Начало >> Статьи >> Архивы >> Практические навыки педиатра

Методы определения иммунологической реактивности - Практические навыки педиатра

Оглавление
Практические навыки педиатра
Антропометрические измерения
Степень полового созревания
Схема оценки физического развития ребенка
Физикальные методы исследования ребенка
Ошупывание
Выстукивание
Выслушивание
Генеалогический метод
Экспресс-методы выявления наследственных биохимических дефектов
Цитогенетические методы исследования
Дерматоглифика
Навыки по уходу за больным ребенком
Промывание желудка, клизмы
Навыки по уходу, вскармливанию и лечению новорожденных
Вскармливание доношенного новорожденного
Навыки по выхаживанию недоношенных детей
Методика выведения новорожденного из асфиксии
Гемолитическая болезнь новорожденных и техника заменного переливания крови
Техника взятия материала для лабораторных исследований
Техника введения лекарственных веществ и жидкостей
Введение лекарственных средств через рот, прямую кишку
Ингаляции
Парентеральное введение лекарственных веществ и жидкостей
Техника применения ванн
Местные отвлекающие процедуры
Методы теплолечения
Светолечение и светопрофилактика
Ультрафиолетовое облучение (УФО)
Методы исследования нервной системы
Методы исследования вегетативной нервной системы
Инструментальные методы исследования нервной системы
Функциональные методы исследования органов дыхания
Исследование газов крови
Функциональные исследования с использованием фармакологических проб
Функциональные методы исследования сердечно-сосудистой системы
Фонокардиография, реография
Реоэнцефалография, контрастная эхокардиография, поликардиография, кардиоинтервалография
Измерение артериального давления
Клинические функциональные пробы сердечно-сосудистой системы
Определение общей физической работоспособности
Лекарственные пробы
Методы исследования органов пищеварения
Дуоденальное зондирование
Исследование функций поджелудочной железы
Исследование испражнений
Методы исследования функции печени
Исследование экскреторной и обезвреживающей функции печени
Радиоизотопное исследование и УЗИ печени
Рентгенологические методы исследования желчных путей
Методы исследования почек и органов мочевыделения
Определение белка в моче
Исследования мочевого осадка
Функциональное исследование почек
Методы определения парциальной функции нефрона
Специальные методы исследования почек
Манипуляции - мочеполовая система
Методы исследования системы крови
Исследование лейкоцитов
Исследование костного мозга
Исследование лимфатических узлов
Исследование системы гемостаза
Переливание крови
Методы исследования обмена веществ
Методы исследования КОС
Методы исследования обмена белков
Исследование углеводного обмена
Исследование липидного обмена
Методы пункции и катетеризации вен
Санация трахеобронхиального дерева
СДПД
Техника реанимации
Методы определения иммунологической реактивности
Определение специфической реактивности
Методы исследования кожных покровов и слизистых оболочек
Приложения

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

В педиатрической практике широко используются аллергологические кожные пробы с микробными и немикробными антигенами, туберкулиновые пробы, исследование белковых фракций и иммуноглобулинов сыворотки крови, слизи верхних дыхательных путей и других экскретов, ставятся реакции агглютинации, преципитации, иммунофлуоресценции, реакция связывания комплемента (РСК), реакция Кумбса, проводятся исследования неспецифических факторов защиты — С-реактивного белка, интерферона, пропердина, комплемента и пр. Для ориентировки изложим принципы некоторых наиболее часто используемых иммунологических исследований.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСПЕЦИЦИФИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ

Гемолитическая активность комплемента. Комплемент (син. алексин) —это неспецифический фактор защиты, в систему которого входит ряд сывороточных белков. По номенклатуре ВОЗ система комплемента обозначается символом С, а ее индивидуальные компоненты — цифрами от 1 до 9 (Ci, С2, С9). В системе комплемента 8 белков являются индивидуальными, а Сд представляет собой комплекс, в который входят 4 белка системы пропердина, 1 ингибитор фермента и 2 фермента. Белки системы комплемента могут быть активированы в определенной последовательности по принципу биологического усиления при реакции антиген — антитело или неспецифическими факторами (С3-проактиватор, С-проактива-торконвертаза, фактор кобры и др.). Сыворотка, подогретая до 56 °С, в течение 30 минут теряет комплементарную активность. Комплемент способен присоединяться к комплексу антиген — антитело, на чем основана РСК. Существует ряд модификаций РСК. Сниженный титр комплемента наблюдается при выраженной степени аллергизации организма, некоторых аутоиммунных заболеваниях (коллагенозах и др.).
Об уровне содержания комплемента в сыворотке крови судят по его гемолитической активности. Наиболее широко используется унифицированный метод определения гемолитической активности комплемента по 50 % гемолизу. В основу метода положен принцип, согласно которому комплемент исследуемой сыворотки вызывает гемолиз сенсибилизированных бараньих эритроцитов в присутствии сыворотки кролика, иммунизированного бараньими эритроцитами (гемолитическая сыворотка). Активность комплемента учитывается в условных гемолитических единицах. Одна 50 % гемолитическая единица — это такое количество комплемента, которое вызывает гемолиз 50 % 0,5 мл стандартной суспензии сенсибилизированных эритроцитов при 37 °С за 45 мин. В сыворотке здоровых людей содержится 20—40 гемолитических единиц комплемента.
Пропердин. Относится к неспецифическим иммунным факторам организма. В присутствии комплемента и ионов магния пропердин проявляет бактерицидное действие и способен инактивировать некоторые вирусы. В сыворотке крови человека в норме содержится 4—8—10 ед. пропердина.
Для определения уровня пропердина в сыворотке крови применяют зимозановый метод титрования. Он основан на способности пропердина связываться с полисахаридом зимозаном. Образующийся при этом комплекс пропердин — зимозан инактивирует третью фракцию комплемента (Сз). Учет результатов производят по степени инактивации Сз.
Определение С-реактивного белка. В сыворотке крови здоровых людей С-реактивный белок не определяется. Он обнаруживается при остром воспалительном процессе, заболеваниях, сопровождающихся тканевой деструкцией, и является показателем активности этих процессов.
В стеклянный капилляр размером 0,4 X 100 мм набирают до 1/3 объема антисыворотки и такой же объем сыворотки больного. Покачивая капилляр 12—15 раз, содержащиеся в нем реагенты перемешивают. Затем капилляр удерживают в горизонтальном положении и конец его погружают в пластилин таким образом, чтобы при придании капилляру вертикального положения смесь находилась над столбиком воздуха, не прикасаясь к пластилину. Реакция может происходить при комнатной температуре, в таком случае предварительный учет результатов производится через 4 ч, а если смесь инкубируется в термостате при температуре 37 °С — через 2 ч. Окончательный результат учитывают после выдерживания смеси сыворотки в капилляре при комнатной температуре 18—20 ч, т. е. в конце суток. На наличие С-реактивного белка указывает выпадение преципитата: высота осевшего преципитата в

  1. мм оценивается одним крестом ( + ), в 2 мм — ( + + ). в
  2. мм — ( + + + )» в 4 мм и более — ( + + + + ).

Титр гетерофильных агглютининов. К факторам естественного неспецифического иммунитета относятся гетерофильные агглютинины, которые образуются в ответ на спонтанное воздействие на организм широко распространенных в окружающей среде антигенов. Титр гетерогенных агглютининов в сыворотке крови зависит от возраста: в первые 5 лет жизни он нарастает, а в старости — падает. У здоровых взрослых людей титр гетерофильных агглютининов колеблется в разведениях от 1:8 до 1:32 (в среднем 1:16). Титр определяются по методике Пауля — Буннеля.
Лизоцим. Это — один из врожденных факторов противомикробной защиты, обнаруживаемый в слезной жидкости, мокроте, коже, сыворотке крови, молоке, почках, печени, сердце и других тканях организма человека. Особенно богаты этим веществом лейкоциты и слезная жидкость. Впервые лизоцим был обнаружен А. Флемингом (1922). Исследованиями 3 В. Ермольевой с сотр. (1968) было показано, что лизоцим представляет собой фермент мурамидазу, разрушающий пептидополисахариды клеточных стенок бактерий.
Существует несколько методов определения активности лизоцима биологический, путь серийных разведений с тест-микробом, турбодиметрический и метод диффузии на агаре.
Согласно литературным данным (3. М. Михайлова, П. А Михеев, 1966), у детей первых лет жизни и новорожденных титр лизоцима значительно выше, чем у взрослых.
Фагоцитарная активность лейкоцитов. Явление фагоцитоза как важнейший фактор естественного иммунитета было открыто И. М. Мечниковым. Способностью поглощать и переваривать микроорганизмы и другие чужеродные частицы обладают в крови нейтрофилы (микрофаги), моноциты и клетки ретикулоэндотелиальной системы (подвижные и фиксированные макрофаги).
В видалевской пробирке готовится смесь, в которую входят 0,1 мл лимоннокислого натрия в 2 % растворе, 0,2 мл исследуемой крови и 0,1 мл взвеси тест-микроба (стафилококк № 209 или др.), полученной из суточной агаровой культуры и разведенной до 400 млн микробных тел в 1 мл. После перемешивания перечисленных компонентов смесь помещают в термостат при температуре 37 °С на 30 мин. Затем смесь центрифугируют, из верхнего слоя осадка готовят мазки, фиксируют их смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому— Гимзе. Препарат микроскопируют, выраженность фагоцитоза оценивают по количеству поглощенных нейтрофилами микробов (фагоцитарное число) и количеству лейкоцитов, проявивших фагоцитарную активность. С этой целью просматривают 100 нейтрофилов. В норме у здоровых людей фагоцитирующие лейкоциты составляют 50—70 %, а фагоцитарное число — 2—4.
Реакция бласттрансформации (РБТ) лимфоцитов. Это способность лимфоцитов превращаться в недифференцированные бластные клетки при культивировании лейкоцитов in vitro на искусственной питательной среде. Такой процесс может быть стимулирован специфическими и неспецифическими агентами. Неспецифическим стимулятором является растительный белок фитогемагглютинин, под влиянием которого через 72 ч происходит трансформация лимфоцитов в большие зародышевые клетки, причем многие из них находятся в состоянии мейоза.
В работах многих исследователей было показано, что при тяжелом течении ряда заболеваний РБТ лимфоцитов, полученных у таких больных, резко угнетена. При улучшении состояния больных восстанавливается способность лимфоцитов превращаться под действием стимулятора в бластные клетки.



 
« Практические занятия по аптечной технологии лекарств   Практическое руководство по лечению алкоголизма »