Начало >> Статьи >> Архивы >> Ротавирусный гастроэнтерит

Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование частиц ротавируса - Ротавирусный гастроэнтерит

Оглавление
Ротавирусный гастроэнтерит
Этиология
Физико-химические свойства ротавирусов
Культивирование ротавирусов человека
Таксономия ротавирусов
Антигенные взаимоотношения в группе ротавирусов
Эпидемиология
Патологическая анатомия
Патогенез
Иммунитет
Клиника
Клиника - боли в животе, температура, интоксикация
Исследование слизистых оболочек, лимфатических узлов
Исследование пищеварительной функции
Функциональное состояние других органов кровообращения, дыхания
Клиническое течение при эпидемической вспышке
Клиническое течение спорадических случаев
Лабораторные исследования
Обнаружение и исследование частиц ротавируса под электронным микроскопом
Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование частиц ротавируса
Выделение и изучение ротавируса в культурах ткани
Реакция связывания комплемента
Метод иммунофлюоресценции
Реакция иммунопреципитации с окрашиванием преципитатов
Иммунодиффузия
Иммуноэлектроосмофорез
Методы радиоиммунологического исследования
Методы иммуноферментативного исследования
Сравнительная оценка различных методов обнаружения ротавируса
Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов
Реакция связывания комплемента
Реакция нейтрализации вируса
Реакция подавления гемагглютинации
Иммунофлюоресценция
Методы серологического исследования
Диагноз
Лечение
Профилактика
Список литературы

Применение иммуноэлектронной микроскопии [Almeida J., Waterson А., 1969] сыграло решающую роль в изучении ротавирусной этиологии небактериальных гастроэнтеритов, так как. дало возможность не только обнаруживать вирус в фекалиях типичных больных, но и подтвердить его этиологическую роль.
Иммунную сыворотку для проведения иммуноэлектронно- микроскопических исследований получают от реконвалесцентов после типичного ротавирусного гастроэнтерита или от животных (кроликов, морских свинок), иммунизированных ротавирусом обезьян (SA11) или телят (NCDV). Специфичность и титр- антител в иммунных сыворотках определяются в серологических реакциях с вирусами SA11 или NCDV. Разработанный нами метод культивирования ротавируса человека в клеточных культурах [Дроздов С. Г., Шекоян Л. А., Королев М. Б., Анджапаридзе А. Г., 1979, 1980] позволяет использовать чистые препараты этого вируса для иммунизации животных и получать высокоспецифические иммунные сыворотки для иммуноэлектронно-микроскопических и других вирусологических и серологических исследований. В присутствии иммунной сыворотки частицы ротавируса в фекальной суспензии (или в материале тканевой культуры) образуют компактные агрегаты.
Для исследования вируса в фекалиях методом иммуноэлектронной микроскопии 0,1 мл разведенной 1:5 специфической иммунной сыворотки смешивают с 0,4 мл 10% предварительно отцентрифугированной фекальной суспензии. Смесь выдерживают 1 ч при комнатной температуре, а затем 12 ч при 4°С и центрифугируют в течение 90 мин при 15 000 об/мин для осаждения вирусных частиц и специфических вирусных агрегатов. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в нескольких каплях дистиллированной воды, окрашивают 2% фосфорновольфрамовой кислотой при pH 6,5 и наносят на предметные сетки. Изучение препаратов проводят в электронном микроскопе при инструментальном увеличении 50000.

скопления ротавирусных частиц
Рис. 15. Агрегированные скопления ротавирусных частиц, образуемые при инкубации экстракта фекалий больного с сывороткой реконвалесцента. Электронная микроскопия. Негативное контрастирование. Сыворотка несколько маскирует поверхностную структуру вирионов. А — ув. 20 000; Б — ув. 50 000.

При положительных результатах исследования частицы ротавируса выявляются в препаратах в виде специфических агрегатов — иммунных комплексов (рис. 15). Оценку специфичности реакции проводят путем подсчета числа и размеров скоплений, а также по степени покрытия отдельных вирионов иммунными глобулинами. Выраженность этого эффекта при определенном навыке можно оценивать по шкале условных единиц от 0 до + + + + (см. также раздел данной главы об иммуноэлектронно-микроскопических исследованиях антител).
Число частиц в агрегатах обычно колеблется от 3 до 40. Наряду с крупными агрегатами постоянно обнаруживаются одиночные частицы, покрытые слоем иммунных глобулинов. [Дроздов С. Г., Шекоян Л. А., Королев М. Б., Нестерина Л. Ф., 1979].
Таким образом метод иммуноэлектронной микроскопии при введении в исследуемую смесь иммунной сыворотки, в которой ранее определены наличие и титр антител, позволяет установить, что обнаруживаемые в фекалиях вирусные частицы являются ротавирусом. Если используют фекальный материал, в котором обнаружен и идентифицирован ротавирус, иммуноэлектронная микроскопия позволяет исследовать содержание и специфичность антител в сыворотках больных и переболевших ротавирусным гастроэнтеритом в разные сроки болезни и реконвалесценции.



 
« Роль опорно-двигательного аппарата в сохранении работоспособности   Руководство к практическим занятиям по общей гигиене »