Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Выявление аргирофильных (ретикулиновых) волокон (фиксация —15% формалин)    

Ретикулиновые волокна импрегнируют серебром (само название «аргирофильные» говорит о сродстве этих волокон к солям серебра). После серебрения ретикулиновые волокна приобретают черный или коричнево-черный цвет.
Для успеха импрегнации при всех способах серебрения срезов необходимо точно соблюдать прописи, а также чистоту реактивов и посуды. Необходимо иметь отдельную стеклянную посуду для импрегнации. Каждый стаканчик или пипетку надо использовать только для одних и тех же растворов. Металлические приборы при серебрении употреблять нельзя.
Перед работой посуду тщательно обрабатывают смесью бихромата калия с серной кислотой, промывают в проточной воде в течение 1 ч и ополаскивают дистиллированной водой. После работы посуду также тщательно моют и ополаскивают дистиллированной водой. Особенно внимательно следует обращаться со стеклянной палочкой для переноса срезов, если для каждого раствора нет специальной палочки. Хранить такую палочку надо в дистиллированной воде и перед употреблением вытирать и ополаскивать чистой дистиллированной водой. Кристаллический нитрат серебра должен быть совершенно белым (серебро розового, серого и черного цвета непригодно к употреблению).
Для приготовления растворов всегда пользуются свежей дистиллированной водой.

Рабочие растворы

Раствор аммиаката серебра. К находящимся в посуде с притертой пробкой 10 мл 10% раствора нитрата серебра прибавляют 2 мл 10% гидроксида калия. В результате образуется темно-бурый осадок гидрата оксида серебра. Затем к этой смеси, одновременно взбалтывая, добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до тех пор, пока осадок не исчезнет. Затем добавлением дистиллированной воды объем раствора удваивают, фильтруют.
Раствор перманганата калия 1%.
Раствор метабисульфита калия 2—3%.
Раствор железоаммониевых квасцов 2% (пригодны только прозрачные лиловые кристаллы).
Кроме того, необходимо иметь 10% раствор формалина, 0,1% раствор хлорида золота, 1% раствор тиосульфата натрия.

Техника импрегнации

Срезы освобождают от парафина, помещают на 1—2 мин в раствор перманганата калия, а затем 5 мин промывают в водопроводной воде. После этого срезы переносят на 1 мин в раствор метабисульфита калия (для обесцвечивания) и затем снова промывают в проточной водопроводной воде в течение 5—10 мин.
Далее необходимо подержать срезы 1 мин в 2°/о растворе железоаммониевых квасцов и затем в течение 3—5 мин промыть сначала в водопроводной воде, а затем в двух порциях дистиллированной воды по нескольку мин. Срезы переносят в раствор аммиаката серебра на 1 мин, после чего очень быстро ополаскивают дистиллированной водой.
Затем срезы на 5 мин помещают в раствор формалина, который разбавляют водопроводной водой в соотношении 1 : 9, промывают водопроводной водой в течение 5 мин.
После промывки срезы сразу погружают в раствор хлорида золота на 10 мин. Далее ополаскивают их дистиллированной водой и для восстановления серебра погружают на 1 мин в раствор метабисульфита калия.
Следующая манипуляция — помещение срезов в 1 °7о раствор тиосульфата натрия на 1 мин (не дольше!) для фиксации. После этого необходимо основательное промывание водопроводной водой. Проводят срезы через спирты, ксилол и заключают в бальзам.
Результат. Ретикулиновые волокна приобретают интенсивно черный цвет, коллагеновые —коричневый или черный, ядра клеток — коричневый цвет.

Выявление элементов нервной системы

Для выявления элементов центральной и периферической нервной системы обычно применяют различные способы импрегнации (серебром, золотом, осмием). Окрашивать тела нервных клеток и их отростки можно и метиленовым синим. Все эти методы имеют тот существенный недостаток, что являются эмпирическими. Поэтому лаборанту всегда надо быть готовым к тому, что даже при строгом соблюдении всех условий импрегнации она часто не дает желаемого результата. Здесь имеют значение многие факторы, которые иногда трудно учесть (качество фиксации, реакция и качество воды, свойства нервной ткани и т. д.).
Существует много модификаций импрегнации нервных клеток и волокон. Наиболее распространенным является метод Бильшовского — Грос.
Окрашивание хроматофильного вещества в цитоплазме нервных клеток (глыбки Ниссля) производят по методу, предложенному Нисслем. Мякотные оболочки нервных волокон окрашивают по методу Шпильмейера или осмируют. Элементы глии выявляют специальными методами:

1) методом Кахала (выявление макроглии); 2) методом Белецкого (выявление микроглии).

Кроме указанных методов, всегда надо параллельно окрашивать срезы для обзорных целей гематоксилин- эозином, что позволяет увидеть взаимоотношения нервных элементов с окружающими тканями. Нервные клетки могут быть окрашены и другими методами, употребляемыми в гистологической технике.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы практической урологии детского возраста »