Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера (фиксация по Буэну)

Метод позволяет отчетливо выявлять эластические волокна соединительной ткани. Можно использовать с одинаково хорошим результатом различные фиксаторы.
Раствор красителя: 1г орсеина растворяют в 100 мл 70° спирта. К этому раствору добавляют 1мл аптечной хлористоводородной кислоты (25%). Раствор пригоден к употреблению сразу после приготовления. Можно повторно использовать раствор, но больше 1 нед хранить его не следует.

Окрашивание

  1. Из дистиллированной воды срезы переносят в раствор красителя на 40—60 мин.
  2. Ополаскивают срезы в дистиллированной воде и 96% спирте.
  3. Дифференцируют в абсолютном спирте под контролем микроскопа.

При этом фон почти полностью обесцвечивается. После дифференцирования срезы просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам. Если дифференцировка в абсолютном этиловом спирте не дает желаемых результатов, можно применить безводный метиловый спирт.
Время окрашивания тотальных препаратов (например, серозные оболочки) необходимо увеличить до 3—6,12 и даже 24 ч.
Для окрашивания ядер клеток срезы после окрашивания в растворе орсеина ополаскивают дистиллированной водой и подкрашивают гемалауном или другим гематоксилином.
Если материал был фиксирован в жидкости Буэна, ядра не докрашиваются, так как они и без того имеют красивый фиолетовый цвет.
Результат. Эластические волокна окрашены в коричнево-красный цвет, фон имеет слабо-розовый оттенок. Плохие результаты окрашивания свидетельствуют о плохом качестве орсеина. Часто приходится определять время окрашивания опытным путем.

Окрашивание эластических волокон резорцин-фуксином (метод Вейгерта) (фиксация — 12% формалин)

Рабочие растворы

Первый раствор: 0,5 г основного фуксина и 1 г резорцина растворяют в 50мл дистиллированной воды. Второй раствор: 2 г хлорида железа (3 + ) растворяют в 10 мл дистиллированной воды.
Первый раствор нагревают в эрленмейеровской колбе до кипения и постепенно прибавляют к нему второй раствор. Смесь, осторожно взбалтывая, осторожно кипятят в течение 5 мин, затем охлаждают и профильтровывают. Фильтрат выливают. Осадок вместе с фильтром после предварительного подсыхания переносят в чашку, заливают 70 мл 96% спирта и осторожно нагревают до кипения на водяной бане для растворения осадка. После этого остатки осадка на фильтре соскабливают в спирт. Раствор охлаждают, добавляют к нему 1 мл аптечной хлористоводородной кислоты (25%) и профильтровывают. Раствор можно применять сразу после приготовления. Он может храниться несколько месяцев.

Окрашивание

Из 80% спирта срезы переносят в раствор красителя на 20—30 мин.

  1. Промывают срезы в проточной воде 1—2 мин.
  2. Для обесцвечивания фона срезы дифференцируют в 96% спирте (под контролем микроскопа).
  3. Обезвоживают в абсолютном спирте, просветляют ксилолом, заключают в канадский бальзам. Нельзя использовать карбол-ксилол, так как карболовая кислота вызывает обесцвечивание.

Результат. Эластические волокна окрашиваются в черно-синий цвет.
Для подкрашивания ядер до окрашивания резорцин- фуксином используют квасцовый кармин или фуксинсерную кислоту.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы педиатрии »