Начало >> Статьи >> Архивы >> Практикум по фармакогнозии

Оборудование для изготовления срезов - Практикум по фармакогнозии

Оглавление
Практикум по фармакогнозии
Оптические и вспомогательные приборы
Оборудование для изготовления срезов
Макроскопический анализ лекарственного сырья
Микроскопический анализ лекарственного сырья
Приготовление препаратов
Диагностические признаки различных морфологических групп лекарственного растительного сырья
Химические реакции и реактивы, применяющиеся при макроскопическом анализе
Реактивы, применяющиеся при микроскопическом исследовании лекарственного сырья
Лекарственное сырье физического действия
Торфяной мох, сфагн, сфагновый мох
Лекарственное сырье, содержащее слизь
Лекарственное сырье, содержащее жирное масло
Лекарственное сырье, содержащее эфирное масло
Цветки ромашки
Цветки арники, корень девясила, трава чабреца, тимьяна
Плод аниса, фенхеля
Сырье, содержащее тиогликозиды
Сырье, содержащее антрагликозиды
Сырье, содержащее гликозиды сердечной группы
Кора обвойника, корневище и корень кендыря
Трава горицвета весеннего, ландыша, желтушника серого
Сырье иного химического состава, обладающее седативным и сердечным действием
Сырье, содержащее сапонины
Сырье, обладающее тонизирующим действием
Сырье, содержащее горькие гликозиды
Сырье, содержащее различные гликозиды
Лекарственное сырье, содержащее дубильные вещества
Лекарственное сырье, содержащее алкалоиды
Трава термопсиса, чистотела, кора хинного дерева, плод солянки Рихтера
Корень ипекакуаны, маточные рожки, семя чилибухи, корневище с корнями чемерицы, клубень аконита тянь-шаньского
Лекарственное сырье с высоким содержанием витаминов
Трава пастушьей сумки, тысячелистника
Лекарственное сырье, содержащее ядовитые безазотистые соединения
Лекарственное сырье, содержащее производные альфа- и гамма-пирона
Лекарственное сырье малоизученного состава

При микроскопическом исследовании лекарственного растительного сырья (корней, корневищ, клубней, плодов, семян, коры, а в некоторых случаях и листьев) возникает необходимость в приготовлении срезов. Чаще всего срезы готовят с помощью бритвы, иногда для этой цели пользуются микротомом.

Бритва

Для получения срезов применяют обыкновенную остро отточенную бритву. При работе бритву разворачивают на 270° (угол между обушком бритвы и ее оправой равен 90°). Бритву держат правой рукой; при этом большой палец упирается в черенок бритвы со стороны лезвия, а указательный и средний — в этом же месте с противоположной стороны (со стороны обушка). Иногда при изготовлении срезов бритву кладут на согнутый указательный палец, прижимая ее сверху большим пальцем. Перед изготовлением срезов поверхность лезвия надо смочить водой, чтобы срезы не прилипали к бритве. Объект, с которого делают срезы, берут в левую руку, зажимая его между большим и указательным пальцем так, чтобы поверхность его лишь немного выдавалась над уровнем пальцев. Предварительно поверхность объекта выравнивают с помощью острого скальпеля или ножа. При изготовлении среза разрез делают с основания лезвия и ведут бритву легким, скользящим движением наискось до верхушки лезвия. Обушок бритвы при этом скользит по указательному пальцу левой руки. Каждый срез должен быть сделан одним движением; нельзя, делая срезы, «пилить», так как в этом случае срезы получаются неровные. Срезы не должны быть большими: чем меньше срез, тем легче сделать его тонким и ровным. Обычно редко требуется делать срез через всю толщину корпя или корневища, достаточно срезать сравнительно узкую полоску, проходящую через наружные и внутренние ткани органа (по радиусу поверхности разреза). При этом наиболее тонкие и ровные срезы получаются, если срез начинать не от края объекта, а положив лезвие бритвы на поверхность разреза. Получить сразу хороший срез редко удается, поэтому всегда нужно сделать несколько срезов и для исследования под микроскопом выбрать лучшие. Полученные срезы лучше снимать с бритвы мягкой кисточкой; при использовании для этой цели препаровальной иглы можно повредить лезвие бритвы.

Микротом

Для получения одинаковых очень тонких срезов в виде непрерывного ряда используют микротомы. В настоящее время существует много различных типов микротома, из которых наиболее распространенным и универсальным является тпп санных (или салазочных) микротомов. Различные конструкции санных микротомов отличаются между собой главным образом принципом устройства для подачи объекта к ножу. Основные части санного микротома — нож, закрепленный в держателе «салазок», и объектодержатель с устройством, поднимающим его на определенную высоту. Все эти части укреплены на станине.
В наиболее широко распространенной конструкции санного микротома объект укрепляют в объектодержателе неподвижно. Положение объекта в держателе микротома регулируется системой винтов и рычагов, позволяющих вращать его во всех плоскостях, поднимать, опускать и затем прочно фиксировать.
Объект подается к ножу движением микрометрического винта или перемещением объектодержателя по наклонной плоскости. Нож закрепляется в держателе «салазок», который позволяет придавать ему различный наклон и различный угол по отношению к направлению движения. Он свободно перемещается в горизонтальной плоскости на «салазках». Движение ножа производится непосредственно от руки. Чистота и гладкость скользящих поверхностей являются главным условием для точной работы микротома, поэтому «салазки» и рельсы должны быть смазаны маслом. «Салазки» должны скользить равномерно, легко, без толчка. После окончания работы микротом необходимо тщательно закрывать, предохраняя от пыли.
Заливка материала и изготовление блоков. Для изготовления срезов с помощью микротома материал должен быть специально подготовлен. Чаще всего исследуемый материал заливают в парафин, и полученный парафиновый блок с запаянным в нем объектом наклеивают на деревяшку, которую укрепляют в объектодержателе.
Для заливки твердых объектов берут целлоидин, а для заливки объектов с нежными, рыхлыми тканями — желатину.
Корни и корневища, имеющие довольно плотную однородную структуру, иногда можно резать без длительной предварительной обработки. Для этого берут размоченный в смеси спирта с глицерином (см. ниже) кусок корпя или корневища, зажимают его в пробке, а затем укрепляют в объектодержателе и режут. В этом случае получаются отдельные срезы в отличие от непрерывной ленты, состоящей из ряда последовательных срезов, которая получается при резании запаянного материала.
Для изготовления парафиновых блоков берут парафин особых сортов, которые отличаются чистотой, однородностью и аморфностью. Исследуемый материал, предварительно обезвоженный и находящийся в абсолютном спирте, необходимо перед заливкой пропитать парафином. Это очень длительная и трудоемкая операция, от тщательности проведения которой зависит успех резки материала. Для этого спирт из материала постепенно удаляют, заменяя его каким-либо растворителем, в котором хорошо растворяется парафин (хлороформ, ксилол, толуол, гвоздичное или кедровое масло). Обычно материал переносят в смесь спирта и растворителя парафина (например, хлороформа) различных соотношений (2 : 1; 1:1; 1 : 2), затем в чистый растворитель. Каждый раз материал оставляют в новой смеси на несколько часов или несколько дней в зависимости от структуры и размера объекта. После этого необходимо заменить растворитель на парафин, т. е. пропитать материал парафином. Эта операция осуществляется так же плавно и постепенно, как и предыдущая. Здесь возможны два пути: 1) постепенно переносить материал в смесь растворителя и парафина с возрастающей концентрацией парафина, выдерживая его каждый раз определенное время; 2) материал поместить в растворитель, к которому постепенно добавлять все новые порции парафина. Через 2—3 дня объект в растворе парафина помещают в термостат с температурой 35—40° и продолжают прибавлять парафин, а через 2—3 дня постепенно удаляют растворитель, после чего объект переносят в чистый парафин (жидкий) и выдерживают в термостате. Убедившись, что материал хорошо пропитан парафином, приступают к заливке его в парафин. В специальные сосуды или в коробочки, сделанные из бумаги или оловянной фольги, наливают расплавленный парафин, помещают туда пропитанный парафином материал и охлаждают (по возможности быстро, так как быстрое затвердение обеспечивает аморфность парафина), придав объекту нужное положение в парафине. После затвердения парафина его вынимают из сосуда и парафину придают нужную форму, удаляя лишний парафин скальпелем или бритвой (т. е. готовят блок). Готовый блок с запаянным в нем объектом наклеивают на призматический кусок дерева размером примерно 3Х2X1,5 см. Деревяшка перед наклеиванием блока должна быть прокипячена в парафине. Нагревая поверхность блока и поверхность деревяшки с наплавленным на нее кусочком парафина, соединяют их и быстро охлаждают. Деревяшку с наклеенным блоком, в котором запаян объект, укрепляют и объектодержателе микротома. Полученные при этом срезы перед изготовлением препарата необходимо освободить от парафина, что достигается погружением стекол с наклеенными на них срезами в хлороформ или ксилол на 5—10 минут.
Заливка материала в целлоидин производится примерно по этой же схеме, что и при работе с парафином. Растворителем целлоидина (который представляет собой чистую нитроклетчатку) служит смесь спирта с эфиром (1:1). При отсутствии целлоидина можно пользоваться коллодием или получить целлоидин путем растворения кинопленки в смеси спирта с эфиром.
Заливка в желатину производится следующим путем: хорошо отмытый водой от фиксатора материал помещают на несколько часов (до суток) в жидкий раствор желатины, затем на такое же время в густой раствор (в термостате при 37°), а затем заливают густым (1:3) раствором желатины и быстро охлаждают. Вырезанный блок помещают для уплотнения в 5—10% раствор формалина, а перед изготовлением срезов промывают в воде 30—60 минут. Раствор желатины готовят на 1 % растворе карболовой кислоты.
В последнее время для заливки материала стали применять различные полимеры, которые имеют то преимущество, что при применении полимеров, как и при заливке желатиной, не требуется обезвоживания материала. Хорошие результаты получены с полиэтиленгликолем.



 
« Практикум по нервным болезням и нейрохирургии   Практическая гематология детского возраста »