Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Выявление (суммарное) белков - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Белки — природные полимеры аминокислот, входящие в состав подавляющего большинства клеточных и тканевых структур. С ним связаны пластические, энергетические, транспортные и ферментные процессы. Поэтому гистохимическое их выявление имеет важное значение для характеристики изменений, происходящих в клетках и тканях (как в норме, так и в патологии).
Из существующих методов наибольшее распространение получил метод суммарного выявления белков по Даниелли, который удачно модифицирован советским гистохимиком М. Г. Шубичем (1963).

Выявление белков (суммарное) по методу Даниелли (в модификации М. Г. Шубина)

(фиксаторы Карнуа, Бродского, 10% нейтральный формалин)
Сущность метода состоит в том, что гистологические препараты сначала подвергают действию трис-диазония розанилина (основного фуксина), который реагирует с многими аминокислотными остатками тканевых белков. Для усиления окраски их обрабатывают Н-кислотой, которая соединяется с реакционноспособными группами трисдиазония, уже связанного с белками. Интенсивность окраски определяется концентрацией белков в той или иной гистологической структуре.
Рабочие растворы
Двунормальный (2N) раствор хлористоводородной кислоты. К 20мл концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19) добавляют 80 мл дистиллированной воды.
Раствор основного фуксина. Растворяют 4 г основного фуксина (марка «для фуксинсернистой кислоты») в 100 мл 2N раствора хлористоводородной кислоты (раствор можно хранить длительное время).
Водный раствор нитрита натрия.
Растворяют 4 г нитрита натрия (NaО2) в 100 мл дистиллированной воды (раствор можно хранить в холодильнике).
Основной раствор трисдиазония. В пробирку наливают 2 мл раствора основного фуксина и затем по каплям при постоянном покачивании пробирки добавляют 2 мл раствора нитрата натрия. Смесь в течение 30—60 с приобретает соломенно-желтый цвет.
Рабочий раствор трис-диазония. Добавляют 0,5 мл основного раствора трис-диазония к 100 мл дистиллированной воды, предварительно забуференной добавлением 20 мл ацетатвероналового или другого буфера pH 7,9 (рабочий раствор трис-диазония сохраняется в течение нескольких часов).
Насыщенный раствор Н-кислоты. Растворяют 1 г Н-кислоты в 50 мл ацетатвероналового или другого буфера pH 9,2.

Метод окрашивания (парафиновые срезы)

  1. Довести срезы до воды.
  2. Поместить в рабочий раствор трис-диазония на 10—20 мин (более точное время инкубации подбирают опытным путем).
  3. Промыть в дистиллированной воде.
  4. Промыть в трех сменах ацетатвероналового или другого буфера pH 9,2 по 2 мин в каждой.
  5. Перенести в насыщенный раствор Н-кислоты на 15 мин.
  6. Тщательно промыть в дистиллированной воде.
  7. Обезвредить, просветлить и заключить в бальзам. Результат. Гистологические структуры окрашиваются в красно-фиолетовый цвет различной интенсивности.


 
« Осложнения аппендэктомии   Основы педиатрии »