасной жидкостью, из-за чего их нельзя оставлять на рабочем месте (до и после употребления), посуда должна быть наглядно этикетирована и хранить раствор нужно в сейфе.

Фиксирующие жидкости наливают в достаточном количестве на стекла или стекла с мазками погружают в банку с фиксатором. После фиксации и высушивания мазков приступают к их окрашиванию. Обычно применяют метод Романовского—Гимзы. В лабораториях всегда имеется готовый раствор разведенного красителя. Краситель Романовского—Гимзы состоит из щелочной (азур II) и кислой (эозин) частей. Азур II окрашивает структуры клеток в ярко-синий цвет, а эозин в розовокрасный. Щелочные части клеток связываются и окрашиваются кислыми красителями, а кислые — щелочными.
Рабочий раствор красителя получают разведением готового раствора дистиллированной водой (1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). Для хорошего окрашивания мазка имеют значение качество красителя, реакция и температура воды. Очень важно, чтобы дистиллированная вода, в которой растворяют краситель, имела нейтральную реакцию. Если реакция кислая, то слабым действием щелочного элемента красителя белые кровяные элементы окрашиваются плохо, а препарат становится красным. Если вода имеет щелочную реакцию, то слабеет действие кислого элемента краски, лейкоциты окрашиваются слишком интенсивно и препарат делается синим. Реакцию воды проверяют посредством гематоксилиновой пробы. В 4—5 мл воды бросают крупинку гематоксилина. Если вода имеет целочную реакцию, то окрасится ранее 3-й минуты. Если окрашивание наблюдается через 5 мин или совсем не происходит, то вода имеет кислую реакцию. Если же вода окрашивается через 1—4 мин в розово-фиолетовый цвет, то она нейтральна и годна к употреблению. При кислой реакции воды в нее прибавляют по каплям 1% раствор карбоната натрия, пока гематоксилиновая проба не станет характерной для нейтральной воды. При щелочной реакции добавляют по каплям 1% раствор уксусной кислоты. Для того чтобы правильно оценить результаты пробы, стаканчик с водой надо ставить на лист белой бумаги.
Окраску мазков производят по методу Романовского—Гимзы следующим образом. Перед окраской нужно предварительно проверить качество красителей, окрасив и просмотрев несколько мазков для того чтобы установить время, лучшее для окраски. Рабочий раствор краски готовят непосредственно перед окраской. Препарат помещают мазком вниз на 2 стеклянные (деревянные) палочки, положенные на дно чашки Петри. Краску подливают под препарат. Окрашивают 20—40 минут. Затем мазок промывают под струей воды, сушат и микроскопируют.
При окраске мазков крови по методу Романовского—Гимзы эритроциты окрашиваются в бледно-розовый цвет, ядра клеток — в сине-фиолетовый, гранулы эозинофилов — в ярко-красный, базофилов — в синий, цитоплазма лимфоцитов и моноцитов — в голубой цвет.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы иммунологии »