Начало >> Статьи >> Архивы >> Основы гистологии

Окрашивание жиров и липидов, выявление железа - Основы гистологии

Оглавление
Основы гистологии
Краткий очерк истории гистологии
Цитология
Клетка
Цитоплазма
Ядро
Жизнедеятельность клетки
Деление клеток
Эпителиальная ткань
Соединительная ткань
Кровь
Рыхлая неоформленная соединительная ткань
Ретикулярная ткань
Плотная волокнистая соединительная ткань
Хрящевая ткань
Костная ткань
Мышечная ткань
Нервная ткань
Нервные волокна и окончания
Сердечно-сосудистая система
Органы кроветворения
Пищеварительная система
Железы
Кожа
Выделительная система
Органы дыхания
Нервная система, органы чувств
Половая система
Организация рабочего места лаборанта-гистолога
Техника изготовления гистологических препаратов
Взятие и этикетирование материала
Задачи и правила фиксации
Фиксирующие средства
Промывание, обезвоживание гистологического материала
Пропитывание и заливка гистологического материала
Подготовка тканей для электронно-микроскопического исследования
Микротомы и работа с ними
Микротом замораживающий, охлаждающий столик
Уход за микротомом, микротом-криостат
Микротомные ножи
Ультратом
Приготовление срезов из парафиновых блоков
Приготовление целлоидиновых срезов
Окрашивание и заключение срезов
Просветление и заключение срезов, заключение в смолы
Заключение в водные среды
Методы окрашивания препаратов
Приготовление и окрашивание мазка крови для подсчета лейкоцитарной формулы
Окрашивание ткани по методу ван-Гизона, Маллори
Окрашивание соединительной ткани азур эозином
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера, резорцин-фуксином
Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы
Импрегнация по методу Бильшовского-Грос
Выявление нервных элементов методом прижизненного окрашивания метиленовым синим
Импрегнация элементов макроглии
Безынъекционный метод изучения сосудов по В. В. Куприянову
Обработка и окрашивание костной ткани, декальцинация, окрашивание
Гистохимические методы
Выявление (суммарное) белков
Выявление полисахаридов
Выявление и идентификация кислых мукополисахаридов
Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов)
Окрашивание жиров и липидов, выявление железа
Гистохимия нервной системы
Гистохимия ферментов
Применение изотопов в гистологии
Приготовление пленчатых препаратов
Обработка биопсийного материала

Термин «липиды» собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества, экстрагируемые растворителями жиров (бензин, эфир, хлороформ и др.).
В основе методов окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды.
Окрашивание Суданом III. Является наиболее распространенным методом выявления жира.
Приготовление раствора красителя. В 100 мл горячего 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г порошка Судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при 58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
Метод. 1. Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в 50% спирт.

  1. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15—30 мин (бюксы следует закрывать, так как испарение спирта приводит к выпадению осадков красителя).
  2. Быстро ополаскивают в 50% спирте.
  3. Промывают в дистиллированной воде.
  4. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
  5. Промывают и заключают в желатин или глицерин-желатин (обезвоживание в спиртах экстрагирует жиры).


Результат. Жировые вещества интенсивно оранжевого цвета, ядра —синие. Препараты выцветают сравнительно скоро, поэтому откладывать исследование не рекомендуется.
Окраска шарлахом. Красители: в смесь из 50мл ацетона и 50 мл 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г шарлаха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.
Метод. 1. Замороженные срезы из свежей или фиксированной в формалине ткани помещают в 50% спирт на 2—4 мин.

  1. Окрашивают в растворе красителя 2—3 мин.
  2. Быстро ополаскивают в 70% спирте.
  3. Промывают в воде.
  4. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
  5. Промывают в воде и заключают в глицерин или глицерин-желатин.

Результат. Жировые вещества оранжево-красные, ядра — синие.

Выявление железа методом с образованием турнбулевого синего

Железо может находиться в тканях как в свободном виде (неорганическое), так и в химической связи с молекулами органических веществ (гемоглобин эритроцитов). Гистохимическое исследование тканей на содержание железа производят при изучении пигментного обмена, особенно при заболеваниях, связанных с гемолитическими процессами в крови.
Метод основан на химической реакции между сульфидом железа и гексациано-ферратом калия, в результате которой образуется турнбулевый синий. Реакция специфична, надежна, препараты стойкие.
Метод (фиксация формалином, абсолютным спиртом, срезы замороженные, парафиновые, целлоидиновые).

  1. Поместить срезы из дистиллированной воды в 10% раствор сульфида аммония на 1—24 ч.
  2. Тщательно отмыть в нескольких порциях дистиллированной воды.
  3. Поместить в свежеприготовленную смесь из равных частей 20% раствора гексациано-феррата (3) калия и 1% раствора хлористоводородной кислоты на 10—20 мин.
  4. Тщательно ополоснуть в дистиллированной воде.
  5. Подкрасить ядра кармином.
  6. Промыть, обезводить, просветлить, заключить в бальзам.

Результат. Участки, содержащие железо, окрашены в интенсивно-синий цвет, ядра красные.
Примечание. Необходимо исключить применение в процессе работы металлических предметов. Посуду следует тщательно промыть слабой хлористоводородной кислотой, а затем дистиллированной водой, полученной из стеклянного аппарата (чтобы исключить следы металла). Раствор сульфида аммония должен иметь чистый желтый цвет и сохраняться не дольше 2—3 нед в хорошо закрывающейся посуде. При доступе воздуха появляется коричнево-желтое окрашивание, свидетельствующее об инактивации раствора.



 
« Осложнения аппендэктомии   Основы иммунологии »