Начало >> Статьи >> Архивы >> Практикум по фармакогнозии

Реактивы, применяющиеся при микроскопическом исследовании лекарственного сырья - Практикум по фармакогнозии

Оглавление
Практикум по фармакогнозии
Оптические и вспомогательные приборы
Оборудование для изготовления срезов
Макроскопический анализ лекарственного сырья
Микроскопический анализ лекарственного сырья
Приготовление препаратов
Диагностические признаки различных морфологических групп лекарственного растительного сырья
Химические реакции и реактивы, применяющиеся при макроскопическом анализе
Реактивы, применяющиеся при микроскопическом исследовании лекарственного сырья
Лекарственное сырье физического действия
Торфяной мох, сфагн, сфагновый мох
Лекарственное сырье, содержащее слизь
Лекарственное сырье, содержащее жирное масло
Лекарственное сырье, содержащее эфирное масло
Цветки ромашки
Цветки арники, корень девясила, трава чабреца, тимьяна
Плод аниса, фенхеля
Сырье, содержащее тиогликозиды
Сырье, содержащее антрагликозиды
Сырье, содержащее гликозиды сердечной группы
Кора обвойника, корневище и корень кендыря
Трава горицвета весеннего, ландыша, желтушника серого
Сырье иного химического состава, обладающее седативным и сердечным действием
Сырье, содержащее сапонины
Сырье, обладающее тонизирующим действием
Сырье, содержащее горькие гликозиды
Сырье, содержащее различные гликозиды
Лекарственное сырье, содержащее дубильные вещества
Лекарственное сырье, содержащее алкалоиды
Трава термопсиса, чистотела, кора хинного дерева, плод солянки Рихтера
Корень ипекакуаны, маточные рожки, семя чилибухи, корневище с корнями чемерицы, клубень аконита тянь-шаньского
Лекарственное сырье с высоким содержанием витаминов
Трава пастушьей сумки, тысячелистника
Лекарственное сырье, содержащее ядовитые безазотистые соединения
Лекарственное сырье, содержащее производные альфа- и гамма-пирона
Лекарственное сырье малоизученного состава

Реактивы, используемые при микроскопическом исследовании лекарственного сырья, можно разделить на две группы: 1) включающие и просветляющие жидкости; 2) реактивы для микрохимических реакций и красители.
Включающие и просветляющие жидкости
Характер среды, в которую помещается объект, имеет в микроскопической технике очень большое значение; важную роль играет просветление препаратов. Просветление препаратов имеет целью сделать более явственным исследуемый объект путем устранения ряда клеточных включений, мешающих наблюдению. Различные способы просветления, г зависимости от характера просветляющей жидкости, могут оказывать или химическое воздействие, приводящее к разрушению, растворению, обесцвечиванию всего «лишнего» в исследуемом объекте, или достигается физическое просветление применением химически инертных, но оптически активных веществ, которые в результате создания благоприятных условий для прохождения света через препарат, способствуют хорошей видимости деталей наблюдаемого объекта. Объект бывает виден тем яснее, чем больше он отличается по преломляемости света от жидкости, в которую включен. Структура тонких, прозрачных клеток в воде видна лучше, чем в глицерине. Если материал мало прозрачен, то необходимо попользовать жидкость с большим показателем преломления; такой объект в глицерине будет более прозрачен, чем в воде.
В фармакогностической практике микроскопирования пользуются различными жидкостями для просветления препаратов, в зависимости от природы объекта, плотности тканей, структуры клеток. Этп жидкости обеспечивают видимость объекта и называются просветляющими.
Вода. К дистиллированной воде прибавляют кусочек камфары или кристаллик карболовой кислоты для предотвращения образования плесени. Вода как индифферентная жидкость не имеет значения для включения препаратов, так как в воде не меняется форма, величина клеток, структура и окраска тканей. Крахмальные зерна хорошо видны, алейроновые зерна распадаются, жирное масло группируется в крупные капли, слизь растворяется. Ткани остаются темными и неясно различимыми.
Глицерин. Обычно используют глицерин, разведенный водой (1 : 2) с добавлением кусочка камфары или кристаллика карболовой кислоты; неразведенный глицерин отнимает от тканей воду, сморщивает и деформирует их. Только для растворимых в воде включений (например, слизь) пользуются неразведенным глицерином или смешивают его со спиртом в разных частях.

Глицерин относится к индифферентным жидкостям, но перед водой имеет то преимущество, что ткани в нем долго не высыхают. Кроме того, глицерин обладает слабыми просветляющими свойствами: при продолжительном воздействии глицерина ткани становятся более прозрачными.
Раствор хлоралгидрата. Состав: 20 частей хлоралгидрата растворяют при нагревании в 5 частях воды и прибавляют 5 частей глицерина, чтобы хлоралгидрат не выкристаллизовывался. Хлоралгидрат является одним из лучших просветляющих средств. Он отличается способностью быстро проникать в ткани, при этом воздух вытесняется, крахмальные зерна разбухают и расплываются; жирные и эфирные масла сначала стекаются в более крупные капли, затем постепенно растворяются; белковые вещества, хлорофилл и другие включения, разрушаясь, растворяются; темно окрашенные ткани светлеют; кристаллы остаются без изменения. Препарат, помещенный в раствор хлоралгидрата, обычно подогревают, иногда дают слабо вскипеть; это усиливает н ускоряет просветляющее действие реактива. Большим недостатком хлоралгидрата является его деформирующее действие на ткани вследствие сильного разбухания оболочек.
Едкая щелочь. Применяют водные растворы едкого кали или едкого натра. Концентрация и продолжительность действия определяются свойствами объекта. Обычно используют 3—5% раствор, редко — 10—15% (в зависимости от плотности тканей, толщины листовой пластинки и др.). Раствор едкой щелочи является сильным просветляющим средством. Крахмальные зерна разбухают и превращаются в клейстер; при продолжительном действии щелочи или при нагревании препарата в этом реактиве жиры омыляются, растворяются белковые вещества, просветляются темно окрашенные ткани. В растворе щелочи клетки сильно набухают, легко разрываются при надавливании. Недостатком раствора едкой щелочи является то, что вследствие сильного разбухания клеток теряется представление об их истинных размерах; это, впрочем, не всегда бывает важно. Из щелочей, кроме указанных выше, используют также раствор аммиака (нашатырный спирт), который является хорошим просветляющим средством; при этом нс происходит такого разбухания оболочек клеток, как от раствора едкой щелочи.
Раствор перекиси водорода. 3% раствор используется как просветляющее средство. Можно использовать и более высокие концентрации, они будут более действенными. Однако в таких случаях перекись водорода будет действовать и как мацерирующий реактив, т. е. отделять, изолировать различные элементы (проводящие, механические ткани и др.).

Гвоздичное м а с л о. Прекрасное просветляющее средство. Срезы помещают после обезвоживания. Можно поместить срезы на часовое стекло в разведенное в спирте масло и подержать в эксикаторе до испарения спирта. При этом ткани полностью пропитываются маслом и хорошо просветляются.

Реактивы для микрохимических реакций и красители 1

Микрохимические реакции производят с целью установления подлинности лекарственного сырья. Они очень разнообразны. С помощью микрохимических реакций устанавливается наличие в лекарственном сырье действующих веществ и нередко их локализация в тканях (алкалоиды, гликозиды, дубильные вещества, жирные, эфирные масла, слизь и др.); с другой стороны, при помощи микрохимических реакций определяют различные части клетки, характер оболочки, содержимое клеточного сока, различные включения.
С целью установления природы клеточной оболочки часто используют реактивы на целлюлозу и на одревеснение.
Реактивы на целлюлозу. X л о р - ц и нк - йод. Очень эффективный и чувствительный реактив, однако требует тщательного приготовления. Существует много модификации и рецептов изготовления, дающих падежные результаты. Часто используется следующий рецепт:
20 г хлористого цинка растворяют в 8,5 мл воды, к раствору прибавляют по каплям раствор йода в йодиде калия (3 г KJ; 1,5г - 60 мл воды) при постоянном взбалтывании, до появления осадка йода, т. е. до насыщения. Обыкновенно бывает достаточно прибавить 1,5 мл указанного раствора. Могут быть использованы и другие прописи. Хорошо приготовленный реактив можно использовать в течение нескольких лет, если хранить его в темной склянке с притертой пробкой, оберегая от действия света.
При работе реактив достают из склянки посредством стеклянной палочки, не затрагивая осадка. Реактив окрашивает клетчатку в сине-фиолетовый цвет. Однако окрашивание часто маскируется частичным одревеснением оболочки, содержанием кутиноподобных веществ, пигментов и прочих веществ, часто присутствующих в клетке.
Йод с серной кислотой. Реактив окрашивает целлюлозу в синий цвет. Окраска яснее и интенсивнее, когда в клеточной оболочке больше целлюлозы и меньше других компонентов (лигнина, кутиноподобных веществ и др.). Производят окраску следующим образом. Препарат пропитывают 1 % раствором йода в йодиде калия, затем под покровным стеклом воздействуют серной кислотой (7 весовых частей 95% серной кислоты на 3 части воды). Или препарат сначала помещают в раствор йода (металлического йода 0,3, йодида калия 1,3 г, воды 100 мл) затем обрабатывают серной кислотой (серная кислоты 2 части, воды 1 часть) под покровным стеклом.
Раствор Л ю г о л я. Реактив готовят следующим образом: 0,5 г йода и 1 г йодида калия растворяют в небольшом количестве воды и разбавляют водой до 100 мл. Перед употреблением раствор разбавляют водой в отношении 1 : 4. Сохраняют в защищенном от света месте. Реактив окрашивает клетчатку в желтый цвет.
Проба на растворение целлюлозы. Целлюлоза составляет основу клеточной оболочки. Она отличается высокой устойчивостью и нерастворимостью в самых разнообразных реактивах. Лишь свежеприготовленный раствор аммиачной окиси меди, так называемый реактив Швейцера, является единственным, известным для целлюлозы растворителем. Раствор готовят следующим образом: 2% раствор сернокислой меди обрабатывают соответственным количеством едкого натра или едкого кали. Выпавший осадок гидрата окиси меди отмывают насколько возможно от остатков соли; из него удаляют воду путем отжимания и затем растворяют в крепком водном растворе аммиака. Вместо едкого кали для осаждения можно использовать и 25% раствор аммиака. Реактив Швейцера хранят в совершенно полной, герметически закупоренной склянке в темном месте. Реакцию можно проводить под покровным стеклом. Однако если в клетке имеется много опробковевших или кутинизированных слоев, то нужна более продолжительная обработка в закрытой чашечке. Клетчатка растворяется в реактиве после медленного разбухания, кутикула остается нерастворенной.

Реактивы на одревесневшие оболочки. Микрохимические реакции на одревеснение довольно многочисленны и разнообразны. Наиболее употребительны следующие.
Флороглюцин с соляной кислотой. Относится к наилучшим реактивам для установления одревеснения. Препарат пропитывают 5—10% спиртовым раствором флороглюцина, а затем добавляют 1—2 капли концентрированной соляной кислоты или 25% раствор серной кислоты. Одревесневшие оболочки принимают яркую вишневую окраску, интенсивность которой зависит от степени одревеснения. Реакция очень чувствительна, однако не стойкая; от воды и нагревания исчезает. Срезы после окрашивания можно перенести в глицерин.
Сульфат анилина. Из многочисленных модификаций рецептов реактива наиболее удобен принятый ΓΦΙΧ (стр. 773): 5 частей сульфата анилина растворяют в 40 мл дистиллированной воды и 50 мл 50° спирта и разбавляют водой до 100 мл. Одревесневшие оболочки от реактива принимают ярко-желтую окраску. Прибавление к реактиву серной кислоты усиливает окраску, которая очень устойчива. Аналогично действует солянокислый анилин.
Сафранин. Один из распространеннейших красителей на одревесневшие оболочки. Применяется в виде 0,5—1% раствора в 50° этиловом спирте. Реактив хранится в склянке с притертой пробкой. Препарат помещают в краску на полчаса, затем промывают водой, переносят в 96° спирт для отмывания излишней краски и быстро промывают кислым спиртом (на 100 мл 96° спирта добавляют 2 капли соляной кислоты), который извлекает краску из всех тканей, кроме одревесневших. Препарат переносят в глицерин. Окраска одревесневших оболочек от сафранина розовая до малиново- красной. Интенсивность окраски зависит от степени одревеснения.
Паранитроанилин. 1% водный раствор паранитроанилина быстро окрашивает одревесневшие ткани в оранжевый цвет. После окраски объекты помещают в глицерин.
Реакции на опробковевшие и кутинизированные оболочки.
Хлор-цинк-йод. Реактив окрашивает пробку и кутикулу в желтый цвет до коричневого. Эта реакция, однако, не специфична, так как частично этим реактивом окрашиваются одревесневшие и ослизневшие оболочки.
Раствор Судана III (состав реактива см. раздел «Реакции на жиры). Окрашивает опробковевшие и кутинизированные оболочки в оранжево-желтый цвет.

1 Микрохимические реакции можно производить со срезами, порошком, мацерированный материалом на предметном или часовом стекле, иногда в закрытой чашечке, бюксе (если применяются концентрированные кислоты).

Реакции на крахмал. Крахмал в объектах следует наблюдать в воде или сильно разбавленном глицерине, без нагревания. Он находится в виде зерен различной формы и величины, характерных для каждого вида сырья; иногда крахмал находится в виде клейстера (например, в клубнях салепа), что зависит от способа заготовки сырья.
Единственной и вместе с тем классической реакцией на крахмал является йодная реакция. Для этой реакции можно применять раствор йода в спирте (если объект содержит значительное количество влаги) или в водном растворе йодида калия. Во всех случаях следует избегать больших концентраций йода.
Раствор йода (раствор Люголя). Приготовление раствора см. раздел «Реактивы на целлюлозу». Крахмальные зерна окрашиваются йодом в синий цвет, крахмальный клейстер — в красновато-фиолетовый. Йодная реакция очень яркая, чувствительная, однако нестойкая, вследствие чего в постоянных препаратах ее сохранить не удается.
Реакции на инулин. Инулин можно видеть в препаратах (в глицерине пли в концентрированном растворе хлоралгидрата) в виде бесформенных, бесцветных, стекловидных глыбок, комков (смотреть без нагревания!). В свежих объектах, выдержанных в течение недели и более в 70° спирте или в глицерине, инулин имеет вид хорошо сформированных округлых сферокристаллов, обычно прилегающих к клеточным стейкам. Дополнительная обработка спиртом усиливает формирование сферокристаллов; они имеют лучистое радиальное строение и концентрическую слоистость. Наличие инулина в лекарственном сырье можно обнаружить некоторым и микрохимическими реакциями.
Спиртовой (15—20 %) раствор α- нафтола или т и м о л а (реа к т ив Молиша). Препарат помещают в один из указанных реактивов, затем под края покровного стекла вводят 1—2 капли концентрированной серной кислоты; появляется розово-фиолетовое окрашивание (α-нафтол) или карминово-красное (тимол). Присутствие в срезе воды вызывает выпадение осадка, поэтому срезы лучше предварительно обсушить (можно полоской фильтровальной бумаги или осторожно подогреть на горелке). Указанные реактивы на полисахариды дают соответствующую реакцию и с крахмалом, поэтому при испытании на инулин всегда следует исключить присутствие крахмала по реакции с йодом.
Реакции на жиры. Для открытия жиров в лекарственном сырье пользуются различными красителями. Однако эти красители совершенно так же окрашивают эфирные масла, смолы, кутинизированные оболочки, содержимое млечников. Поэтому при исследовании лекарственного сырья на содержание жиров необходимо установить их локализацию и провести другие пробы.
Судан  окрашивает капли жирного масла в оранжево-красный цвет. Реактив состоит из 0,01 г анилиновой краски судан III, 5 г спирта и 5 г глицерина. Срезы помещают на несколько часов в реактив, затем промывают в 50° спирте и переносят в глицерин. Для ускорения реакции препарат в Судане III можно нагреть, после чего вместо испарившегося реактива добавить под покровное стекло глицерин.
А л к а н и и. Применяется спиртовой раствор корневищ алканы, который окрашивает жиры в розовый или вишневокрасный цвет. Состав реактива: 0,5 г порошка корневищ алканы растворяют при нагреваний в 20 мл 20% уксусной кислоты, добавляют 50 мл 50° спирта и фильтруют. При работе реактив разбавляют равным объемом воды. Срезы помещают в реактив на определенное время {10—12 часов), после чего промывают 50° спиртом и заключают в глицерин.
Шарлаховый красный употребляется в виде насыщенного раствора в 70-градусном спирте. Окрашивает жиры в красный цвет.
Омыление по Розенталеру. Срезы помещают в 15% раствор едкой щелочи и слегка подогревают. Через некоторое время выделяются кристаллы жирнокислых солей в виде отдельных игл или пучков, что хорошо видно под микроскопом. Эта реакция дает возможность отличить жиры от эфирных масел, смол.
Реакции на эфирные масла, смолы, содержимое млечников. Все реактивы, используемые для открытия жиров, дают реакции с указанными веществами.
Цветные реакции на смолы те же, что и на жиры, и на каучук. Для обнаружения смол можно воспользоваться специфической реакцией. Концентрированный водный раствор уксуснокислой меди окрашивает смолы в изумрудно-зеленый цвет. Кусочки материала помещают в раствор от 5 дней до месяца, затем промывают в проточной воде и просматривают в глицерине.
Реакции на слизь. Слизь сильно преломляет свет, в воде разбухает и растворяется; в смеси спирта с глицерином представляется в виде стекловидной массы; в растворе хлоралгидрата постепенно становится слоистой; в спирте желтеет и становится слоистой.
Реакции с окрашиванием. Для окрашивания слизи применяют ряд реактивов. Срезы помещают на 5—10 минут в концентрированный раствор сернокислой меди, затем прополаскивают в воде и наносят 1—2 капли 50% раствора едкого кали. Слизь окрашивается в голубой цвет (растения сем. мальвовых, орхидных) или в зеленый (морской лук).
Метиленовый синий. Спиртовой раствор реактива (1:5000) окрашивает слизь в голубой цвет. Можно использовать аналогичный раствор метиленового зеленого.
Водный раствор едкой щелочи (3—5 %) окрашивает слизь в лимонно-желтый цвет. Такую же реакцию дает раствор аммиака.
Реакция с тушью. Смесь туши и воды (продажную, жидкую черную тушь разводят водой 1 : 10; реактив приготовляют но мере надобности). Исследуемое сырье измельчают в порошок и помещают на покровное стекло в кайлю туши, тщательно размешивают иголкой, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. В поле зрения на темно-сером фоне выделяются белыми островками клетки со слизью, так как тушь в слизь не проникает. Эти клетки постепенно разбухают и растекаются благодаря растворению слизи в воде.
Реакция двойного окрашивания. Срез исследуемого объекта помещают на 20 минут в раствор хлорида окисного железа, затем переносят па короткое время в раствор метиленового синего, промывают водой и заключают в глицерин. При этом клетки со слизью окрашиваются в желтый цвет; механические волокна — в голубой; сосуды древесины — в зеленый1.
Реакции на алкалоиды. Микрохимические реакции на алкалоиды проводятся с использованием реактивов, осаждающих эти соединения.
1 В научных исследованиях используют и другие реактивы для окраски слизи (щелочные растворы конго красного, дельта-пурпурина и бензопурпурина или кислые растворы орсеилина и азорубина). Эти реактивы окрашивают клетчатковые слизи. Для окраски пектиновых слизей (из растений сем. мальвовых, розоцветных, липовых) используются бисмарк коричневый, гематоксилин Деляфильда, нейтральный красный и 4% раствор орсеина с добавлением соляной кислоты.

На предметное стекло берут порошок или мелкий соскоб, добавляют 2—3 капли 5% раствора уксусной кислоты, закрывают покровным стеклом. Через

  1. 3 минуты накладывают рядом другое покровное стекло, под которое засасывается жидкость, и убирают первое покровное стекло вместе с порошком. На некотором расстоянии от покровного стекла наносят каплю реактива на алкалоиды (Вагнера, Майера, Драгендорфа или др.) и осторожно палочкой соединяют каплю с уксуснокислым извлечением, находящимся под стеклом. По мере поступления реактива под стекло на границе жидкостей постепенно образуется мутная зона (смотреть на черном фоне без микроскопа).

Из микрохимических реакций на алкалоиды сравнительно хорошо воспроизводимой является реакция с йод-калия йодидом на алкалоиды атропин (гиосциамин), скополамин (в следующем сырье: лист белладонны, белены, дурмана обыкновенного, корень белладонны). Срезы из свежих частей растений просматривают в указанном реактиве; в клетках, содержащих алкалоиды, виден коричневый осадок, через некоторое время выпадают звездчатые кристаллы с металлическим оттенком.
Присутствие алкалоидов в свежем млечном соке мака снотворного можно обнаружить в виде многочисленных бесцветных призматических или звездчатых кристаллов, при действии концентрированной серной или разбавленной соляной кислоты.
Микрохимические реакции на алкалоиды в лекарственном сырье рекомендуется проводить со свежими растениями или с только что заготовленным сырьем. При микрохимическом исследовании на алкалоиды совершенно обязательно проведение контрольных реакций, так как алкалоидные реактивы реагируют не только с алкалоидами, но также и с некоторыми другими веществами (белки, частично гликозиды и углеводы). Обычно проводят контрольные реакции после удаления алкалоидов из сырья. Для этой цели пользуются смесью винной кислоты и спирта (1:20), извлекая алкалоиды из сырья. Продолжительность обработки зависит от материала; иногда довольно продолжительная (неделю и больше).
Извлечение алкалоидов ведется в закрытых склянках, бюксах при частом взбалтывании. Обработанные таким образом срезы могут служить в качестве контрольных.

Реакции на гликозиды. Наличие гликозидов в сырье определяют методами гидролиза, с помощью цветных реакций, реакций осаждения, биологическими реакциями.

Выявление гликозидов непосредственно в клетках растения сопряжено с большими трудностями н для многих групп гликозидов микрохимические реакции нс разработаны. Они имеются лишь для некоторых гликозидов.
Антрагликозиды. В лекарственном сырье антрагликозиды можно обнаружить под микроскопом при помощи реакции с водным раствором (3—5%) едкой щелочи. Ткани, содержащие антрагликозиды, окрашиваются в вишнево- красный цвет. Реакцию можно проводить на срезах или с порошком.
Антрагликозиды в лекарственном сырье легко открываются также методом микросублимации. На предметное стекло берут порошок или грубый соскоб и помещают на асбестовую сетку; над стеклом на расстоянии 3 мм помещают другое предметное стекло. Подставляют под сетку горелку так, чтобы пламя не доходило до сетки на 4 см.
Антрагликозиды возгоняются в виде паров желтого цвета и минут через 5 на верхнем (холодном) предметном стекле они осаждаются в виде мелких, желтых кристаллов, которые со щелочью дают кроваво-красное окрашивание. Реакцию микро- сублимации можно провести в пробирке, которая с небольшим количеством порошка или грубого соскоба нагревается в горизонтальном положении (нагревать следует только дно пробирки). На холодных стенках пробирки будут конденсироваться антрагликозиды.

Арбутин. Разбавленная азотная кислота окрашивает клетки, содержащие арбутин, от темно-оранжевого до темно-красно-бурого цвета. Окраска появляется сразу и быстро переходит в светло-желтую. Наличие хлорофилла в тканях маскирует окраску. Хорошие результаты дает также метод микросублимации. Сам арбутин плохо сублимируется, но его агликон — гидрохинон легко возгоняется. Исследуемое сырье измельчают и порошок помещают на предметное стекло в каплю соляной кислоты (1:10), хорошо перемешивают и оставляют в покое на несколько минут. Происходит гидролиз арбутина. Затем стекло переносят на асбестовую сетку и дальнейшую процедуру проводят так же, как при микросублимации антрагликозидов. Гидрохинон возгоняется и осаждается в виде кристаллов — мелких моноклинических листочков и призм, крестообразных сростков и в виде «елки». При действии слабого раствора хлорного железа кристаллы растворяются, образуя черную окраску. От аммиака они (сразу или в течение одного часа) дают красновато-бурую окраску.
Гесперидин. Путем осаждения абсолютным спиртом можно получить кристаллы гесперидина и наблюдать их непосредственно в клетках в виде иголочек или сферокристаллов.
Гесперидин можно обнаружить при действии аммиака, разбавленных щелочей, в которых он легко растворяется с образованием желтого окрашивания.
Подобный результат получается при действии серной кислотой. Реакцию можно проводить на срезах, просматривая их в указанных реактивах.
Реакции на сапонины. Микрохимические реакции для обнаружения сапонинов в тканях растения не всегда достоверны. Срезы нагревают в смеси спирта и концентрированной серной кислоты (равные объемы), добавляют одну каплю концентрированного раствора железа закисного сульфата. В клетках, содержащих сапонины, образуется окрашивание вначале желтое, затем красное, переходящее в фиолетово-голубое (реакция Лафона). Из биологических методов используют метод, предложенный Деляторской, основанный на гемолитических свойствах сапонинов. Названный автором метод «кровяной желатины» заключается в следующем: приготовляют 6—8% раствор желатины на физиологическом растворе хлорида натрия. К 2—3 мл этого раствора прибавляют 2—3 капли дефибринированной крови; желатина застывает и ее режут на кусочки. Из подготовленного сырья делают срез, па него кладут кусочек кровяной желатины, покрывают покровным стеклом, придавливают и оставляют на некоторое время. Если в растении есть сапонин, то содержащиеся в желатине эритроциты начнут растворяться и вокруг среза образуется круглая, прозрачная зона — «гемолитический дворик».

Реакции на дубильные вещества. Водные (2—5%) растворы солей окисного железа (хлорид, сульфат, железоаммонийные квасцы) являются очень хорошими реактивами па дубильные вещества и вполне применимы для микрохимических реакций. Ткани, содержащие дубильные вещества, окрашиваются от указанных реактивов в сине-черный или зеленовато-черный цвет. Оттенки окраски мало заметны, так как присутствующие в клетке растительные кислоты (например, лимонная) могут видоизменять окраску (синюю переводить в зеленую).
Довольно часто применяется реакция с бихроматом калия, позволяющая установить локализацию дубильных веществ в тканях. Для этого пользуются раствором бихромата калия 1 : 10, помещая в него материал на несколько дней. В клетках, содержащих дубильные вещества, выпадает плотный серо- или красно-бурый хлопьевидный или зернистый осадок. Красно-бурый цвет появляется иногда лишь спустя некоторое время.
Для обнаружения дубильных веществ применяют также концентрированный раствор молибденовокислого аммония в концентрированном растворе хлорида аммония (реакция Гардинера или Висселинга), 25% раствор хлористого аммония—1 часть, 50% раствор молибденовокислого аммония — 1 часть, вода — 1 часть. Под действием этого реактива в клетках, содержащих дубильные вещества, выпадает желтый осадок; с танином реактив дает красный осадок. Проникновение реактива в ткани ускоряется при подщелачивании раствора (добавлением аммиака). Реакция довольно чувствительная и эффективная, однако ее недостатком является легкая растворимость осадка в воде и разбавленных кислотах, а также слабая устойчивость реактива при хранении.



 
« Практикум по нервным болезням и нейрохирургии   Практическая гематология детского возраста »