Начало >> Статьи >> Архивы >> Ротавирусный гастроэнтерит

Реакция нейтрализации вируса - Ротавирусный гастроэнтерит

Оглавление
Ротавирусный гастроэнтерит
Этиология
Физико-химические свойства ротавирусов
Культивирование ротавирусов человека
Таксономия ротавирусов
Антигенные взаимоотношения в группе ротавирусов
Эпидемиология
Патологическая анатомия
Патогенез
Иммунитет
Клиника
Клиника - боли в животе, температура, интоксикация
Исследование слизистых оболочек, лимфатических узлов
Исследование пищеварительной функции
Функциональное состояние других органов кровообращения, дыхания
Клиническое течение при эпидемической вспышке
Клиническое течение спорадических случаев
Лабораторные исследования
Обнаружение и исследование частиц ротавируса под электронным микроскопом
Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование частиц ротавируса
Выделение и изучение ротавируса в культурах ткани
Реакция связывания комплемента
Метод иммунофлюоресценции
Реакция иммунопреципитации с окрашиванием преципитатов
Иммунодиффузия
Иммуноэлектроосмофорез
Методы радиоиммунологического исследования
Методы иммуноферментативного исследования
Сравнительная оценка различных методов обнаружения ротавируса
Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов
Реакция связывания комплемента
Реакция нейтрализации вируса
Реакция подавления гемагглютинации
Иммунофлюоресценция
Методы серологического исследования
Диагноз
Лечение
Профилактика
Список литературы

Выработка организмом вирус-нейтрализующих антител в процессе ротавирусной инфекции была показана при изучении диарейных заболеваний животных, в частности, диареи телят Небраски. С. Mebus, R. White и соавт. (1973) разработали метод обнаружения и количественного определения нейтрализующих антител к вирусу NCDV, используя его прямое окрашивание флюоресцирующими антителами.
По этому методу каждое из двукратных последовательных разведений сыворотки смешивают с равным объемом суспензии культурального вируса NCDV, содержащей 200—1000 ТЦД50 в 1 мл, выдерживают 1 ч при 37°С и вносят по 0,2 мл каждой смеси в две пробирки Лейтона (пробирки с плоскостенным углублением в нижней части, куда укладывается покровное стекло) с культурой ткани почек коровьего плода. После инкубирования пробирок в течение 5—6 дней при 37°С покровные стекла с культурой извлекают, клетки фиксируют в холодном ацетоне (5°С), наносят на клеточный слой флюоресцирующую сыворотку, иммунную к вирусу NCDV, и после удаления избытка сыворотки промыванием исследуют препараты под люминесцентным микроскопом. Отсутствие флюоресценции указывает на нейтрализацию вируса. Авторы разработали также модификацию метода, при которой используются вторичные культуры ткани почек коровьего плода, выращенные в обычных пробирках. Смеси равных объемов последовательных двукратных разведений сыворотки и суспензии вируса, содержащей 100 000 ТЦД50 в 1 мл, после инкубирования при 37°С в течение 1 ч вносят по 1 мл в три пробирки с культурой и выдерживают 6 дней при 37°С. Пробирки энергично встряхивают, объединяют культуральную жидкость трех пробирок, центрифугируют 5 мин при 200 g и ресуспендируют клеточный осадок в нескольких каплях надосадочной жидкости. Каплю взвеси наносят на предметное стекло, подсушивают на воздухе, фиксируют в холодном ацетоне и покрывают клеточный слой флюоресцирующей сывороткой, иммунной к вирусу NCDV. По отсутствию флюоресценции в смесях с соответствующим разведением сыворотки определяют титр нейтрализующих антител.
T. Flcwett, A. Bryden, H. Davies и соавт. (1974) при одном из первых серологических исследований ротавирусного гастроэнтерита человека использовали для обнаружения и титрования нейтрализующих антител в сыворотках переболевших метод С. Mebus, R. White и соавт. Размножение вируса NCDV определяли при помощи иммунофлюоресценции, применяя непрямой метод окрашивания.
Использование культивируемого вируса диареи телят Небраски в реакции нейтрализации для исследования сывороточных проб, относящихся к ротавирусному гастроэнтериту человека, имеет тот недостаток, что для выявления вируса NCDV, нс обладающего выраженным цитопатическим действием, необходимо применять иммунофлюоресцентное окрашивание.
После того как было установлено групповое антигенное родство ротавируса человека и вируса обезьян SА11, четкое цитопатическое действие последнего на культивируемые клетки приматов обусловило его преимущественное использование для серологических исследований в реакции нейтрализации. Вирус SA11 хорошо культивируется в первичных, вторичных и перевиваемых культурах клеток приматного происхождения и может эффективно использоваться для серологической диагностики ротавирусного гастроэнтерита в исследовательских и диагностических лабораториях.
При изучении реакции нейтрализации ротавирусов различных видов животных было установлено, что она позволяет выявлять не только групповые, но и видоспецифические антигены [Thouless М., Bryden A. et al., 1977].



 
« Роль опорно-двигательного аппарата в сохранении работоспособности   Руководство к практическим занятиям по общей гигиене »