Начало >> Статьи >> Архивы >> Практические навыки педиатра

Экспресс-методы выявления наследственных биохимических дефектов - Практические навыки педиатра

Оглавление
Практические навыки педиатра
Антропометрические измерения
Степень полового созревания
Схема оценки физического развития ребенка
Физикальные методы исследования ребенка
Ошупывание
Выстукивание
Выслушивание
Генеалогический метод
Экспресс-методы выявления наследственных биохимических дефектов
Цитогенетические методы исследования
Дерматоглифика
Навыки по уходу за больным ребенком
Промывание желудка, клизмы
Навыки по уходу, вскармливанию и лечению новорожденных
Вскармливание доношенного новорожденного
Навыки по выхаживанию недоношенных детей
Методика выведения новорожденного из асфиксии
Гемолитическая болезнь новорожденных и техника заменного переливания крови
Техника взятия материала для лабораторных исследований
Техника введения лекарственных веществ и жидкостей
Введение лекарственных средств через рот, прямую кишку
Ингаляции
Парентеральное введение лекарственных веществ и жидкостей
Техника применения ванн
Местные отвлекающие процедуры
Методы теплолечения
Светолечение и светопрофилактика
Ультрафиолетовое облучение (УФО)
Методы исследования нервной системы
Методы исследования вегетативной нервной системы
Инструментальные методы исследования нервной системы
Функциональные методы исследования органов дыхания
Исследование газов крови
Функциональные исследования с использованием фармакологических проб
Функциональные методы исследования сердечно-сосудистой системы
Фонокардиография, реография
Реоэнцефалография, контрастная эхокардиография, поликардиография, кардиоинтервалография
Измерение артериального давления
Клинические функциональные пробы сердечно-сосудистой системы
Определение общей физической работоспособности
Лекарственные пробы
Методы исследования органов пищеварения
Дуоденальное зондирование
Исследование функций поджелудочной железы
Исследование испражнений
Методы исследования функции печени
Исследование экскреторной и обезвреживающей функции печени
Радиоизотопное исследование и УЗИ печени
Рентгенологические методы исследования желчных путей
Методы исследования почек и органов мочевыделения
Определение белка в моче
Исследования мочевого осадка
Функциональное исследование почек
Методы определения парциальной функции нефрона
Специальные методы исследования почек
Манипуляции - мочеполовая система
Методы исследования системы крови
Исследование лейкоцитов
Исследование костного мозга
Исследование лимфатических узлов
Исследование системы гемостаза
Переливание крови
Методы исследования обмена веществ
Методы исследования КОС
Методы исследования обмена белков
Исследование углеводного обмена
Исследование липидного обмена
Методы пункции и катетеризации вен
Санация трахеобронхиального дерева
СДПД
Техника реанимации
Методы определения иммунологической реактивности
Определение специфической реактивности
Методы исследования кожных покровов и слизистых оболочек
Приложения

Известно около 500 наследственных заболеваний обмена веществ, которые могут нарушать нормальный рост и развитие ребенка. Диагностика этих заболеваний по внешним клиническим признакам не всегда возможна. Программы биохимических исследований для выяснения сущности наследственного дефекта обмена веществ очень сложны, и проводить их можно лишь в специализированных генетических лабораториях. Однако в детских клинических и поликлинических лабораториях могут выполняться пробы первого этапа, помогающие врачу «отсеивать» (screening) детей с подозрением на наследственное заболевание обмена веществ. Поэтому такие экспресс-методы называют скринирующими пробами. Это преимущественно качественные пробы. Дети с положительными результатами по скринирующим пробам
обследуются в специализированных лабораториях при медико-генетических консультативных центрах по программе второго этапа. Для уточнения характера наследственного дефекта применяются хромосомный анализ, физические, биохимические, особенно хроматографические, методы исследования.
Приводим наиболее часто используемые в практической педиатрии пробы первого этапа.
Микробиологические методы диагностики. В ряде стран Европы и Америки используется тест Гатри. При этом в среду с культурой В. Subtilis добавляют ингибиторы, подавляющие рост микроба. При наличии в крови и моче у больных повышенного количества аминокислот (фенилаланина, лейцина, гистидина и др.) тормозящее влияние ингибиторов устраняется и зоны роста микроба увеличиваются.
В нашей стране с этой целью часто используют ауксотрофные штаммы В. Е. coli, К-12. В основе метода лежит стимуляция роста ауксотрофных мутантов повышенным количеством аминокислот, содержащихся в крови и моче.
Проба с 10 % раствором треххлористого железа (FeCt3). FeCb вступает в реакцию с фенилпировиноградной, иммидазолпировиноградной кислотами и другими соединениями. При этом происходит окрашивание раствора, характер и интенсивность которого указывают на особенности обменных нарушений.
Реактивы: 10% раствор FeCl3, 10% раствор НС1, магниевый реактив (11 г MgCh, 20 мл концентрированного NH4OH, 1 л дистиллированной воды).
Техника: к 4 мл мочи для связывания фосфатов добавляют 1 мл магниевого реактива, перемешивают и через 5 минут фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат подкисляют 2 каплями 10 % раствора НС1, после чего добавляют 3—4 капли 10 % раствора FeCh. В течение 5—7 минут отмечают изменение окраски.
При фенилкетонурии смесь принимает сине-зеленую окраску; тирозинозе — сине-зеленую, быстро выцветающую; гистидинемии — серо-зеленую; при нарушении абсорбции метионина — пурпурную, переходящую в красно-коричневую; алкаптонурии — зеленую, быстро выцветающую; диабете — красно-коричневую и т. д.
Проба Легаля на кетонные тела. Реактивы: 5% водный раствор натрия нитропруссида (готовят ex tempore), ледяная уксусная кислота, 10% раствор NaOH.


Т е х н и к а: к 1 мл мочи добавляют две капли 5 % раствора натрия нитропруссида и 0,5 мл 10 % NaOH. Затем вводят 0,5 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь взбалтывают и учитывают характер окрашивания.
При наличии в моче ацетона, ацетоуксусной, р-оксимасляной кислот (кетоновые тела) введение нитропруссида дает вишнево-красное окрашивание, которое не исчезает, если добавить уксусной кислоты. Пробу считают положительной и при слабо-розовой окраске в условиях достаточного подкисления мочи.
Проба на кетокислоты с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ). Р е а кт и в ы: 0,2 % раствор 2,4-ДНФГ в 2 н. НС1, эфир, 10 % раствор На2СОз.
Техника: 0,25 мл мочи смешивают с 1 мл 0,2% раствора 2,4-ДНФГ, через 10 минут к смеси добавляют равный объем эфира, смешивают и отстаивают. После того как содержимое пробирки разделится на 2 слоя, верхний (эфирный) слой пипеткой переносят в чистую пробирку и добавляют равный объем 10 % раствора №гСОз.
В реакции 2,4-ДНФГ реагирует с кетокислотами мочи, вследствие чего образуются окрашенные гидрозоны. При положительной реакции нижний карбонатный слой окрашен в желтый или оранжевый цвет. Интенсивность окрашивания оценивается визуально по шкале от 0 до + + + +. При резко положительной пробе нижний слой имеет почти коричневую (темно-оранжевую) окраску, при отрицательной остается бесцветным.
Реакция бывает положительной при фенилкетонурии, болезни кленового сиропа, тирозинозе, или тирозинурии, гистидинемии. Подобное окрашивание может быть также при гиперглицинемии и гликогенозах типа 1, 3, 5, 6 за счет реагирования с ацетоном.
Проба на мукополисахариды с цетилтриметиламмо-ниумбромидом (ЦТАБ, или цетавлон). Реактивы: 2,5 % раствор ЦТАБ в 1 М цитратном буфере, pH 5,75 (перед растворением ЦТАБ буфер подогревают).
Методика приготовления цитратного буфера следующая: 1) растворяют 210 г лимонной кислоты (CeHeOzX X Н2О) в 500 мл дистиллированной воды; 2) добавляют 150 мл 20 н. NaOH, раствор перемешивают и охлаждают до комнатной температуры; 3) используя потенциометр, pH раствора доводят до 5,75 при комнатной температуре
с добавлением 2и. NaOH; 4) объем реактива путем добавления дистиллированной воды доводят до 1 л.
Техника: к 5 мл свежей мочи добавляют 1 мл 2,5 % раствора ЦТАБ, смешивают. Проба считается положительной, если в течение 20—30 минут появляется мутный или пушистый преципитат. Реакция бывает положительной при таких мукополисахаридозах, как синдромы Hurler Hunter, Sanfilippo, Scheie, а также при некоторых других наследственных и ненаследственных заболеваниях: синдроме Марфана, артрониходисплазии, множественных экзостозах, ревматоидном артрите, кретинизме и др.
Проба на мукополисахариды с толуидиновым синим.
Каплю мочи микропипеткой наносят на фильтровальную бумагу, высушивают при комнатной температуре, затем погружают в толуидиновый реактив на 1 минут и отмывают в 95 % растворе этанола. При положительной пробе пятно окрашивается в пурпурно-красный цвет. В качестве контроля параллельно ставят пробу с мочой больного гаргоилизмом или с раствором хондроинтинсульфата А в концентрации 2 мг/мл.
Нитрозонафтоловая проба на тирозинемию. Реактивы: 1) 2,63 н. азотная кислота, для ее приготовления один объем концентрированной азотной кислоты растворяют в 5 объемах воды; 2) NаNОз, 2,5 г которого растворяют в 100 мл воды; 3) а-нитрозо-в-нафтол, 100 мг которого растворяют в 100 мл 25 % раствора этанола. Все реактивы хранят в холодильнике.
Техника: к 1 мл 2,63 н. азотной кислоты добавляют каплю раствора NаNОз и 10 капель раствора а-нитрозо- b-нафтола. После смешивания указанных растворов добавляют три капли мочи и вновь смешивают. О положительном результате говорит оранжево-красное окрашивание, появляющееся в течение 3—5 мин. Такое окрашивание могут дать только тирозин и его метаболиты, что наблюдается при недостаточности трансаминазы тирозина и тирозинемии.
Проба на ацетон в моче. Проводится с помощью таблеток, содержащих натрия нитропруссид. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде реагируют с нитрозогруппой натрия нитропруссида. При этом образуются комплексные анионы красно-коричневого цвета. По цветной шкале определяют количество ацетона в моче. Таблетки для экспресс-анализа мочи на ацетон имеются в наборе завода «Реагент». В набор входит также пипетка, цветная шкала и инструкция.
Проба с нингидрином на гипераминоацидурию. Реактивы: раствор 1 г нингидрина в 500 мл 95% раствора этанола, который хранят в темной стеклянной банке в холодильнике.
Техника: к 1 мл реактива добавляют три капли мочи и смешивают. Появление голубой или пурпурной окраски через 3—5 минут указывает на содержание в моче избыточного количества аминокислот. Возможны артефакты, что бывает при высококонцентрированной моче или большом содержании в ней аммония.
Проба Эрлиха на уробилиноген и порфобилиноген. Реактив: 2% раствор диметиламинобензоальдегида в 2 н. НС1.
Техника: к 5 мл мочи добавляют 1 мл реактива. При наличии уробилиногена и порфобилиногена через 10 минут появляется розовое окрашивание.
Пробу используют при подозрении на наследственное нарушение обмена билирубина.
Проба Селиванова на фруктозу. Реактив Селиванова: 0,5 % раствор резорцина в 20 % растворе НС1.
Техника: к 1 мл мочи добавляют 0,5 мл указанного реактива, смешивают и ставят в кипящую водяную баню на 1 мин, При наличии в моче фруктозы после кипячения с резорцином появляется вишнево-красное окрашивание. Однако, если смесь кипятить более длительно, подобное окрашивание может дать и присутствие глюкозы.
Пробу используют для выявления наследственной фруктоземии.
Проба Сулковича на кальций. Реактив Сулковича: 2,5 г щавелевой кислоты; 2,5 г аммония сульфата; 5 мл ледяной уксусной кислоты; 150 мл дистиллированной воды.
Техника: к 1 мл мочи в пробирку добавляют 1 мл реактива Сулковича и перемешивают. Через 1—2 мин, когда появляется мутность, пробу сравнивают с профильтрованной мочой того же ребенка. Степень помутнения оценивают визуально по шкале от 0 до + + ++.
Резко положительной проба Сулковича бывает при идиопатической гиперкальциемии.
Проба с ортотоллуидином на медь. Реактивы: 0,1 г ортотоллуидина; 0,5 г роданистого аммония; 5 мл ацетона.
Перед постановкой пробы перечисленные реактивы в указанных количествах смешивают.
Техника: две капли мочи наносят на тонкую фильтровальную бумагу и высушивают Затем на образовавшееся пятно наносят каплю свежеприготовленной смеси реактивов.
Проба считается положительной, если в течение 30 с появляется синяя окраска, что говорит об избыточном содержании в моче меди. Постановка пробы способствует выявлению больных гепатолентикулярной дегенерацией.



 
« Практические занятия по аптечной технологии лекарств   Практическое руководство по лечению алкоголизма »