Начало >> Статьи >> Архивы >> Ротавирусный гастроэнтерит

Иммунофлюоресценция - Ротавирусный гастроэнтерит

Оглавление
Ротавирусный гастроэнтерит
Этиология
Физико-химические свойства ротавирусов
Культивирование ротавирусов человека
Таксономия ротавирусов
Антигенные взаимоотношения в группе ротавирусов
Эпидемиология
Патологическая анатомия
Патогенез
Иммунитет
Клиника
Клиника - боли в животе, температура, интоксикация
Исследование слизистых оболочек, лимфатических узлов
Исследование пищеварительной функции
Функциональное состояние других органов кровообращения, дыхания
Клиническое течение при эпидемической вспышке
Клиническое течение спорадических случаев
Лабораторные исследования
Обнаружение и исследование частиц ротавируса под электронным микроскопом
Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование частиц ротавируса
Выделение и изучение ротавируса в культурах ткани
Реакция связывания комплемента
Метод иммунофлюоресценции
Реакция иммунопреципитации с окрашиванием преципитатов
Иммунодиффузия
Иммуноэлектроосмофорез
Методы радиоиммунологического исследования
Методы иммуноферментативного исследования
Сравнительная оценка различных методов обнаружения ротавируса
Методы обнаружения и изучения иммунологических сдвигов
Реакция связывания комплемента
Реакция нейтрализации вируса
Реакция подавления гемагглютинации
Иммунофлюоресценция
Методы серологического исследования
Диагноз
Лечение
Профилактика
Список литературы

В ранних исследованиях ротавирусного гастроэнтерита человека Т. Flewett, A. Bryden и соавт. (1974) использовали непрямой метод иммунофлюоресценции для выявления и количественного исследования антител к ротавирусу в сыворотках переболевших. С этой целью последовательные разведения испытуемой сыворотки смешивали с равным объемом суспензии вируса диареи телят Небраски и после инкубации в течение 1 ч при 37°С наносили смеси на культуру клеток почек телят, выращенную на покровных стеклах. Спустя 7 дней наличие вируса в клетках культуры определяли непрямым методом иммунофлюоресценции. Авторам удалось выявить нейтрализующие антитела в сыворотках переболевших людей в титрах 1:10—1:80 и в титре 1:320 в препаратах гамма-глобулина человека.
I. Orstavik и К. Haug (1976) использовали метод иммунофлюоресценции для обнаружения в сыворотках переболевших ротавирусным гастроэнтеритом иммунных глобулинов классов М и G. В качестве антигена использовали штамм BDV-27 вируса диареи телят Небраски, адаптированный к клеткам почек приматов. Инфицированные клетки первичной культуры ткани почек зеленых мартышек после развития умеренного цитопатического эффекта отделяли от стекла, суспендировали, смешивали с равным объемом суспензии неинфицированных клеток, центрифугировали и ресуспендировали осадок в 1/5 первоначального объема. Капли суспензии наносили на предметное стекло, подсушивали и фиксировали в охлажденном четыреххлористом углероде. Последовательные разведения исследуемых сывороток, взятых в остром периоде и периоде реконвалесценции (начиная с разведения 1:4), наносили по капле на клетки, фиксированные на стекле, выдерживали 3 ч при 37°С, споласкивали и покрывали соединенной с изотиоцианатом флуоресцеина кроличьей сывороткой, иммунной к глобулину человека класса М. После выдерживания препаратов в течение 1 ч при 37°С их подсушивали, заключали в 90% раствор глицерина и исследовали под люминесцентным микроскопом. Аналогичным образом выявляли иммунные глобулины класса G, используя флюоресцирующую сыворотку кролика, иммунную к глобулинам этого класса. Применяя метод иммунофлюоресцентного анализа, I. Orstavik и К. Haug показали, что иммунные антитела класса М появляются в процессе инфекции ротавирусом раньше, чем антитела класса G, и обнаруживаются в сыворотке больных и переболевших в течение первых 3 нед от начала болезни. В течение 4-й и 5-й недель они обнаруживаются реже, а начиная с 6-й недели не обнаруживаются совсем. Таким образом, выявление антител класса М, иммунных к ротавирусу, указывает на «свежую» ротавирусную инфекцию, а их отсутствие в период 2—5-х недель от начала болезни дает основание исключить ротавирусную этиологию. В связи с быстрым исчезновением антител класса М из крови измерение их титра имеет относительное значение и его падение в течение первых недель болезни следует рассматривать как подтверждение острой ротавирусной инфекции. Антитела класса G, иммунные к ротавирусу, по данным I. Orstavik и\ К.  Haug, начинают обнаруживаться на 2—3-й неделе болезни и сохраняются в сыворотке крови переболевших длительное время. Подтверждением ротавирусной инфекции является их появление и диагностическое нарастание титра (не менее, чем: четырехкратное). Они обнаруживаются в сыворотке крови переболевших в титрах 1 :8—1 :256 и выше.
Т. Morishima, S. Nagayoshi и соавт. (1976) для обнаружения иммунных к ротавирусу глобулинов классов М и G проводили иммунофлюоресцентное исследование, используя культуру клеток почек эмбриона человека, инфицированную суспензией фекалий больного, в которой при электронной микроскопии обнаруживалось большое количество частиц ротавпруса. Суспензию инфицированных клеток, фиксированных на предметном стекле, обрабатывали исследуемой сывороткой и выявляли наличие в препарате иммунных глобулинов нанесением флюоресцирующей кроличьей сыворотки, иммунной к человеческому глобулину класса М или G. Авторы показали, что при сравнении сывороток больных гастроэнтеритом, взятых у больного в остром и раннем реконвалесцентном периодах, удается выявить нарастание титра иммунных антител класса М Т. Morishima, S. Nagayoshi и соавт. отметили также, что иммунные антитела класса G появляются позднее, чем антитела класса Μ.                                                                          
N. Blacklow, Р. Echeverria и D. Smith (1976) применили непрямую реакцию иммунофлюоресценции для массовых серологических обследований с целью изучения возрастного иммунитета к ротавирусу. Вирус NCDV выращивали в однослойной культуре клеток почек коровьего эмбриона на покровных стеклах. Флюоресцирующим компонентом служил козий глобулин, иммунный к глобулиновой фракции сыворотки крови человека. При помощи этого метода авторы обнаружили в различных возрастных группах населения значительное число лиц, иммунных к ротавирусу (от 15 до 80%). Весьма существенным в этих исследованиях явилось достаточно близкое совпадение результатов, полученных при параллельном обследовании одних и тех же сывороток в реакции иммунофлюоресценции с вирусом NCDV и в реакции связывания комплемента с антигенами из вируса NCDV (культуральный препарат) и ротавируса человека (фекальный препарат). Наибольшее количество положительных результатов (61% от 592 исследованных сывороток) было получено методом иммунофлюоресценции с вирусом NCDV.
Возможность использования реакции иммунофлюоресценции с вирусом NCDV для сероэпидемиологических исследовании ротавирусной инфекции человека была подтверждена М. Elias (1977а). При проведении этих исследований было показано также, что антитела, обнаруживаемые в реакциях нейтрализации ротавируса человека и непрямой иммунофлюоресценции с ротавирусом NCDV, выявляются в возрастных группах до 70 лет в титрах 1 : 10—1 : 320 и выше, в то время как комплементсвязывающие антитела с антигеном из вируса NCDV перестают выявляться в разведениях 1 : 10 и выше в возрастных группах старше 3—4 лет.
Метод непрямой иммунофлюоресценции с вирусом NCDV, описанный N. Blacklow, Р. Echeverria и D. Smith (1976), был успешно использован I. Oishi, A. Maeda и соавт. (1979) для серологических диагностических и эпидемиологических исследований вспышек ротавирусного гастроэнтерита.



 
« Роль опорно-двигательного аппарата в сохранении работоспособности   Руководство к практическим занятиям по общей гигиене »