Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову (импрегнация нитратом серебра)
Данный метод позволяет не только выявить сосудистую сеть, но и определить строение сосудистой стенки и принадлежность сосудов к определенному звену микроциркуляторного русла, а также взаимоотношение сосудов с окружающими тканями.
Прежде чем приступить к импрегнации, изучаемый материал фиксируют в 12% растворе нейтрального формалина (ткани животных — не менее 7 сут, ткани человека — не менее 14 сут).
Из кусочков тканей приготавливают срезы на замораживающем микротоме (толщиной 20 мкм и более в зависимости от целей исследования).
Пленочный материал, состоящий из тонких пленок (брюшина и т.д.), импрегнируют целиком (тотально).
Толстые пленки предварительно расслаивают под бинокулярной лупой с помощью глазного скальпеля и пинцета.
Подготовка посуды — см. с. 145.

Рабочие растворы

Раствор нейтрального формалина 12% Раствор обычного (кислого) формалина 1%
Раствор обычного (кислого) формалина 0,5% (Все растворы формалина можно готовить заранее, так как они выдерживают длительное хранение.)
Раствор нитрата серебра 20% (приготовление и условия хранения см. с.249).
Раствор аммиаката серебра (готовят малыми порциями непосредственно перед помещением объекта, см. с.249).
Аммиачная вода — 25% водный раствор аммиака (можно готовить перед началом импрегнации и держать в плотно закрытой посуде); разводят дистиллированной водой 1:1.
Спирт 60%.
Дистиллированная вода.
Водопроводная вода для удаления хлоридов (должна отстаиваться в сосуде не менее 1 сут).
Количество растворов определяется объемом предстоящей работы.

Техника импрегнации

  1. Промыть срезы в проточной воде 2 ч с последующим двукратным ополаскиванием в дистиллированной воде.
  2. Поместить в 60% спирт на 30 мин с последующим двукратным ополаскиванием в дистиллированной воде.
  3. Перенести в 20% раствор нитрата серебра на 1 ч (обязательно в темноте!) в термостат при температуре 37°С (в случае отсутствия термостата обернуть сосуд в черную бумагу и поставить под настольную лампу).
  4. Промыть в дистиллированной воде 3 мин.
  5. Провести через четыре стаканчика с 1% кислым формалином (если раствор в четвертом стаканчике еще мутнеет, то необходимо продолжить проведение до полной прозрачности последней порции).
  6. Просушить фильтровальной бумагой.
  7. Поместить в раствор аммиаката серебра на 2—3 мин.
  8. Перенести объект в 0,5% кислый формалин (подогретый до комнатной температуры) и держать до появления желто-коричневой окраски.
  9. Промыть в 25% растворе аммиака 3—5 мин.
  10. Промыть в дистиллированной воде до исчезновения запаха аммиака.
  11. Провести через батарею спиртов возрастающей концентрации (70%, 80%, 96% I, 96% II), карбол-ксилол и заключить в бальзам.

Результат: импрегнируемые структуры окрашены в коричневый цвет.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы иммунологии »