Начало >> Статьи >> Архивы >> Ротавирусный гастроэнтерит

Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов - Ротавирусный гастроэнтерит

Оглавление
Ротавирусный гастроэнтерит
Этиология
Физико-химические свойства ротавирусов
Культивирование ротавирусов человека
Таксономия ротавирусов
Антигенные взаимоотношения в группе ротавирусов
Эпидемиология
Патологическая анатомия
Патогенез
Иммунитет
Клиника
Клиника - боли в животе, температура, интоксикация
Исследование слизистых оболочек, лимфатических узлов
Исследование пищеварительной функции
Функциональное состояние других органов кровообращения, дыхания
Клиническое течение при эпидемической вспышке
Клиническое течение спорадических случаев
Лабораторные исследования
Обнаружение и исследование частиц ротавируса под электронным микроскопом
Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование частиц ротавируса
Выделение и изучение ротавируса в культурах ткани
Реакция связывания комплемента
Метод иммунофлюоресценции
Реакция иммунопреципитации с окрашиванием преципитатов
Иммунодиффузия
Иммуноэлектроосмофорез
Методы радиоиммунологического исследования
Методы иммуноферментативного исследования
Сравнительная оценка различных методов обнаружения ротавируса
Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов
Реакция связывания комплемента
Реакция нейтрализации вируса
Реакция подавления гемагглютинации
Иммунофлюоресценция
Методы серологического исследования
Диагноз
Лечение
Профилактика
Список литературы

Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов, обусловленных ротавирусным инфицированием организма
Диагностические серологические исследования при ротавирусном гастроэнтерите обычно имеют целью обнаружить появление в процессе заболевания специфических антител в сыворотке крови. Для этого исследуют две пробы крови — раннюю, взятую в первые 3—4 дня болезни, и позднюю (реконвалесцентную), взятую спустя 12—14 или более дней от начала заболевания. В отдельных случаях исследуют одну пробу сыворотки (большей частью реконвалесцентную), однако трактовка результатов при этом нередко встречает затруднения.
Для серологических исследований берут венозную кровь (лучше натощак, что особенно важно для реакции связывания комплемента), сыворотку освобождают от сгустка и от эритроцитарного осадка и хранят при 4—6°С. Антибиотики и консерванты к сыворотке обычно не добавляют.

Иммуноэлектронно-микроскопические исследования наличия и количества антител

Для обнаружения и определения содержания в сыворотке антител, иммунных к ротавирусу, в качестве антигена используют фекальный препарат, в котором установлено высокое содержание ротавирусных частиц, или суспензию культурального ротавируса человека, или аналогичные препараты ротавирусов животных (обычно для этих целей используют хорошо культивируемые штаммы NCDV и SA11).

Впервые применившие метод иммуноэлектронной микроскопии для количественного обнаружения антител к ротавирусу в сыворотках больных и переболевших острым гастроэнтеритом людей A. Kapikian, Н. Kim и соавт. (1974) использовали в качестве антигена фильтрат (фильтр «Миллипор» с диаметром пор 1,2 мкм) 2% суспензии фекалий больных ротавирусным гастроэнтеритом, приготовленной на телячьем бульоне с 0,5% сывороточного альбумина крупного рогатого скота, освобожденной от грубых частиц центрифугированием при 1000 g в течение 2 ч. Техника соединения сыворотки с антигеном и приготовления препарата для исследования под электронным микроскопом описана в разделе «Методы обнаружения и изучения ротавируса». Авторы оценивали относительную концентрацию антител в исследуемой сыворотке по степени покрытия частиц ротавируса иммунными глобулинами в условных единицах от 0 до + + + + . Четырьмя единицами ( + + + + ) оценивали полное покрытие частиц глобулином, расположенным таким плотным и утолщенным слоем, что им маскируется поверхностная структура частиц. Нулем обозначали отсутствие глобулина на поверхности вирусной частицы. Промежуточные степени покрытия вирионов глобулином оценивали + + +, ++ и + . При исследовании парных сывороток различие в покрытии частиц ротавируса глобулином в + расценивалось как указание на нарастание титра антител.
М. Б. Королев на основе иммуноэлектронной микроскопии разработал метод титрования антител в сыворотках больных и переболевших ротавирусным гастроэнтеритом [Дроздов С. Г., Шекоян Л. А., Королев М. Б., Нестерина Л. Ф., 1979; Королев М. Б., 1980]. Результаты одного из титрований представлены в табл. 16. В серии исследований было показано, что разведение сыворотки хорошо коррелирует с уменьшением расстояния между центрами частиц ротавируса в агрегатах (степень покрытия частиц в агрегатах иммунными глобулинами), а также с количеством антител, покрывающих частицы. Наибольшее число иммунных агрегатов обнаруживается при оптимальном соотношении антигена и антител (разведение сыворотки 1 :80 в табл. 16). Применение титрования антител к ротавирусу методом иммуноэлектронной микроскопии позволило не только проводить диагностические серологические исследования, но и оценить специфичность и чувствительность других серологических методов — реакции нейтрализации ротавируса и реакции торможения гемагглютинации.

Таблица 16. Результаты титрования антител к ротавирусу в сыворотке крови реконвалесцента методом иммуноэлектронной микроскопии

Иммуноэлектронно-микроскопический метод оказался сравнимым по чувствительности с реакцией подавления гемагглютинации и более чувствительным, чем реакция нейтрализации (Дроздов С. Г., Шекоян Л. А., Королев М. Б., Нестерина Л. Ф., 1979].



 
« Роль опорно-двигательного аппарата в сохранении работоспособности   Руководство к практическим занятиям по общей гигиене »